Abstract
Fundo
rápida cicatrização de feridas de tecido mole oral pode reduzir a possibilidade de infecção e desconforto dos pacientes. Estudos anteriores demonstraram que o aumento da angiogénese é uma forma eficaz para acelerar a reparação de feridas. Neste estudo, para aumentar a angiogénese e a cicatrização de feridas palatinas, dimethyloxalylglycine (DMOG) foi aplicada a um modelo de ferida de rato palatino. DMOG é conhecido por inibir a degradação dependente de oxigénio de hipoxia inducible factor-1 alfa (HIF-1α), que podem conduzir a sobre-regulação de marcadores de angiogénese, favorecendo a reparação da ferida. Também foram avaliados os efeitos de DMOG sobre migração celular e expressão HIF-1α de células palatais rato (PR). Além disso, o ARNm e a expressão da proteína do factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) foram analisadas em células tratadas com RP DMOG.
Métodos
As culturas primárias de células de rato palatino (RP) foram obtidos a partir de ratos Sprague-Dawley (SD) ratos. Efeitos de DMOG sobre a viabilidade das células e a migração das células RP foram avaliadas usando uma inserção de formazano e a cultura, respectivamente. mARN de VEGF foi observada por PCR em tempo real, e proteínas VEGF e HIF-1a foram detectados por Western blotting. Para o estudo animal, feridas excisionais, 3 mm de diâmetro, foram feitas na parte central do palato de ratos SD. DMOG com pomada de ácido hialurônico foi aplicados topicamente três vezes durante uma semana, e os encerramentos em seguida, feridas foram quantificados fotograficamente e histologicamente.
Resultados
DMOG foi citotóxico para as células RP em concentrações superiores a 2 mM e não afetou a migração de células em as concentrações não citotóxicas. ARNm e expressão de proteína do VEGF foram significativamente estimulada por tratamento DMOG. O nível de proteína do HIF-1α também foi estabilizada em células por RP DMOG. No estudo animal, grupos tratados com 1 mg /ml DMOG mostrou um aumento de contraturas ferida palatinas rato.
Conclusões
DMOG reforçada cicatrização da mucosa do palato de rato, que foi provavelmente devido ao efeito angiogénico do agente.
Palavras-chave
Dimethyloxalylglycine hipoxia-inducible factor 1 alfa de crescimento endotelial vascular factor de palatal mucosa ferida fundo healing
tecidos moles orais são inevitavelmente danificado durante o enxerto autógeno gengival, cirurgia periodontal, ou cirurgia de implante dentário. Recuperação de tecido mole de lesões depende do tamanho da ferida, localização, condição de higiene oral, e o nível de imunidade. A administração oral ou aplicação tópica de antibióticos é recomendada como uma opção de tratamento de feridas orais para prevenir a infecção bacteriana. No caso de defeitos de grande porte que podem ser causadas por enxertos gengivais autógeno, materiais de decoração são usados para proteger áreas doadoras danificadas e para ajudar o processo de cicatrização de feridas. Destina-se uma rápida cicatrização da ferida pode também reduzir a possibilidade de infecção e desconforto dos pacientes. Num estudo anterior, a aceleração da reparação da mucosa do palato foi conseguida com um andaime de colagénio-a gelatina mantendo o factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF), um potente indutor da angiogénese [1]. β timosina
4 (Tβ 4), um oligop�tido que podem sequestrar monômeros G-actina, também promove a cicatrização de feridas de mucosa de ratos [2]. Aperfeiçoamento da migração celular e angiogénese é susceptível de ser envolvido na cicatrização de feridas por Tβ 4. Umeki et ai. demonstraram que a cicatrização de feridas da mucosa bucal é acelerada pela leptina, uma hormona anti-obesidade em circulação, através de melhoramento da angiogénese [3]. Estes estudos implicam que o realce da angiogénese é uma forma eficaz para acelerar a cicatrização de feridas orais.
A angiogénese pode ser estimulada por vários factores de crescimento tais como o factor de crescimento de fibroblastos (FGF) [4], o factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) [5] , factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) [6, 7], e factor de crescimento transformante β (TGF-β) [8, 9]. Vários péptidos também têm sido relatados para promover a angiogénese [10-12]. Considerando a importância de a angiogénese na cicatrização de feridas, é esperado que a aplicação de proteínas angiogénicas e péptidos para feridas para acelerar a reparação de danos nos tecidos oral se as moléculas estão adequadamente apresentadas para os locais das feridas. No entanto, a estabilidade ea atividade de proteínas e peptídeos não pode ser assegurada no meio bucal, onde a temperatura e pH são mutáveis devido a comer e beber. Em vez disso, pequenas moléculas angiogénicos que são quimicamente estável pode ser mais apropriado para as duras condições da cavidade oral.
