Abstract
Fundo
cárie dentária se desenvolve como resultado do metabolismo de carboidratos por bactérias cariogênicas presentes em um biofilme complexo. O presente estudo teve como objetivo analisar se as bactérias em amostras de placa supragengival agrupados quantificados utilizando uma "hibridação DNA-DNA do tabuleiro de damas" painel de base de bactérias cárie relacionados, poderia refletir a experiência de cárie em um modo semelhante ao amostras de saliva analisadas usando um método do lado cadeira num inquérito anterior.
Métodos
um total de 86 mães e suas crianças de 4-6 anos e 12-16 anos de idade participou. A experiência de cárie (CPOD /ceo-d; dentes cariados, perdidos e obturados para dentes decíduos e permanentes) foi registrado clínica e radiograficamente. Cárie foi gravado no D
3 nível (cárie em dentina). O componente D /d foi dividido em três categorias. Uma amostra de placa supragengival agrupados por participante foi obtido a partir de sites proximais posteriores. Análises de 15 espécies bacterianas foram realizadas utilizando a técnica checkerboard DNA-DNA hibridização.
Resultados Nenhuma relação significativa foi encontrada entre os escores bacterianas e CPOD /ceo nem D /grupos d.
Conclusões
Diferentemente as amostras de saliva e o método do lado cadeira, amostras de placa pool interproximal analisados usando a "técnica de hibridização DNA-DNA do tabuleiro de damas" não revelou quaisquer relações significativas entre as contagens bacterianas e da experiência de cárie.
Anette Carlén, Guglielmo Campus e Peter Lingstrom contribuíram igualmente para este trabalho.
Fundo
a cárie dentária é uma doença multifatorial iniciado e influenciado por uma série de fatores-chave [1]. Além disso, a saliva desempenha um papel importante na manutenção da integridade dentes por tamponantes ácidos produzidos por bactérias cariogênicas e proteger os dentes das cáries. A saliva pode influenciar a microflora oral, por adsorção à superfície dos dentes que formam a película adquirida, que determina quais os microrganismos são capazes de unir e colonizar [2]. A saliva tem sido convencionalmente utilizado como uma ferramenta de diagnóstico para determinar a actividade de cárie de risco individuais e [3, 4]. Essa avaliação inclui a gravação de capacidade tampão salivar e contagem de bactérias cariogênicas principalmente estreptococos mutans e os lactobacilos usando testes do lado da cadeira.
Embora a análise de saliva pode fornecer uma visão geral da ecologia oral, refletindo o risco de cárie, a cárie dentária é principalmente um induzida por doença biofilme [5]. A visualização deste biofilme (placa bacteriana) como um ecossistema microbiano complexo aumentou a compreensão do seu papel no desenvolvimento da cárie e progressão [6]. placas cariogênicas resultar quando espécies bacterianas acidogênicas e aciduric aumentar após a exposição de hidratos de carbono de alta frequência. O metabolismo microbiano de tais hidratos de carbono irá resultar na acidificação do biofilme, que por sua vez pode levar a desmineralização induzida por ácido dos tecidos dentários duros [6]. Uma das técnicas de biologia molecular que demonstraram a composição microbiana diversificada do biofilme é a "técnica de hibridação ADN-ADN do tabuleiro de damas" [7, 8]. No entanto, nenhum painel-cárie específicos ainda não foi proposto. Por isso, seria interessante usar a técnica de hibridização DNA-DNA tabuleiro de damas com uma cárie painel específico para investigar a relação entre experiência de cárie individual e as contagens de diferentes bactérias da placa supragengival cárie relacionados.
O presente estudo foi realizado como parte de uma série de estudos sobre as mães sauditas e seus filhos. Uma parte tem como objetivo descrever a experiência de cárie em relação a vários fatores cárie relacionados e uma clara associação entre a lado cadeira salivar contagens bacterianas e experiência de cárie foi encontrado [9]. Outra parte foi projetado para determinar se amostras de placa interproximal agrupados analisados usando a "técnica de hibridização DNA-DNA tabuleiro de xadrez" poderia refletir a experiência de cárie.
