da arte abstracta
Fundo
Porphyromonas gingivalis
tem sido implicado como um importante patógeno no desenvolvimento e na progressão da periodontite crônica. P. gingivalis
formação de biofilme na fenda subgengival desempenha um papel importante na capacidade das bactérias para tolerar os sinais de tensão fora da membrana citoplasmática. Algumas bactérias usar uma subfamília distinta de factores sigma para regular as suas funções extracitoplasmático (a subfamília ECF). O objetivo deste estudo foi determinar se o P. gingivalis
fatores sigma ECF afetar P. gingivalis
formação de biofilme.
Métodos
Para elucidar o papel dos fatores sigma ECF em P. gingivalis
, mutantes cromossómicas que transportam uma interrupção de cada um dos genes que codificam o factor-sigma ECF foram construídos. curvas de crescimento bacteriano foram medidos, determinando a turbidez de culturas bacterianas. A quantidade de biofilme cresce em placas foi avaliada por coloração com violeta de cristal.
Resultados A comparação das curvas de crescimento de tipo selvagem P. gingivalis
estirpe 33277 e os mutantes ECF indicou que a taxa de crescimento dos mutantes era ligeiramente inferior do que a da estirpe de tipo selvagem. Os mutantes e PGN_0274- PGN_1740-defeituosos tinha aumentado a formação de biofilme em comparação com a de tipo selvagem (p
& lt; 0,001); No entanto, os outros mutantes do factor sigma ECF ou as estirpes complementadas não aumentou a formação de biofilme.
Conclusão Estes resultados sugerem que PGN_0274 PGN_1740 e desempenham um papel fundamental na formação do biofilme de P. gingivalis
.
Palavras-chave
extracitoplasmático fator função sigma gingivalis biofilme Porphyromonas
material suplementar doença periodontal Electrónicas | A versão online deste artigo (doi:. 10 1186 /1472-6831-15-4) contém material suplementar, que está disponível para usuários autorizados.
Fundo
a bactéria Porphyromonas gingivalis Gram-negativas anaeróbias
é considerado um dos mais importantes agentes etiológicos da doença periodontal [1]. Para colonizar e sobreviver no sulco gengival, P. gingivalis
deve ser capaz de sentir e responder às condições ambientais prevalecentes, incluindo as variações de temperatura, a tensão de oxigénio, pH, disponibilidade de nutrientes e a presença de outras células bacterianas. P. gingivalis
possui reguladores da transcrição que têm sido implicados na protecção contra o stress ou choque térmico estresse oxidativo, tais como RprY [2, 3] e oxyR [4]. Além disso, esta bactéria e outras bactérias formam biofilmes para proteger contra o stress ambiental [5]. placa dentária, um biofilme de múltiplas espécies, é organizado na superfície do dente e os tecidos periodontais da cavidade oral humana [6]. bactérias orais nos biofilmes sobreviver no sulco gengival durante um longo período de tempo, levando a gengivite, que pode, eventualmente, progredir para periodontite. Compreender como bactérias escapar stress ambiental é muito importante para a prevenção da doença periodontal.
Factores sigma função extracitoplasmático (ECF) servem como reguladores da transcrição bacteriana em resposta a várias tensões. Os de tipo selvagem P. gingivalis
33277 genoma codifica seis fatores ECF sigma (PGN_0274, PGN_0319, PGN_0450, PGN_0970, PGN_1108 e PGN_1740; GenBank: AP009380) [7]. (Número W83 ORF: PG1318) PGN_1108 desempenha um papel na regulação da frequência de mutação na bactéria [8]. (Número W83 ORF: PG0162) PGN_0274 e (número W83 ORF: PG1660) PGN_0450 podem estar envolvidos na regulação pós-transcricional da gingipain [9], e (número W83 ORF: PG1827) PGN_1740 é necessária para a sobrevivência da bactéria na presença de oxigênio e estresse oxidativo, a captação hemina e virulência [9, 10].
neste estudo, analisar o papel dos fatores sigma ECF em P. gingivalis
formação de biofilme, a interrupção dos fatores sigma ECF, excepto PGN_1108, foi realizada. O mutante PGN_1108-defeituosa pode ter um fenótipo mutante, e que, por conseguinte, que o exclui nossas experiências neste estudo [8]. O PGN_0274 e mutantes PGN_1740-defeituosos exibiram reforçada a formação de biofilme, mas as estirpes complementadas não o fez. Estes resultados sugerem que os fatores sigma PGN_0274 e PGN_1740 ECF estão envolvidos na regulação da formação de biofilme na bactéria.