Dimethyloxalylglycine (DMOG), com um peso molecular pequeno, é um inibidor não específico de células-permeável de hidroxilases prolil (PhDs) [13 ]. Sob condições de normóxia, PhD2 é conhecido para hidroxilar resíduos de prolina específicos em HIF-1α, que conduz então a uma degradação do HIF-1α pela via da ubiquitina-proteassoma [14-16]. Por conseguinte, a inibição da PhD2 por DMOG pode evitar a degradação de HIF-1α, criando um ambiente semelhante ao encontrado em células hipóxicas. Além disso, vários genes relacionados com a reparação de tecidos, tais como angiogênese são upregulated. Um estudo anterior demonstrou que DMOG aumenta a produção de VEGF em células de fibroblastos periodontais [17]. Além disso, Botusan et ai. demonstraram que estabiliza DMOG HIF-1α e aumenta dérmica cicatrização de feridas em ratos diabéticos [18]. Neste estudo, o efeito da DMOG na cicatrização de feridas oral foi investigado num modelo de ferida palatino rato. Também foram avaliados os efeitos de DMOG sobre migração celular e expressão HIF-1α de células palatais rato (PR). Além disso, o ARNm e a expressão da proteína do factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) foram analisadas em células tratadas com RP DMOG.
Métodos
reagentes químicos e de cultura de células
meio de cultura celular e os antibióticos foram adquiridos de WELGENE Inc. ( Daegu, Coreia do Sul). de soro bovino fetal (FBS) foi adquirido a partir de Lonza (Basileia, Suíça), e outros reagentes experimentais foram obtidos a partir de Sigma-Aldrich Co. (Saint Louis, MO, EUA), a menos que especificado de outra forma. As células foram RP
isolado a partir da palatinas tecidos de ratos de 5 semanas de idade do sexo masculino Sprague-Dawley (SD). tecidos palatinas isoladas foram lavadas com solução salina de fosfato tamponada (PBS) (pH 7,4), assepticamente triturada em pedaços e, em seguida imersos em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) contendo 10% FBS e solução de antibiótico (100 U /ml de penicilina-G e 100 ug /ml de estreptomicina) a 37 ° C numa incubadora humidificada (5% de CO 2/95% ar). Após 20 dias de cultura, com mudanças de meio com intervalos de 3 dias, as células foram recolhidas de RP e sub-cultivadas sob as mesmas condições. Passagens de três a cinco foram usados para este estudo. Apesar de não identificar o tipo de células palatinas no nível molecular, as características morfológicas das células isoladas sob o microscópio indicou dominância distinta de células de fibroblastos-like.
Citotoxicidade
células RP incubado até 80% confluentes foram removidos e sub-cultivadas a 0,8 x 10 5 células por ml em placas de 96 poços e incubou-se a 37 ° C com 5% de CO 2 no ar, durante 24 h, e, em seguida, as células foram tratadas com DMOG a várias concentrações varia de 0,1 a 10 mM. Após tratamento durante 24 h, as viabilidades celulares foram quantificadas utilizando o Cell Counting Kit-8 (WST-8) (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japão). As células foram incubadas em 100 ul de solução de WST-8 durante 1 h a 37 ° C numa atmosfera humidificada (5% de CO 2/95% ar). A absorvância foi medida a um comprimento de onda de 450 nm utilizando um leitor de placas (nascer do sol, TECAN, Salzburg, Áustria). A densidade óptica das células não tratadas, foi designado como 100%, e a viabilidade celular das células tratadas foi expressa como a percentagem de controlo negativo não tratada.