A hipótese deste estudo transversal é que as experiências de cárie mais elevados estão associados a maior contagem de bactérias relacionadas com a cárie em placa supragengival. O objectivo do presente estudo era, por conseguinte, para examinar se as bactérias em amostras de placa supragengival reunidas quantificadas utilizando um "hibridação ADN-ADN do tabuleiro de damas" painel à base de bactérias de cárie-relacionados, poderia reflectir a experiência de cárie de um modo semelhante para amostras de saliva analisadas utilizando um método do lado cadeira em um inquérito anterior.
Métodos
assuntos
o estudo foi dada aprovação ética pela Faculdade de Odontologia da Universidade Rei Abdulaziz, em Jeddah, Arábia Saudita. Os registros odontológicos na saúde e de emergência Dental Clinics na Faculdade de Odontologia foram rastreados para identificar candidatos adequados familiares. O estudo envolveu 86 famílias voluntárias. A partir de cada família, a mãe (idade média de 37,0 ± 4,5 anos) e dois de seus filhos, com idades entre 4-6 anos de idade (idade média de 5,0 ± 0,9 anos) e 12-16 anos (idade média de 13,0 ± 1,4 anos) ofereceu. informação verbal sobre o estudo foi dado aos pais e foi obtido consentimento informado por escrito. Todas as investigações foram realizadas por um dos autores (AM).
Registro de cárie
O status dentição foi expressa utilizando o índice CPOD (dentes cariados, perdidos e obturados) para os dentes permanentes e CPO-D para os dentes primários. Foram excluídos os terceiros molares. Cárie foi registrado clínica e radiograficamente na 3 nível D [10]. radiografias interproximais foram tomadas para cada participante, a fim de gravar a cárie proximal. Todas as superfícies proximais na dentição da superfície mesial dos primeiros pré-molares /molares decíduos à superfície distal dos segundos molares /molares decíduos foram incluídos.
Amostras de placa bacteriana
agrupada placa supragengival foi amostrado a partir de sites proximais entre os dentes 16/15, 25/26, 35/36 e 46/45 nas mães e crianças mais velhas e os dentes 55/54, 64/65, 74/75 e 85/84 nas crianças mais novas, utilizando curetas Gracey estéreis. Se um dos dentes no local proximal estava em falta, foi utilizado um sítio adjacente. Cada amostra da placa foi colocada num tubo de Eppendorf contendo 150 μ l de
tampão TE estéril (10 mM Tris-HCl, EDTA 1 mM, pH 7,6). Então, 100 μ l de
NaOH 0,5 M foi adicionado ao sedimento de placa e a suspensão bacteriana foi armazenado a -20 ° C até processamento adicional [11].
