RESUMO
O objetivo deste estudo foi utilizar um ensaio imunoenzimático para determinar se a difusão de tetraciclina ocorre através da dentina radicular de dentes humanos extraídos. Vinte e um raízes foram mecanicamente preparada e, em seguida, divididos em três grupos: experimental (G1; n = 15; impregnados com tetraciclina guta-percha (TGP) com MCS aferidor); controle negativo (G2, n = 3; guta percha simples com MCS selador) e controle MCS (G4, n = 3; TGP sem cimento). Todas as raízes foram coronalmente selado e, em seguida, imersas em solução salina. Três amostras adicionais foram utilizados como controlo positivo (G3, n = 3; um cone de TGP livre n salina). Os resultados mostraram significativamente mais difusão tetraciclina entre o Grupo 3 e todos os outros grupos. Não houve diferença significativa entre os grupos 1, 2 e 4. difusão máxima foi observada às 24 horas, no entanto, a taxa de difusão deixados significativamente. Dentes obturados com TGP e MCS aferidor não mostraram qualquer difusão de tetraciclina acima de uma média de 0,006 g /ml dentro dos prazos testado.
Caminhos de transmissão de doenças entre o periodonto e do sistema de canal radicular pode ocorrer por meio de patentes canais laterais e acessórios, túbulos dentinários ou formamina.1 apical Simon et al. (1972) propuseram uma classificação de lesões endodontic-periodontais e sugeriu que o tratamento destes dentes requerem tanto therapy.2 endodontia e periodontal Como endodontia é muito eficaz quando realizada devidamente, o prognóstico geralmente vai depender da quantidade de suporte ósseo perdido a partir da que acompanha a periodontite ea capacidade do tratamento periodontal para resolver a terapia periodontal defect.3 residual pode incluir desbridamento profunda raiz, a entrega sistêmica ou local de antibióticos e anti-sépticos, a ressecção de raiz, terapia regenerativa ou erupção forçada.
sistêmica e localmente tetraciclina entregue tem sido amplamente utilizado no tratamento de vários tipos de doenças periodontais que são refractory.4 tem um amplo espectro de actividade contra várias bactérias gram-positivas e gram-negativas. A entrega sistémica de tetraciclina tende a concentrar-se nos ossos e nos dentes, devido à sua capacidade para se ligarem a matrizes mineralizadas dentinários e a sua libertação lenta a partir de dentina faz com que o seu efeito antimicrobiano substantiva. Doses repetidas de tetracylcine oral, foram encontradas para atingir os níveis de fluido das fendas gengivais que são duas a quatro vezes maior do que os níveis sanguíneos, criando, assim, um reservatório acima da concentração inibitória mínima para a maioria das bactérias patogénicas encontrados no bucal cavity.4-6
Além disso, a tetraciclina, contrariamente à maioria dos agentes antimicrobianos alcalinas, é estável em ambientes ácidos e permanece eficaz no tissue.7 perirradicular inflamado tetraciclina também foi encontrada para inibir a actividade da colagenase e assim a reabsorção óssea.