Migração celular ensaio
Para o ensaio in vitro
migração celular, uma cultura inserir (Ibidi GmbH, Martinsried, Alemanha) foi utilizada para criar uma ferida em cultura de células. A inserção de cultura foi colocada num prato de cultura, e 70 ul de suspensão de células RP (5 × 10 5 células /ml) foi adicionado em ambos os poços de inserção. As células RP foram incubadas a 37 ° C durante 48 h e, em seguida, expostos a DMOG (0, 0,1, 0,5, 1, 2 mM) em meio de cultura contendo 2% FBS para a análise de migração celular. o fechamento da ferida foi observada e registada em intervalos sob um microscópio de contraste de fase (Olympus, Tóquio, Japão). Para quantificar a migração celular, a área descoberta onde não há células estavam presentes foi medida usando o programa ImageJ, e a relação da área não coberta entre o controlo não tratado e os grupos tratados foi obtido. A análise da expressão de ARNm
por PCR em tempo real O
efeito de DMOG sobre a expressão de ARNm de VEGF foi investigado por ensaio em tempo real de reacção em cadeia da polimerase (RT-PCR). Após o tratamento com DMOG a 0, 0,1, 0,5, 1, e 2 mM durante 24 horas, o ARN total foi isolado utilizando o reagente de extracção de ARN (ARN total WelPrep Reagente de Isolamento, WELGENE Inc.). A partir do ARN total, o ADNc foi preparado utilizando um kit de síntese de ADNc (Potência de cDNA Synthesis Kit, Intron Biotecnologia, Sungnam, Coreia), e RT-PCR foi realizada em um ABI Prism 7500 Sequence Detection System Thermal Cycler (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA), com volumes de reacção de 20 ul contendo 10 ul de pré-mistura SYBR Ex Taq (Takara Bio, Otsu, Japão), 0,4 uL de corante ROX Referência II (Takara Bio), ADNc, e os iniciadores. Os iniciadores para a amplificação do gene foram como se segue: sentido de VEGF, 5'-GAGTATATCTTCAAGCCGTCCTGT-3 '; anti-sentido de VEGF, 5'-ATCTGCATAGTGACGTTGCTCTC-3 '; GAPDH (gliceraldeído-3-fosfato) sentido, 5'-TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '; GAPDH anti-sentido, 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3 '. As condições de PCR foram 95 ° C durante 30 s, seguido por 40 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 5 s e hibridação a 63 ° C (34 s) para o VEGF. Todas as reacções foram realizadas em triplicado. A expressão de genes foi avaliada na base do ciclo limiar (valor CT) e normalizado para a expressão do gene GAPDH.
análise Western blot
análise de Western blot foi realizada para examinar a expressão da proteína de HIF-1α e VEGF em DMOG-tratados células palatinas. Após o tratamento com DMOG a várias concentrações durante 24 h, as células foram lisadas em tampão de extracção contendo 50 mM de Tris base-HCl (pH 7,5), NaCl 150 mM, 0,5% de Triton-X 100, e um comprimido de cocktail de inibidor de protease (1 comprimido /10 mL, Roche Applied Science, Mannheim, Alemanha) durante 45 min em gelo. Extractos contendo quantidades iguais de proteína foram corridos em 10% de sulfato de dodecilo de sódio géis de poliacrilamida e transferidos para membranas de difluoreto de polivinilideno. As membranas foram incubadas com anticorpos policlonais de coelho contra o VEGF, HIF-1α, ou GAPDH em PBST (PBS contendo 0,1% de Tween 20) durante 1,5 h, lavou-se três vezes com PBST, e depois sondado com anticorpos secundários de cabra anti-coelho conjugada com rábano peroxidase. As bandas de proteína foram visualizadas usando um kit de quimiluminescência (WEST-ZOL mais ocidental Sistema de Detecção Blot, Intron Biotecnologia). A quimioluminescência foi detectada utilizando o LAS 1000 Plus luminescentes analisador de imagem (Fuji Photo Film, Tóquio, Japão). Todos os anticorpos foram adquiridos a partir de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, EUA).