Métodos
cepas bacterianas e condições de cultura de células
Todas as cepas bacterianas e plasmídeos utilizados no presente estudo são listadas na Tabela 1. P. gingivalis
células foram cultivadas anaerobicamente (10% de CO
2, 10% H 2 e 80% N 2) em infusão de coração e cérebro enriquecido (BHI) e na de soja tríptico enriquecido (TS) agar [11]. Para placas de agar de sangue, sangue desfibrinado ovelhas laked foi adicionado em ágar enriquecido com 5% de TS. Para a selecção e manutenção de resistentes a antibióticos de P. gingivalis
estirpes, os seguintes antibióticos foram adicionados ao meio de: 15 ug /ml de eritromicina (Em), e 0,7 ug /ml de tetraciclina (Tc) .table 1 Estirpes bacterianas e plasmídeos utilizada neste estudo
Strain ou plasmídeo
Descrição
referência ou fonte
E. coli
estirpe
DH5a
estirpe hospedeira de uso geral para clonagem
Invitrogen
P. gingivalis
estirpe
33277
tipo selvagem
ATCC
KDP314
PGN_0274 :: ERMF ermAM,
emr
Este estudo
KDP315
PGN_0319 :: ERMF ermAM,
emr
Este estudo
KDP316
PGN_0450 :: ERMF ermAM,
Emr
Este estudo
KDP317
PGN_0970 :: ERMF ermAM,
Emr
Este estudo
KDP319
PGN_1740 :: ERMF ermAM,
Emr
Este estudo
KDP314C
KDP314 /pKD828,
Emr Tcr
Este estudo
KDP319C
KDP319 /pKD829,
Emr Tcr
Este estudo
E. coli
plasmídeo
pGEM-T Easy
Abr vector plasmídeo de clonagem TA
Promega
pKD355
Abr
contém o ERMF ermAM
cassete de DNA entre Eco
RI e Bam HI
de pUC18
12
pKD814
Abr contém o 1.0-kb amplificado por PCR fragmento (região PGN_0450) em pGEM -T Fácil
Este estudo
pKD817
Abr contém o 1.5-kb amplificado por PCR fragmento (região PGN_0274) em pGEM-T Easy
Este estudo
pKD818
Abr contém o 2.0-kb amplificado por PCR fragmento (região PGN_0319) em pGEM-T Easy
Este estudo
pKD819
Abr contém o 2.0-kb amplificado por PCR fragmento (região PGN_0970) em pGEM-T Easy
Este estudo
pKD821
Abr contém o 2.0-kb amplificado por PCR fragmento (região PGN_1740) em pGEM-T Easy
Este estudo
pKD822
o mundo Abr Emr, contém o ERMF ermAM
cassete de DNA em Bam
local HI dentro PGN_0274 de pKD817
Este estudo
pKD823
abril Emr, contém o ERMF ermAM
cassete de DNA em Bam
local HI dentro PGN_0319 de pKD818
Este estudo
pKD824
abril Emr, contém o ERMF ermAM
cassete de DNA em Bam
local HI dentro PGN_0450 de pKD814
Este estudo
pKD825
abril Emr, contém o ERMF ermAM
cassete de DNA em Bgl local
II dentro PGN_0970 de pKD819
Este estudo
pKD827
abril Emr, contém o ERMF ermAM
cassete DNA em Bam
local HI dentro PGN_1740 de pKD821
Este estudo
P. gingivalis
plasmídeo
pT-COW
abril TCR E. coli-P. gingivalis
plasmídeo shuttle
14
pKD828
abril TCR PGN_0274 pT-Cow- +
Este estudo
pKD829
abril TCR PGN_1740 pT-Cow- +
Este estudo
Construção de ECF mutantes fator sigma e estirpes mutantes complementadas