Um amplamente utilizado localmente entregues ligamento periodontal impregnados com tetraciclina é Actisite (Alza Corp., Palo Alto, CA). Estas fibras são inseridas em bolsas periodontais subgengival para aumentar ainda mais as concentrações no fluido crevicular gengival e pode manter as concentrações em excesso de 1,300 g /ml durante 10 dias, 5 uma concentração que é muito para além da concentração inibitória mínima (MIC) gama de 0.016- 2,000 g /ml necessárias para inibir o crescimento de 90 por cento de endodontia periodontais e agentes patogénicos em Estudos vitro.8 mostram que a terapia combinada de raspagem e alisamento radicular fibras mais tetraciclina resulta em significativamente menos locais de progressão da doença após um ano de acompanhamento, quando comparada à raspagem e alisamento radicular alone.9 Além disso, a entrega local de tetraciclina minimiza o potencial para o desenvolvimento de drogas resistance.10
do ponto de vista endodôntico, contendo iodofórmio guta percha, MGP (Lone Star Technologies, Westport, CT) e mais recentemente, impregnado com tetraciclina guta percha (TGP), (Medidenta International Inc., Woodside, NY) foram patenteados por Dr. Howard Martin, a fim de evitar a contaminação bacteriana após tratamento7 endodontia (Fig. 1). Além disso, o Dr. Martin recomenda o uso de sua TGP em combinação com o seu patenteado zinco selante contendo iodofórmio eugenol óxido, MCS, (tecnologias da Estrela Solitária, Westport, CT) quando obturar dentes com longa data infections.11
Estudos têm demonstrado que muitas técnicas de aplicação aferidor só conseguem cobrir 25% a 75% do canal walls.12 Além disso, foram mostrados selantes para reabsorver com a exposição prolongada ao tecido fluid.13 assim, é provável que os portais de saída permanecem patente através do qual periodontal e tecidos periapicais podem entrar em contacto directo com o TGP. Esta fonte de umidade, teoricamente ativar TGP e causar a liberação de tetraciclina. A tetraciclina então difundir-se através e liga-se a canais laterais ou túbulos dentinários para actuar como um reservatório de material tetracycline.7
capacidade de tetraciclina Dada a difundir-se através e ligam-se a dentina, 7 TGP podem ter o potencial de ser usada como um novo sistema de entrega de droga local em situações clínicas que requerem tanto a terapia endodôntica e periodontal
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O objetivo deste estudo foi utilizar um ensaio imunoenzimático para determinar se a difusão de tetraciclina ocorre através da dentina radicular de dentes humanos extraídos obturados com TGP e MCS aferidor
MATERIAIS e MÉTODOS
Fase 1:. Specimen preparação e amostra de soro fisiológico coleção
foram selecionados Vinte e um dentes humanos extraídos para o estudo e armazenados em água da torneira. Os dentes eram do tipo centrais para os segundos molares. As coroas foram removidas, todas as lesões de cárie foram eliminados e dentes múltiplos enraizadas foram seccionados em raízes individuais. Nenhuma tentativa foi feita para preservar o ligamento periodontal. Todas as raízes individuais foram modificados para o aspecto coronal para criar amostras de 13 milímetros de raiz (Figuras 2A & amp;. B). Todas as amostras foram autoclavadas durante 30 minutos a 250F a 15 psi antes da limpeza e moldar. Um operador preparou cada amostra assepticamente utilizando instrumentação rotatória com 0,6 cone série Perfil 29 (Dentsply Tulsa Dental, EUA). O forame apical foi ampliado para 0,35 milímetros. Cinco ml de 6,0% de hipoclorito de sódio foi usado ao longo do processo de limpeza e de moldar. Dezessete por cento EDTA foi de molho por um minuto em todos os canais preparados para remover a camada de esfregaço. Todos os canais foram secos com cones de papel e aleatoriamente divididos em grupos experimentais e controle. Todos os espécimes foram obturados usando condensação lateral frio.
O grupo experimental (G1) consistiu em 15 amostras que foram obturados com-tetraciclina impregnada guta percha (TGP) e MCS selador. O grupo dois (G2) foi o controle negativo e composta por três espécimes que foram obturados com guta-percha não-medicada e MCS selador. Grupo 3 (G3) foi o controle positivo e consistiu de três cones TGP independentes. No grupo de quatro (G4), três espécimes foram obturados usando TGP sem cimento. O aspecto coronal todas as amostras de raízes foram condicionadas com gel de ácido fosfórico 37% (Gel Etchant, Kerr, Orange, CA) por 15 segundos, completamente rinced por cinco segundos e levemente secas por sopro de ar suave. sistema de ligação OptiBond SOLO (Kerr, Orange, CA) foi aplicado de acordo com as instruções do fabricante e fotopolimerizada por 20 segundos. material restaurador Charisma (Heraeus Kulzer-, Hanau, Alemanha), cor A3, foi então aplicado por fases para a superfície aderente e fotopolimerizada por 40 segundos após cada incremento.