Rato palatino ferida cura ensaio
Depois de confirmar o efeito da angiogénese em células DMOG RP, o efeito de DMOG na cicatrização de feridas de tecido palatino estava realizado num modelo de ferida palatino rato. Todos os ratos foram alojados em (SPF) condições específicas isentos de agentes patogénicos em animais centro da experimental de Seoul National University Dental School. Dezoito ratos de 13 semanas de idade, machos SD (seis ratos por cada grupo), pesando 300-350 g, foram utilizados no presente estudo. Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Animal Care and Use (SNU-130123-8-1) da Universidade Nacional de Seul (Seoul, Korea). Sob anestesia geral, feridas perfurados foram feitos sobre uma área central de palato duro com uma biópsia de 3 mm de diâmetro perfurador descartável (Kai Industries Ltd., Gifu, Japão), a exposição de uma área circular de osso nu. ácido (HA) pomada Hialurónico (20 mg /ml) contendo 0, 0,5, ou 1 mg /ml (5,7 mM) DMOG foi aplicada à área da ferida. Após a cirurgia, os animais foram alimentados com uma dieta padrão de pelotas e água com enrofloxacina. Os agentes foram re-aplicadas nos dias 2 e 4, sob anestesia para reduzir o stress, e os ratos foram sacrificados no dia 7. O palato duro foi separada, e a área da ferida foi observada com um microscópio estereoscópico (Nikon, Tokyo, Japão) e por análise histológica. A área da ferida nas imagens microscópicas foi calculada usando software CellSense Dimensão 1,6 (Olympus, Tóquio, Japão). espécimes palatinas foram levados para avaliação histomorfométrica e as amostras foram coradas com hematoxilina e eosina (H & amp; E) coloração. Mais do que dez lâminas para cada amostra foram preparados, seleccionados e uma secção que exibiu o maior diâmetro da ferida para análise histológica. As secções foram examinadas com um microscópio óptico (Olympus), e a distância dos bordos da ferida em cada secção foi medida com um micrómetro ocular calibrada. A análise estatística
Para análise estatística, cada experiência foi executada em triplicado, a menos que especificado em contrário . Os dados são expressos como a média ± desvio padrão. As análises estatísticas foram determinadas por ANOVA de uma via para o estudo in vivo e ensaio de migração celular. t de Student não pareado
-test foi usado para o outro in vitro
resultados. A P
-valor & lt; 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
Resultados da viabilidade celular e migração de células palatais ratos tratados com DMOG
Para investigar os efeitos da DMOG sobre a viabilidade das células, as células palatais ratos foram expostos a DMOG por 24 h. A citotoxicidade de DMOG foi demonstrada a concentrações mais elevadas do que 2 mm. A viabilidade celular foi reduzida para 60% a 4 mM, e foi prejudicada principalmente em 8 mm (Fig. 1). A migração celular foi observada em meio de cultura contendo 2% de FBS para atenuar a motilidade celular. Na ausência de FBS, as células não tratadas palatinas não exibir qualquer movimento durante 48 horas (dados não mostrados). No meio com FBS a 2%, um ligeiro movimento das células foi mostrado em 12 h, e a cerca de metade da área de vazio foi preenchido com células penetraram às 48 h. A migração celular durante 48 horas não foi afectada pela DMOG em concentrações não citotóxicas (0-2 mM) (Fig. 2). Figura 1 Efeito de DMOG sobre a viabilidade das células RP. RP células foram tratadas com DMOG em concentrações que variam de 0 a 10 mM durante 24 h. Dados de erro e as barras indicam o médias ± DP de três experiências independentes. * Demonstra um (P Art & lt; 0,05) estatisticamente significativa diferença entre controle e células tratadas
Fig migração 2 celular de células RP-tratados DMOG. (A) fotomicrografias representativos de um ensaio de migração de células. RP células foram tratadas com DMOG em diferentes concentrações em meio de cultura contendo FBS a 2% para o ensaio de migração de células com 40X de ampliação. (B) A análise quantitativa da migração celular. A migração celular foi quantificada através do cálculo da razão entre uma área livre de células e ocupada por células no interior do espaço da ferida. Não houve diferenças estatisticamente significativas entre todos os grupos apareceu no mesmo ponto de tempo (P
& lt; 0,05)
ARNm e expressão de proteína do gene VEGF e os níveis de proteína de HIF-1a em células tratadas com DMOG
ARNm e proteínas expressão de VEGF foi quantificado para investigar os efeitos de DMOG na angiogénese ao nível molecular. Como mostrado na Fig. 3A, DMOG expressão aumentada do gene de forma dose-dependente de VEGF em células de RP. O tratamento com DMOG de 0,5 mM mostraram um aumento na quantidade de ARNm de VEGF que foi significativamente maior do que a do grupo de controlo, e DMOG 2 mM provocou um aumento de 2,3 vezes nos níveis de ARNm (Fig. 3A). A expressão da proteína de VEGF foi também sobre-regulada por DMOG em concentrações superiores a 0,5 mM. Ao contrário do padrão dose-dependente da expressão de ARNm em células tratadas com DMOG, um nível de 3,4 vezes maior de proteína foi mantida em concentrações DMOG entre 0,5 e 2 mm (Fig. 3B). Fig expressão de ARNm 3, da expressão do gene de VEGF e proteína VEGF e de HIF-1α em células tratadas com DMOG. RP células foram tratadas com DMOG em concentrações que variam de 0 a 2 mM durante 24 h. Dados de erro e as barras indicam o médias ± DP de três experiências independentes. * Demonstra ARNm (A) e expressão da proteína (B) os níveis que são significativamente diferentes das células de controlo não tratadas (P
& lt; 0,05)
A estabilidade da proteína HIF-1α em células RP foi também afectada pela DMOG . Quantidades maiores de proteína HIF-1α foram detectados em células tratadas com DMOG mesmo a 0,1 mm que não causam uma mudança no nível da proteína de VEGF (Fig. 3B). Um aumento de 2,6 vezes nos níveis de proteína de HIF-1α foi demonstrada em células que foram tratadas com DMOG 0,5 mM. Nenhuma outra aumento significativo nos níveis de proteína foi mostrado em concentrações mais elevadas, o que indica que a 0,5 mM de DMOG é suficiente para estabilizar toda a quantidade de proteína HIF-1α em células.