Para perturbar os genes do factor sigma ECF, PGN_0274-, PGN_0319-, PGN_0450-, PGN_0970- e os genes que codificam PGN_1740 foram amplificadas por PCR a partir do ADN cromossómico de P. gingivalis
33277 usando Takara Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Japão) e os iniciadores específicos do gene listados na Tabela 2. as áreas amplificadas foram um fragmento de DNA contendo parte da extremidade 5 'de cada gene do factor sigma ECF e a região a montante do codão de iniciação ATG, e um fragmento de ADN contendo a extremidade 3 'de cada gene do factor sigma e a região a jusante do seu codão de terminação. Ambos os fragmentos foram então ligados no local de clonagem múltiplo do vector de T-(pGEM-T Easy Vector, Promega, Tóquio, Japão). Um Bam HI
-Sac
i de fragmento (Bgl II
-Sac I
para fragmentar PGN_0970) que continha a extremidade 3 'de cada gene do factor sigma foi extraída a partir do plasmídeo resultante e ligado ao Bam
HI-Sac
local I (Bgl II
-Sac I
para fragmentar PGN_0970) do plasmídeo que contém a extremidade 5 'do gene de FEC correspondente. O ERMF
-ermAM
cassete de pKD355 [12] foi inserido no local de Bam HI
dentro PGN_0274 de pKD817, PGN_0319 de pKD818, PGN_0450 de pKD814 e PGN_1740 de pKD821, ou Bgl II
site dentro PGN_0970 de pKD819 para produzir pKD822, pKD823, pKD824, pKD827 e pKD825, respectivamente. Estes plasmídeos foram linearizados por Não
I digestão e introduzido em P. gingivalis
células 33277 por electroporação, como descrito anteriormente [13], resultando em KDP314 (PGN_0274 :: ERMF ermAM
), KDP315 (PGN_0319 :: ERMF ermAM
), KDP316 (PGN_0450 :: ERMF ermAM
), KDP317 (PGN_0970 :: ERMF ermAM
) e KDP319 (PGN_1740 :: ERMF ermAM
). substituição de genes correcta destas estirpes, que tinham sido geradas por acontecimentos de recombinação cruzada dupla, foi verificada por PCR e análise de mancha de Southern (dados não mostrados) .table 2 Os iniciadores utilizados neste estudo
sequência de nucleótidos Nome
(5′-3′)
PGN0274-U-F
TCGACAGTTGATTGCCGAT
PGN0274-U-R-Bam
HI
GGGATCCCCATCGAAAGACTGCAATCTGG
PGN0274-D-F-Bam
HI
GGGATCCCATGACGACGCCGCTCCTGTCGAAA
PGN0274-D-R
TGTGCAAAAAAGGAAACAGC
PGN0319-U-F
GCTGCCGCTCCTTCTTCAT
PGN0319-U-R-Bam
HI
GGGATCCCAAAGGCAGATCGTCCGGTA
PGN0319-D-F-Bam
HI
GGGATCCCCTCCGATCATGCCCCTA
PGN0319-D-R
TCAGGCTCTTGTACAGATGGA
PGN0450-U-F
GGGATGTGGAGAAAAAGGAA
PGN0450-D-R
ATGACCACGGACAGGAAGAT
PGN0970-U-F
ACCGGGAAATAATTCTCAAGC
PGN0970-U-R-Bgl
II
AAGATCTTCCAAAGAGGTCGGATAAGGA
PGN0970-D-F- Bgl
II
AAGATCTTAGGCTGCCGAGGTACAGGA
PGN0970-D-R
ACACAAGCTACAGCCCCGTA
PGN1740-U-F
GAGGATCTCCCTGCCAATAAT
PGN1740-U-R-Bam
HI
GGGATCCCACCCAGCCTTTGAAGTTGACA
PGN1740-D-F-Bam
HI
GGGATCCCGCTCACTGTCATGCGAAAT
PGN1740-D-R
CCAACGGCTATTTAGCATCC
PGN0274-COMP-U-F-Pst
I
CCTGCAGGCTGCTACTGTCTCGGACGTG
PGN0274-COMP-D-R-Bam
HI