amostras Após obturação, G1, G2 e G4 foram imediatamente armazenados em 100% de humidade durante 24 horas e, em seguida, transferido para tubos de ensaio de 15 ml de plástico rotulados individualmente, selado e esterilizado cheios com 10 ml de solução salina estéril a 0,9%. Neste momento, os cones de TGP independentes G3 foram colocados em tubos de ensaio individuais seus cheios com 10 ml de solução salina estéril a 0,9%. Todos os tubos de ensaio foram embrulhados em papel alumínio para minimizar a exposição à luz. Os tubos foram então colocados numa incubadora a 37 ° C durante intervalos de tempo específicos:. 24 h, 48 h, 96 h, 1 semana e 4 semanas
No final de cada intervalo de tempo de ambas as amostras de teste e de controlo foram removidos dos seus tubos contendo a solução salina e os tubos foram reembalados em alumínio e armazenado no congelador. Todas as amostras foram então colocadas em novos tubos de ensaio de 15 ml de plástico rotulados individualmente selados e esterilizados cheios com 10 ml de fresco, solução salina estéril a 0,9%. O alumínio foi utilizado novamente para embrulhar cada tubo. Todos os novos tubos foram novamente colocadas na incubadora até que o próximo intervalo de tempo em estudo, altura em que este processo foi repetido ..
Fase 2: Ridascreen tetraciclina competitivo de ELISA (R-Biopharm Inc., South Marshall , MI)
um estudo piloto foi completada primeiro, a fim de determinar qual a diluição de cada amostra de teste e de controlo de solução salina foi necessária para produzir uma concentração na gama entre 0,15 e 1,35 g /kg ou partes por bilhão (ppb). Este intervalo de concentração corresponde à parte linear da curva de calibragem ilustrada no Gráfico 1. Uma série de concentrados de tetraciclina padrão de 0, 0,05, 0,15, 0,45, são utilizados 1,35 e 4,05 ppb em uma solução tampão (fornecido com o kit Ridacreen Tetraciclina) para produzir a curva de calibração. Os concentrados padrão são executados junto com toda a samples.14
Cada kit contém Ridascreen 96 poços de microtitulação com uma amostra por poço. Cada amostra é testada em duplicado. Quatro kits Ridascreen foram utilizados no total e as cavidades foram dispostas nos suportes de microtitulação fornecidos. Cinquenta ul de padrão, as amostras experimentais e de controlo foram adicionados a cada poço. Cinquenta ul de solução de anticorpo anti-tetraciclina, em seguida, foi adicionado a cada poço e as soluções foram suavemente misturada e deixada em repouso durante uma hora à temperatura ambiente. Após uma hora, as soluções foram vertidas para fora de cada poço e todo o líquido residual foi removido tocando os detentores de micropoços de cabeça para baixo sobre uma toalha de papel. Os poços foram então lavados com tampão PBS com Tween. Cem l de conjugado de enzima foi então adicionado e misturado suavemente. Esta solução foi deixada em repouso durante 15 minutos à temperatura ambiente. Após 15 minutos, as soluções foram novamente derramado, e todo o líquido residual foi removido batendo os titulares de micropoços de cabeça para baixo sobre uma toalha de papel. Os poços foram lavados novamente com o tampão PBS com Tween e 50L de cromogénio foi adicionado a cada poço. Os poços foram suavemente misturada e deixada em repouso durante 15 minutos no escuro. Após 15 minutos, 100L de 1N reagente de paragem de ácido sulfúrico foi adicionado e misturado suavemente. A absorvância foi medida a 450 nm utilizando um espectrofotómetro de placas de microtitulação e é inversamente proporcional à concentração de tetraciclina nos padrões ou de amostras. Uma placa de ar foi utilizada para comparação. A absorvância foi lida no prazo de 60 minutos após a adição do reagente de paragem. A concentração de tetraciclina em g /kg em cada amostra foi então lido a partir da curva de calibração utilizando os valores médios de absorvância obtidos. A concentração real de tetraciclina em cada amostra foi ainda multiplicado por um factor de diluição correspondente e convertido em g /ml.14
ANÁLISE ESTATÍSTICA
Os dados foram coletados e armazenados em um programa de planilha e codificadas para análise estatística. Cálculo dos dados foi executada usando v11 SYSTAT para Windows (SYSTAT Software, Inc., Point Richmond, CA). Ambas as estatísticas descritivas e de dois fatores ANOVA foram realizadas.