Os efeitos de DMOG na cicatrização de feridas em ratos palatino
em um modelo de ferida palatino rato, DMOG foi aplicado em duas concentrações: 0,5 e 1 mg /ml. O grupo tratado com DMOG não apresentem quaisquer sintomas de anormalidade fisiológica durante o período experimental. Como mostrado na Fig. 4A, a zona da ferida não foi completamente epitelizada em uma semana, e foi prontamente distinguido a partir de tecido não danificado intacta que era cor-de-rosa pálido no. A área média de superfície da ferida no grupo controle foi de 2,4 milímetros 2. No grupo de teste tratado com DMOG a 1 mg /ml, a área da ferida foi reduzida a 1,8 mm 2, que é modesto, mas ainda uma diminuição estatisticamente significativa. A 0,5 mg /mL, não afectou DMOG de encerramento de feridas. Figura 4 Efeitos da DMOG na cicatrização de feridas palatino. (A) imagens de microscópio estereoscópico de feridas palatais uma semana após a cirurgia. DMOG foi aplicada topicamente a grupos de teste (B1
-b6
: 0,5 mg /ml, C1-C6
: 1 mg /ml), e foi aplicado veículo (20 mg /mL de HA) para controlar grupos (a1
-a6
) (barra de escala: 1 mm). (B) a área da ferida calculada a partir das imagens de microscópio estereoscópico. * Indica uma diferença significativa na área da ferida palatino comparada com a dos grupos de controlo não tratadas (P
& lt; 0,05)
para confirmar os resultados mostrados na Fig. 4A, a distância máxima da região unepithelized (distância da margem da ferida) foi medido em cortes histológicos de área da ferida. A distância também foi reduzida em ratos que foram tratados com 1 mg /ml DMOG, enquanto não houve diferença estatisticamente significativa na distância da margem da ferida entre os grupos tratados com DMOG (Fig. 5) de controlo e 0,5 mg /ml. Portanto, DMOG claramente acelerou a cicatrização de feridas em ratos palatino numa determinada concentração. Fig 5 observação histológica. (A) hematoxilina Representante e eosina (H & amp; E) coloração fotografias (a
: estrato córneo, b
: epitélio, c
: tecido conjuntivo, d
: maxilas) (Barra de escala: 500 uM). (B) Os valores médios da largura máxima ferida palatina calculado a partir dos cortes corados com HE. * Indica uma diferença significativa na largura da ferida palatino de grupos tratados com DMOG comparada com a dos grupos de controlo não tratadas (P
& lt; 0,05)
Discussão
prolil hidroxilase HIF inibidores têm sido investigados para encontrar um novo medicamento para o tratamento de anemia, doença renal e insuficiência cardíaca [19, 20]. Promoção da angiogénese é um efeito terapêutico das drogas novas em desenvolvimento alvo, porque a angiogénese é um passo necessário inevitavelmente na regeneração do tecido ou cicatrização de feridas.