GGGATCCCGTTTGTGTTTGAGGCTGCAT
PGN1740-COMP-U-F-Bam
HI
CGGGATCCCGAGTGCGATATCGGGAATCAG
PGN1740-COMP-D-R-Bam
HI
CGGGATCCCGAGTTGATACGGCTGCTATGC
Os locais de restrição incorporados nos oligonucleidos para subclonagem estão em negrito. Compra de complementação de PGN_0274 e PGN_1740, a região do gene inteiro ECF factor de Sigma com as suas regiões flanqueadoras a montante e a jusante (0,5 kb) foi amplificado por PCR a partir do ADN cromossómico utilizando Taq Takara Ex com os iniciadores superior e inferior (Tabela 2). Os fragmentos de ADN amplificados foram ligados no local de clonagem múltipla do vector pGEM T-Easy vector. O
Sph I-Bam Hl do fragmento
PGN_0274 ou fragmento de Bam HI de
PGN_1740 foram extraídos a partir do plasmídeo resultante e ligado no
Sph I-Bam Hl ou Bam
site de HI da pT-COW [14], que foi gentilmente cedido pelo Professor NB Shoemaker (Universidade de Illinois em Urbana-Champaign, EUA). Os plasmídeos resultantes, e pKD828 pKD829, foram introduzidos KDP314 KDP319 ou por electroporação, resultando em KDP314C KDP319C e, respectivamente, após 7 d de incubação em agar de TS enriquecido contendo 0,7 ug /ml de tetraciclina. A presença do plasmídeo pT-COW-derivado foi verificada por PCR e recuperação do ARNm do gene mutante foi criado por RT-PCR (dados não mostrados).
Avaliação da capacidade de formação de biofilme
formação de biofilme foi examinada por o protocolo modificado de Saito [15]. Em breve, P. gingivalis
células foram inoculadas em caldo BHI, e pré-cultivadas anaerobicamente a 37 ° C durante 2 d. culturas totalmente crescida de P. gingivalis
as estirpes tinham turbidez ajustado a um valor OD 660 = 0,1 com meio fresco, e, em seguida, alíquotas de 1,5 ml foram inoculados em colagénio do tipo I-revestido de 12 poços de fundo plano de microplacas ( IWAKI Glass Co., Funabashi, Japão) e foram cultivadas anaerobicamente a 37 ° C durante 2 d. O meio de cultura foi então removido de cada poço e 0,5 ml de solução de violeta de cristal a 0,1% foi adicionado. Após 15 minutos, os poços foram lavados três vezes com PBS e secas ao ar. O violeta de cristal remanescente no biofilme foi solubilizado com 0,5 ml de 1% SDS e a absorvância foi medida a A 600 utilizando um leitor de microplacas (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, EUA). massa de biofilme foi determinada por coloração violeta cristal e ajustado para o crescimento (A 600 unidades por OD 660 unidade).
análise estatística
O one-way teste de comparação múltipla ANOVA Teste /Dunnett foi usado para comparar as diferenças entre 33277 e mutantes ECF utilizando o GraphPad Prism versão 6.0 para Windows (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, EUA). Foram considerados significativos se p & lt
dados; 0.05.