RESULTADOS
Tabelas 1 a 4 concentrações show de difusão para a tetraciclina em todas as amostras para cada grupo e em cada intervalo de tempo. A um nível alfa de 0,05, os resultados de uma ANOVA de dois factores indicaram que, para cada intervalo de tempo estudados, apenas o controlo positivo, G3, teve significativa difusão tetraciclina, (28.486g /ml) em relação ao experimental (G1: 0,006 g /ml) e outros grupos de controlo (G4: 0,075 g /ml, G2: 0.000g /ml). A diferença nas concentrações de tetraciclina de difusão por G1, G2 e G4 não foram significativas (Tabela 5, Tabela 6 & amp; Gráfico 2). Quando a concentração de tetraciclina foi avaliada através do tempo, verificou-se que a difusão máxima tetraciclina ocorreu às 24 horas (17.190g /ml). Difusão caiu para um mínimo de 96 horas (2.676g /ml) e um aumento brusco de 4 semanas (6.860g /ml) (Tabela 7, Gráfico 3)
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DISCUSSÃO
A entrega local de tetraciclina e seus derivados têm sido muito utilizados como terapia adjuvante no tratamento de vários tipos de periodontite. Periodontite associatied com lesões endodontia apresenta uma situação única em que o sistema de canal pode ser usada para fornecer localmente um agente antimicrobiano eficaz para o periodonto através de diversas vias patentes, tais como túbulos dentinários ou canais laterais. Ambos colocação de um medicamento intra-nomeação ou a obturação final são oportunidades para fornecer entrega local de uma droga.
O presente estudo foi o primeiro a usar um ensaio imunoenzimático, Ridacreen Tetraciclina (R-Biopharm Inc.), para investigar se a difusão de tetraciclina ocorre através da dentina radicular de dentes humanos extraídos quando obturados com TGP, MCS selador e coronariamente selado. No passado, autores como Wikesjo et al15 e Ciarlone et al16 usado tetraciclina radioactiva e contagem de cintilação líquida para quantificar a quantidade de tetraciclina libertado da dentina.
imunoensaios enzimáticos são frequentemente utilizados na pesquisa odontológica para quantificar várias moléculas tais como cytokines17 pró-inflamatória ou endógena beta-endorphin.18
Ridacreen Tetraciclina é um ensaio imunoenzimático disponível no mercado. É comumente utilizado para detectar resíduos de tetraciclina em amostras de carne, leite, mel e água como este antibiótico, entre outros, é utilizada como um suplemento na alimentação animal para acelerar o crescimento de livestock.19 De acordo com o fabricante de produção de alimentos, esta enzima imunoensaio capaz de detectar concentrações tão baixas como tetraciclina 0,5 x 10-5 g /ml.14
tetraciclina também é conhecido por exibir photodegradation.20 para minimizar a sua repartição molecular, a tetraciclina difundida em todas as amostras de soro fisiológico foi protegido contra a possível fontes de luz por envolvimento individualmente cada tubo de ensaio com folha de alumínio.
tetraciclina é também conhecido para quebrar quando dissolvido em vários liquids.10 Assim, a concentração de tetraciclina detectada no experimental e controlar as soluções salinas podem ter sido biológico inactivo fracções de moléculas tetraciclyine pai. Numa tentativa de evitar ou pelo menos atrasar a essa ocorrência, os peritos em R-Biopharm Inc. recomendado que todas as amostras sejam imediatamente congeladas. Para além da difusão real de moléculas de tetraciclina completas ou parciais em solução, a eficácia antimicrobiana da tetraciclina difusa pode não ser acertained com base nos resultados deste estudo. Mais pesquisas seriam necessárias para confirmar o efeito antibacteriano da tetraciclina difusa.