Observou-se o efeito de DMOG, um inibidor da prolil hidroxilase HIF-1α, na cicatrização de feridas de rato mucosa palatal. Para in vitro
estudos, citotoxicidade e a capacidade de regular VEGF e HIF-1α em células com origem em tecidos palatinos ratos foram investigados. A citotoxicidade contra as células de DMOG palatinas rato apareceu em concentrações relativamente elevadas (Fig. 1). Acumulação de proteína HIF-1α não é provável uma causa directa da morte celular, porque o nível intracelular de HIF-1α já foi saturada a 0,5 mM e não foi alterada até 2,0 mm. Um estudo anterior reportado a paragem do ciclo celular por inibidores de PHD [21], que fornece uma possível explicação para os efeitos tóxicos de DMOG. Desde citotoxicidade, sem dúvida, pode perturbar a reparação dos tecidos, as concentrações DMOG para estudos in vivo devem ser cuidadosamente escolhidos para provocar um efeito de cicatrização de feridas. Marchbank et ai. demonstrado que estimula a migração de DMOG estômago humano e células de carcinoma do cólon [22]. No entanto, uma redução na migração de células único tem sido observada no estado de hipoxia de certas células de fibroblastos [23]. Portanto, o efeito de hipóxia ou HIF-1α acumulação sobre a migração celular é a célula de tipo específico. A mobilidade das células palatais rato neste estudo não foi promovido pela DMOG (Fig. 2), o que sugere que a migração de células palatais tipo fibroblasto não foi um fator determinante na cicatrização de feridas de células palatais tratados DMOG.
Anteriormente, foi demonstrado que os inibidores de PHD sobre-regular a expressão de VEGF em vários tipos de células, incluindo células endoteliais [24], as células epiteliais [25], fibroblastos gengivais e ligamentos periodontais [17]. De acordo com os resultados destes estudos, o presente estudo confirmou também a capacidade de DMOG para sobre-regular a expressão de VEGF (Fig. 3) em células semelhantes a fibroblastos de rato palatinas. DMOG também induziu a estabilização da proteína HIF-1α, ea gama de concentrações eficazes foi sobreposta exceto para 0,1 mM em que só a proteína HIF-1α, mas não VEGF foi regulado para cima. Isto indica que o VEGF não pode ser induzida na ausência de aumentos óbvias na quantidade de HIF-1α. Além disso, a estabilização de HIF-1α também é conhecido por induzir um transportador da glucose e quinase-1, o que pode melhorar a cicatrização de feridas através do aumento da re-epitelização [26] fosfoglicerato.
Por causa da condição húmida da cavidade oral na experiência com animais, foi necessário empregar um veículo para prolongar o período residual de uma droga na área da ferida. Como um veículo para a entrega de DMOG a mucosa oral no presente estudo, foi utilizado um hidrogel de ácido hialurónico, devido à sua alta viscosidade e uma excelente biocompatibilidade; menos citotóxica e não há efeitos inflamatórias ou alérgicas. No entanto, o ambiente bucal é extremamente dinâmico. Alimentos, saliva e água potável pode remover rapidamente os hidrogéis de aplicação tópica. No presente estudo, a estrutura porosa do hidrogel de ácido hialurónico não foi observada nas secções HE corados, indicando que o ácido hialurónico e incorporada DMOG tinha sido lavado para longe da área da ferida antes do sacrifício no dia 7. Por isso, não foi possível estimar um valor válido de DMOG para a cicatrização de feridas. Neste estudo, DMOG foi aplicado a 0,5 e 1 mg /ml. Uma redução modesta mas estatisticamente significativa na área da ferida e da distância ocorreu apenas a 1 mg /ml (Figs. 4 e 5). Um veículo mais durável e o aumento da concentração de DMOG poderia acelerar ainda mais a cura da ferida palatino. No entanto, os resultados deste estudo demonstram que fez HIF-1α é um alvo potente da cicatrização de feridas em tecidos orais.
Conclusões A expressão de ARNm de VEGF em células de RP foi reforçada por DMOG. E a expressão da proteína VEGF HIF-1α também foram aumentadas significativamente por meio do tratamento com DMOG. A aplicação tópica de 1 mg /ml DMOG com pomada de ácido hialurónico acelerou significativamente a cicatrização de feridas em ratos palatinas. Estes resultados demonstram a utilidade de DMOG para a promoção da cicatrização de feridas dos tecidos moles bucais
abreviações
DMEM:.
Meio de Eagle modificado por Dulbecco
DMOG:
Dimethyloxalylglycine
HA:
ácido hialurônico
HIF-1α:
hipóxia inducible factor-1 alfa
doutores:
prolil hidroxilases
RP:
Rat palatal
TGF- β:
fator de crescimento transformador β
VEGF:
fator de crescimento endotelial vascular
Declarações
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado por uma bolsa da Coréia Saúde Tecnologia R & amp; D projeto, Ministério da Saúde & amp; Bem-estar, República da Coreia (HI12C0735).
Competindo interesses
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes. Contribuições
dos autores
YHC contribuiu para planejar e projetar o estudo. ZT realizada a maior parte da análise do trabalho de laboratório e dados. PHC e SKM participaram do estudo animal. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