Checkerboard hibridação ADN-ADN
A análise de bacteriana espécies foi realizada usando o método de hibridação de ADN-ADN quadriculado [12]. sondas genómicas totais foram preparados a partir das 15 estirpes bacterianas conhecidas por estar relacionado com cárie, como mostrado na Tabela 1. Uma avaliação do número de bactérias nas amostras foi efectuada por comparação dos sinais obtidos com os gerados pelas amostras-padrão reunidas contendo uma contagem de 10 6 e 10 5 de cada espécie bacteriana, respectivamente. Os sinais foram codificadas numa escala de 0 a 5 da seguinte forma: 0 = sem sinal; 1 = a densidade do sinal mais fraca do que a do padrão baixo (& lt; 10 5 bactérias); 2 = a densidade de sinal igual ao do padrão (baixo = 10 5 bactérias); 3 = uma densidade de sinal mais elevado do que o de baixo padrão mas menor que a do padrão elevado (& gt; 10 5 mas & lt; 10 6 bactérias); 4 = uma densidade de sinal igual ao do padrão elevado (= 10 6 bactérias) e 5 = a densidade de sinal maior do que a do padrão elevado (& gt; 10 6 bactérias). Mais detalhes sobre a técnica são encontrados no Mannaa et ai. [13]. Todas as avaliações foram realizadas por um único examinador (AM) .table 1 As 15 estirpes de bactérias cárie relacionados utilizados para a preparação de sondas de DNA e posterior comparação com os dados de cárie clínicos
nomenclatura bacteriana
Strain descrição & amp; fonte
mutans streptococci
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus sobrinus
CCUG-27507
não-estreptococos mutans
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
lactobacilos
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
OMGs -3182
Actinomyces
Actinomyces odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
Veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
OMGs-1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
a análise dos dados
Todos os dados foram analisados usando o IBM ® SPSS ® pacote estatístico (PASW versão 18.0, IBM ®, Chicago, Illinois ., EUA). O componente D /d foi categorizada em baixa: ≤ 1, média: 2-5 e alta: & gt; 5 para as mães e crianças mais velhas e baixa: ≤ 3, média: 4-9 e alto: ≥ 10 para as crianças mais jovens. Kappa de Cohen para a determinação da confiabilidade intra-examinador do registro de cárie foi calculado. A estatística descritiva, incluindo as médias e desvios padrão foram calculados separadamente para os três grupos. Em relação às pontuações do tabuleiro de damas, apenas um sinal poucos "0" os dados foram registrados e, portanto, combinada com sinal "1" dados em "≤1". One-way ANOVA foi utilizada para comparar as diferenças de média na experiência de cárie em relação às contagens bacterianas. O teste exato de Fisher foi utilizado para associar os /d grupos D com as pontuações bacterianas. O nível de significância estatística foi estabelecido em 5%.
Resultados e discussão
valores de kappa de Cohen para o registo de cárie para as mães, as crianças mais jovens e crianças mais velhas foram de 0,88, 0,90 e 0,82, respectivamente. A Tabela 2 resume as contagens bacterianas para cada espécie. As experiências de cárie (CPOD /ceo-d) das mães, as crianças mais jovens e mais velhos estão resumidos na Tabela 3.Table distribuição 2 Pontuação para os 15 estirpes bacterianas obtidos pela técnica Checkerboard DNA-DNA Hybridization nas mães, de 4 a 6 anos -old (C 4-6) e de 12 a 16 anos de idade (C 12-16) crianças
estirpes bacterianas
pontuação do tabuleiro de damas
mães
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86
n = 86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 status de Dentição (CPOD /ceo-d) e experiência de cárie (D /d) nas mães, de 4 a crianças de 6 anos de idade (C 4-6) e de 12 a 16 anos de idade (C 12-16)
variável
mães
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
CPOD /hábil (média ± SD)
12,4 ± 5,3
9,0 ± 5,0
5,8 ± 4,1
d /d (média ± SD)
5,5 ± 3,9
8,0 ± 5,1
4,5 ± 3,7
CPOD /hábil = 0 (n [%])
3 [3.5]
8 [9,3]
10 [11,6]
d /d = 0 (n [%])
10 [11,6]
9 [10.5]
12 [14,0]
Baixa
17 [19,8]
23 [26,7]
23 [26,7]
Médio
31 [36,0]
25 [29,1]
32 [37,2]
alta
38 [44,2]
38 [44,2]
31 [36,0]