Resultados Crescimento e formação de biofilme capacidade dos P. gingivalis
ECF fator sigma mutantes
Todos os cinco mutantes ECF cresceu mais lentamente do que a estirpe do tipo selvagem na fase exponencial, e os rendimentos finais de os mutantes ECF eram menos do que a do tipo selvagem na sequência de uma 48-h de incubação em condições anaeróbias (Figura 1). O mutante PGN_1740 mostrou notavelmente o crescimento lento em comparação com o tipo selvagem e outros mutantes ECF. Para avaliar a relação entre a actividade de formação de biofilme e de factores sigma ECF, da formação de biofilme foi examinado para a de tipo selvagem e mutantes de cinco ECF. Após a coloração com violeta de cristal do biofilme, que foi solubilizado primeiro com etanol. O violeta de cristal restante no tipo selvagem, PGN_0319, PGN_0450, PGN_0970 e PGN_1740 biofilme mutante foi solubilizado e extraída, mas no mutante PGN_0274, solubilização e extracção não estavam completos (ver arquivo adicionais 1). Assim, a massa de biofilme de todas as estirpes testadas foi dissolvido com SDS e medido. Entre os mutantes ECF, a massa de biofilmes dos mutantes PGN_0274 PGN_1740 e foi maior do que a do tipo selvagem (Figura 2). Para confirmar o colagénio do tipo I influencia a formação de biofilme, foi investigada a formação de biofilme usando uma chapa não revestida. Os resultados foram quase o mesmo (ver arquivo adicionais 2), como o mutante PGN_0274 produziu mais de biofilme do que a do tipo selvagem. No entanto, a estirpe de tipo selvagem e o mutante PGN_1740 não foram estatisticamente diferentes. Este resultado sugeriu que a formação de biofilme pelo mutante PGN_1740 foi influenciada pelo ambiente, tal como a presença de colagénio do tipo I. Figura 1 Crescimento de P. gingivalis e 33277 ECF mutantes fator sigma. As curvas de crescimento de P. gingivalis
33277 (tipo selvagem; círculo), PGN_0274 mutantes (KDP314; retângulo aberto), PGN_0319 mutantes (KDP315; rectângulo fechado), PGN_0450 mutantes (KDP316; diamante), PGN_0970 mutantes (KDP317; triângulo ), PGN_1740 mutante (KDP319; transversal) em caldo BHI enriquecido. Os dados apresentados são a média ± SD de experiências em triplicado.
Figura 2 A formação de biofilme por homot�ica P. gingivalis 33277 ou ECF mutantes fator sigma. As estirpes foram cultivadas em caldo de BHI enriquecido anaerobicamente a 37 ° C em colagénio do tipo I-revestido de 12 poços de fundo plano de microplacas. Após 48 h de cultivo, a massa de biofilme organizada foi avaliada por coloração com violeta de cristal. (A) As fotografias são uma amostra representativa de cada estirpe experimental. (B) formação de biofilme determinada por coloração com violeta de cristal e ajustado para o crescimento (unidades A600 por unidade DO660). Os dados apresentados são a média ± desvio padrão de experiências em triplicado. ***, P Art & lt; 0,001, pelo teste de comparação múltipla de uma ANOVA one-way teste /de Dunnett.
Complementação de mutantes PGN_0274- e PGN_1740-defeituosos
Para determinar se a massa de biofilme foi aumentada causada pela supressão de PGN_0274 e PGN_1740, construímos estirpes onde a PGN_0274 PGN_1740 e foram restaurados. O PGN_0274 e PGN_1740 complementado estirpes foram construídos através da introdução do pT-COW contendo a PGN_0274 de tipo selvagem e PGN_1740 em cada um dos mutantes. Esta complementação restaurou a capacidade para a formação de biofilme os níveis de tipo selvagem (Figura 3). Estes resultados suportam o conceito de que PGN_0274 PGN_1740 e desempenham um papel importante no controle de P. gingivalis
formação de biofilme. Figura 3 formação de biofilme por homot�ica P. gingivalis 33277, ECF fator sigma mutante e complementado estirpe mutante. As estirpes foram cultivadas em caldo de BHI enriquecido anaerobicamente a 37 ° C em colagénio do tipo I-revestido de 12 poços de fundo plano de microplacas. Após 48 h de cultivo, a massa de biofilme organizada foi avaliada por coloração com violeta de cristal. (A) A formação de biofilme de 33277, PGN_0274 mutante e a estirpe mutante complementado foram comparados. (B) a formação de biofilme de 33277, PGN_1740 mutante e a estirpe mutante complementado foram comparados. formação de biofilme determinado pela coloração violeta cristal e ajustado para o crescimento (unidades A600 por unidade DO660). Os dados apresentados são a média ± desvio padrão de experiências em triplicado. *, P Art & lt; 0,05 e ***, p Art & lt; 0.001, por um one-way teste de comparação múltipla ANOVA Teste /Dunnett.