TGP e MGP braço guta percha com um amplo espectro de eficácia antibacteriana. Este é pertinente em situações onde infiltração coronária após obturação, levando à contaminação bacteriana e reinfecção. Alternativamente, TGP e MGP, poderia oferecer resistência contra bactérias residuais deixados no sistema de canais radiculares que podem de outra forma produzir contaminação doença17 umidade persistente é suposto para ativar tetraciclina e iodo a partir de TGP e MGP respectively.21,7 Melker et al (2006) encontrado TGP ser superior a ambos pop e guta-percha regulares contra bactérias comumente encontradas em não tratamentos de canal radicular, incluindo E.faecalis.22 Além disso, o Dr. Martin sugere o uso de uma tetraciclina impregnada produto iodoform combinado /ou TGP com MCS selador no tratamento de dentes com longa data infections.11 a última recomendação foi tida em conta na concepção do estudo. Apesar dos efeitos benéficos imediatos do POP, um estudo recente constatou que MGP não pode manter a sua antimicrobiana e antifúngica efeitos após 48 e 72 hours.23
A tetraciclina tem sido amplamente utilizado no tratamento de vários tipos de doenças periodontais que são refractário na natureza e que também foi encontrado para ser eficaz em matar Actinobacillus actinomycetemcomitans, normalmente associada com os investigadores periodontitis.4 agressivos, tais como Rosenblatt (1986) questionar a eficácia antimicrobiana de tetraciclina contra patógenos periodontais comuns, devido ao desenvolvimento de vários graus de resistência a bactérias gram-positivas e organismos anaerobes.24 Apesar desta afirmação, Walker et al. (1979) constataram tetraciclina ter eficácia antimicrobiana significativa contra a maioria das bactérias isoladas de pockets.25 periodontal humana Entre estes estavam Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobnacter Oral e espécies de Streptococcus com concentrações inibitórias mínimas em meios de ágar sob 2m /ml. Mais recentemente, Colombo et ai (2003) concluíram que a utilização de ambos tetraciclina sistémica e entregue localmente reduziu significativamente os números de bactérias "complexo vermelho" para, pelo menos, seis meses após treatment.26
capacidade de se difundir através Tetraciclina e ligam-se a dentina foi claramente evidente em vários espécimes de raiz após a conclusão do estudo. As Figuras 2A & amp; B representam um espécime de G4 (controlo MCS) com dentina distintamente amarela em relação a uma amostra de G2 (controlo negativo). Vários estudos têm investigado a ligação de tetraciclina à dentina. As moléculas do marcador na dimethychlortetracycline antibiótico tetraciclina relacionada contidos Ledermix (Lederle Pharmaceuticals, Wolfratshausen, Alemanha), foi encontrada a permear através da dentina de dentes unirradiculares. Tanto a remoção da camada de cemento e esfregaço, foram encontradas para aumentar a difusão do traçador molecules.27 Consequentemente, a colocação intracanal imediata de Ledermix em dentes reimplantados foi mostrado resultar em estatisticamente significativamente mais cura e menos reabsorção externa quando em comparação com o hidróxido de cálcio. 28
neste estudo, a quantidade de tetraciclina difundida através dos dentes obturados com TGP e MCS selador foi estatisticamente insignificante em relação ao independente TGP em solução salina (controlo positivo; G3). Dependendo do estudo, o MIC para a tetraciclina pode ser interpretado como variando de 0,016 g /ml a 2,00 g /ml, tal como determinado por Kleinfelder (1999) ou a partir de 4 g /ml a 8 g /ml, tal como registado por Walker et ai (1981 ) .8,29 com base na faixa relatada por Kleinfelder (1999), dentes obturados com TGP e sem MCS selante (o controle MCS; G4) e TGP autônoma (controle positivo; G3) teve uma difusão média de tetraciclina que caiu dentro ou acima da gama de MIC; respectivamente. No entanto, a gama mais elevada relatada por Walker et ai (1980), iria significar apenas independente TGP em solução salina (controlo positivo; G3) produziu uma concentração média de tetracylcine difusa que seria suficientemente antibacteriana. No entanto, a quantidade de difusão tetraciclina de dentes obturados com TGP e MCS selante (o grupo experimental; G1) caiu bem abaixo ambos os intervalos de MIC documentados para tetraciclina
A taxa de difusão tetraciclina através do tempo diminuiu exponencialmente a partir de 0 horas. a 96 horas. Estes resultados são semelhantes aos registados para a taxa de difusão através da dentina de dimethychlortetracycline de Ledermix usado como um agente de capeamento pulpar indireto em um estudo feito pela Abbott et al (1989), onde a taxa de pico de difusão era a 2 hours.29 A aumento observado da concentração de tetraciclina de 96 horas a duas semanas é provavelmente devido à sua acumulação em solução a partir dos intervalos de tempo mais longos escolhidas para este estudo e não devido a uma possível reactivação dos pontos medicamentosos. Uma tal acumulação não seria provavelmente in vivo, onde o fluido crevicular gengival está num estado de fluxo constante.