Discussão
Bactérias por vezes, encontrar um ambiente desfavorável para a sua sobrevivência. A microbiota oral humana também é muitas vezes influenciada por várias tensões; portanto, ele deve possuir a capacidade de se defender. Dois principais mecanismos reguladores interagem com regiões citoplasmáticos e extracitoplasmático via fatores sigma ECF alternativas e reguladores de resposta dependente de fosforilação (sistemas de dois componentes, TCS) [16, 17]. factores sigma ECF foram mostrados para regular processos celulares relacionados com o invólucro (envolvendo a manutenção da membrana /arquitectura periplásmico), tais como a secreção, a síntese de exopolissacáridos, exportação de ferro e de efluxo síntese de proteases extracelulares [18]. Polimerase de ARN bacteriana núcleo (composto por duas subunidades a, e a subunidade β subunidade β ') liga-se factores sigma. Múltiplos factores sigma são os factores de iniciação da transcrição bacterianas que permitem a ligação específica de ARN-polimerase de promotores de genes. Em contraste, TCS consistem tipicamente de uma histidina cinase ligado à membrana que detecta um estímulo ambiental específico e um regulador de resposta correspondente que medeia a resposta celular, principalmente através da expressão diferencial de genes alvo [19]. Curiosamente, um regulador transcricional em Methylobacterium extorquens
, PhyR, foi identificado e determinado a combinar domínios de ambos os sistemas [20]. Tomados em conjunto, ECF factores sigma e TCS são factores essenciais que protegem as bactérias de stress ambiental.
Vários P. gingivalis
factores sigma ECF foram anteriormente descritos. No entanto, não há informações sobre os fatores sigma ECF que operem neste bactéria em resposta à formação de biofilme. Em Bacillus subtilis e Pseudomonas aeruginosa
, factores sigma ECF estão envolvidos na regulação do desenvolvimento do biofilme [21, 22]. Neste estudo, nós investigamos se a formação de biofilme de P. gingivalis
é regulado por fatores sigma ECF. Este estudo demonstrou que PGN_0274 e PGN_1740 mutantes produziram maior formação de biofilme do que a obtida com o tipo selvagem ou outros mutantes do factor sigma ECF. A inactivação de PGN_1740 também aumentou a expressão de Fims
ao nível da transcrição [9]. Fímbrias e menores fímbrias monospecies influência biofilmes [23]. O nível de transcrição do fims
foi examinada usando RT-PCR, que mostraram as fims
expressão foi regulada negativamente (ver arquivo adicionais 3). Os resultados mostraram Fims não pode estar envolvida no controlo da formação de biofilme. É necessário mais trabalho para esclarecer este ponto.
O ensaio biofilme revelou que o etanol não dissolver completamente a massa de biofilme e extrair a mancha de violeta cristal durante o biofilme mutante PGN_0274 (ver arquivo adicionais 1). Por isso, dissolveu-se a massa de biofilme com SDS e medido o violeta de cristal resultante presente na amostra. A necessidade de um solvente mais rigorosas sugeriu que a matriz do biofilme em torno do mutante é composta em parte de um componente proteico. As substâncias poliméricas biofilme extracelulares (EPS), composto de exopolissacáridos, proteínas, ácidos nucleicos e lípidos, desempenham um papel como uma estrutura de defesa, protegendo as bactérias do sistema imune do hospedeiro e a terapia antimicrobiana [24]. A proteína é um dos principais componentes de EPS [25]. À medida que as vias metabólicas do mutante PGN_0274 são alteradas pela perda do factor sigma PGN_0274 ECF, os rendimentos de proteínas no mutante PGN_0274 são mais abundantes do que os do tipo selvagem e os outros mutantes. Portanto, nós examinamos o perfil protéico dos mutantes sigma ECF em comparação com o tipo selvagem (ver arquivo adicionais 4). A degradação de 75-K-250-K Da proteínas foram demonstrados na de tipo selvagem, PGN_0319, PGN_0450, PGN_0970 e PGN_1740 mutantes, mas não no mutante PGN_0274. Esta alteração não foi observada na presença de inibidores de proteinase a TLCK e leupeptina. Os perfis de proteínas do tipo selvagem e mutantes sigma ECF foram quase idênticos. Tomados em conjunto, estes resultados sugerem que esta diferença aparente em solubilidade pode ser explicado pela diminuição da actividade Kgp RGP e no mutante PGN_0274 [9]. Kgp suprime a formação de biofilme e RGP controla morfologia microcolônia [26]. A SINR
ortólogo PGN_0088, um regulador transcricional, actua como um regulador negativo da acumulação exopolissacarídeo de tipo selvagem P. gingivalis
[27]. PGN_0274 pode controlar diferentes vias metabólicas que PGN_0088 e atuar como um regulador negativo da acumulação de proteínas.
Em conclusão, nós identificamos que PGN_0274 e PGN_1740 desempenhar um papel-chave em P. gingivalis
formação de biofilme. Estes resultados mostram pela primeira vez que a P. gingivalis
factores sigma ECF estão envolvidos na formação do biofilme. PGN_0274 está envolvido na regulação pós-transcricional da gingipains [8]. Gingipain é um fator de virulência muito importante em P. gingivalis
, porque gingipains destruir periodontais tecido, imunoglobulinas e fatores do complemento [28, 29]. Como PGN_1740 desempenha um papel significativo na resposta ao stress oxidativo na bactéria [8, 9], a sobrevivência do mutante PGN_1740 foi reduzido na presença de células hospedeiras [9]. Observou-se também presente em células Ca9-22 (dados não mostrados). Tomados em conjunto, estes resultados mostram que os factores sigma ECF PGN_0274 PGN_1740 e estão envolvidos na virulência de P. gingivalis
. Outros estudos sobre os papéis dos P. gingivalis
fatores sigma ECF, PGN_0274 e PGN_1740, vai nos ajudar a entender a capacidade de P. gingivalis
para colonizar e sobreviver no sulco gengival e, portanto, atuar como um patógeno humano Conclusões.
a massa do biofilme dos mutantes PGN_0274 PGN_1740 e foi maior do que no tipo selvagem, sugerindo P. gingivalis
função extracitoplasmático Sigma factores PGN_0274 PGN_1740 e estão envolvidos na formação do biofilme.
abreviações
ECF:
função extracitoplasmático
BHI:
infusão de coração e cérebro
TS:
Tryptic soy
Em:
Eritromicina
Tc:
tetraciclina
PCR:
reação em cadeia da polimerase
ANOVA:
análise de variância
TCS:
Two- sistemas de componentes
SDS:
dodecil sulfato de sódio
EPS:.
substâncias poliméricas extracelulares
Declarações
Agradecimentos
Agradecemos aos membros do Departamento de Microbiologia Oral, Dental University Matsumoto, e Microbiologia da faculdade de Odontologia de Tóquio, para discussão útil. Este estudo foi apoiado por um Grant-in-Aid (24792372) para a investigação científica do Ministério da Educação, Ciência, Desporto, Cultura e Tecnologia, Japão, e esta investigação foi também apoiada pela Oral hrc8 Health Science Center Grant da Faculdade de Odontologia de Tóquio e por um Projeto de Universidades Privadas:. correspondente subsídio fundo de MEXT (Ministério da Educação, Cultura, Desporto, Ciência e Tecnologia) do Japão, 2010-2012
material suplementar Electrónicas | 12903_2014_492_MOESM1_ESM.pptx arquivo adicionais 1: comparações de biofilme tratados com etanol ou SDS (PPTX 456 KB) 12903_2014_492_MOESM2_ESM.pptx de arquivo adicionais. 2:. a formação de biofilme por homot�ica P. gingivalis 33277 ou ECF mutantes fator sigma usando microplacas não revestido (PPTX 80 KB) 12903_2014_492_MOESM3_ESM.pptx arquivo adicionais . 3: A expressão RNA de fims em P. gingivalis 33277, PGN_1740 mutante e complementado estirpe mutante (PPTX 101 KB) 12903_2014_492_MOESM4_ESM.pptx de arquivo adicionais. 4: perfil de proteínas em um gel de SDS-PAGE (PPTX 343 KB) interesses conflitantes
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
SO e YK contribuíram igualmente para este trabalho. SO e YK planejou o estudo, realizado a análise experiências e dados, e escreveu o manuscrito. Koji Nakayama, NO e KI participaram no planeamento e de concepção do estudo, bem como na análise de dados. MN e TI realizado o estudo de sobrevivência em células hospedeiras e ajudou a redigir o manuscrito. KS, EK e YS ajudou com os estudos de microbiologia. Keisuke Nakano, TK e HH ajudou com os estudos de microbiologia e supervisionado redação do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