Com base nos resultados deste estudo, a obturação in vitro de dentes com TGP e MCS selante não faz permitir a difusão suficiente de tetraciclina, conforme determinado pelo Ridacreen tetraciclina, que é consistente com concentrações inibitórias mínimas conhecidos.
a investigação futura deste produto deve investigar se existe algum benefício para o uso de pontos pré-embebido ativados TGP como um medicamento intra-nomeação durante o tratamento do canal da raiz contra os dois patógenos endodônticos e periodontais dentro do sistema de canais radiculares e do periodonto circundante.
Dr. Mary Dabuleanu é na prática privada limitada a endodontia em Toronto, ON. Gabriel J. Faubert é o gerente regional e gerente de vendas sênior da R-Biopharm Inc. Dr. John Molinari é o professor e presidente do Departamento de Ciências Biomédicas da Universidade de Detroit, Mercy. Dr. Frank E. Rosa foi anteriormente professor de Odontologia Restauradora e escritório associar reitor de Pós-Graduação e Pesquisa, presidente do Departamento de Odontologia Restauradora e presidente do Conselho de Revisão Institucional da Universidade de Detroit, Mercy. Ele está atualmente em consultório particular em Manistique, MI. Dr. Michael Hoen é o professor associado e Pós-Graduação Programa de Diretor do Departamento de Endodontia da Universidade de Detroit, Mercy. Dr. W. Choong Foong é o professor associado do Departamento de Ciências Biomédicas da Universidade de Detroit, Mercy.
Nós gostaríamos de agradecer a R-Biopharm, Inc. por seu apoio técnico e Medidenta Internacional por sua generosa doação de tetraciclina guta-percha (TGP) e MCS Root Canal Sealer.
Saúde Oral saúda este artigo original.
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Tabela 1 |
G1:. Grupo Experimental
24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) uma semana (g /ml) 1 mês (g /ml) de N cases1515151515Minimum0.0000.0000.0000.0000.000Maximum0.0000.0000.0060.0080.087Mean0.0000.0000.0000.0020.026Standard Dev0.0000.0000.0010.0030.029
Tabela 2
G2: Controle Negativo
24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mês (g /ml) de N cases33333Minimum0.0000.0000.0000.0000.000Maximum0.0000.0000.0000.0000.000Mean0.0000.0000.0000.0000.000Standard Dev0.0000.0000.0000.0000.000
Tabela 3
G3: Controle Positivo
24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mês (g /ml) de N cases33333Minimum58.40018.3507.46613.18021.831Maximum85.64024.08015.83914.54030.901Mean68.76022.00010.68413.87727.107Standard Dev14.7443.1714.5100.6814.713
Tabela 4
G4: Controle MCS
24 horas (g /ml) 48 horas (g /ml) 96 horas (g /ml) 1 semana (g /ml) 1 mês (g /ml) de N cases33333Minimum0.0000.0000.0060.0270.214Maximum0.0000.0110.0330.0570.408Mean0.0000.0040.0180.0450.308Standard Dev0.0000.0070.0140.0160.097
Tabela 5
Dep Var: g /ml N: 120 Multiple R: 0,985 Squared R múltiplo: 0.970
SourceSum-of-SquaresdfMean-SquareF-ratiop-valueGroup10639.09633546.365655.5800Time2056.3174514.07995.0330Group*Time5766.76912480.56488.8370Error540.9511005.410
Table 6
mínimos significam
GroupLS Média (g /ml) NPoint /sealer0.00675Point /não sealer0.07515Positive control28.48615Negative control0.00015
Tabela 7
tempo periodLS média (g /ml) N24 hours17.1902448 hours5.5012496 hours2.676241 week3.481241 month6.86024