Houve uma distribuição não-igual de indivíduos dentro dos escores na escala de xadrez, com a maioria das contagens bacterianas em as gamas mais baixas da escala. A análise não mostrou relação entre as contagens bacterianas e da experiência de cárie para qualquer uma das bactérias cárie relacionados. Além disso, há associações significativas foram detectadas entre os escores bacterianas e as D /categorias D nas mães ou em seus filhos mais jovens ou mais velhos, exceto para uma tendência observada em relação ao Streptococcus mutans
como mostra a Tabela 4.Table 4 Distribuição de d /d em relação ao S. mutans resultados nas mães, de 4 a 6 anos de idade (C 4-6) e de 12 a 16 anos de idade (C 12-16) as crianças
S. mutans contagem
d /d
mães
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The maioria dos estudos utilizando a técnica de hibridação ADN-ADN quadriculado concentraram-se em estudar ecologia placa bacteriana em relação à doença periodontal [14-17]. Estes estudos revelaram uma relação diretamente proporcional entre a contagem de bactérias e profundidade da bolsa periodontal. O presente estudo não conseguiu demonstrar uma relação entre as contagens de bactérias supragengival e a experiência de cárie (CPOD /ceo-d). A relação entre experiência de cárie e as contagens de bactérias salivares cárie relacionados (estreptococos mutans e lactobacilos) avaliada utilizando bactérias CRT ® foi encontrado na mesma amostra do estudo [9]. No presente estudo, nenhuma relação entre as bactérias quantificados nas amostras de placa reunidas e da experiência de cárie foi encontrado. Isto corresponde bem com um estudo anterior em que uma associação mais forte entre cárie dentária e organismos cariogênicas analisadas pela técnica de cultura em comparação com o método de quadriculado foi encontrado [18]. Um número de factores relacionados com as características da placa dentária, o processo de cárie e doença a escolha do método de amostragem, pode explicar a descoberta de corrente. A interação bacteriana na placa dentária poderia fazer uma maior contribuição para o desenvolvimento da cárie do que a contagem específica de certas espécies cariogênicas. Além disso, a comunidade de placa microbiana difere em diferentes estágios de maturação da placa (no início de placa contra
madura placa). Além disso, a localização dos pontos de amostragem e o número de sítios seleccionados podem influenciar a relação. A contagem de bactérias da placa também pode ser afetada por uma série de outros do que as cáries reais fatores cárie experiência relacionada tal como a localização /profundidade (esmalte contra
dentina), fase (incipiente contra
escavadas), nível ( aguda, crônica ou preso), e da atividade da lesão de cárie (ativa versus
inativo). Além disso, a técnica de hibridação ADN-ADN quadriculado tem um elevado limite de corte para a quantificação de bactérias fazendo a detecção de bactérias em baixas contagens problemáticos, o que pode ser ainda mais complicada por reacções cruzadas [19]. Finalmente, a distribuição desigual de indivíduos dentro das pontuações tabuleiro de damas com uma maioria de contagens bacterianas baixas no presente estudo poderia explicar a falta de resultados significativos.
Além dos inconvenientes mencionados anteriormente, existem duas limitações do método de amostragem utilizado no presente estudo. Ao contrário com a saliva, é difícil para padronizar a quantidade de bactérias numa amostra de placa. Normalização pode ser facilmente conseguida com a saliva, expressando a quantidade de bactérias numa amostra de 1 mL. Além disso, a utilização comum de placa supragengival em um tubo de ensaio pode criar dificuldades na lise de todas as células bacterianas presentes numa suspensão bacteriana muito densa [20]. Por esta razão, a amostragem de placa pesada foi minimizado no presente estudo, tendo apenas uma quantidade suficientemente visíveis de placa supragengival. No entanto, a questão de saber se muito pouco placa foi recolhido não pode ser descartada.
Ao contrário do presente estudo, Aas et al. mostrou que as contagens mais elevadas de espécies bacterianas específicas estavam associados à saúde, cárie iniciação e cárie progressão usando um ensaio reverso de captura [21]. Além disso, o presente estudo analisou amostras de placa agrupados em oposição a amostras de diferentes locais de cárie sensíveis na cavidade oral. Além disso, o índice /ceo CPOD poderia ser considerada como um método bruto para descrever a experiência de cárie individual e transmite nenhuma informação sobre atividade de cárie. A relação entre as contagens de bactérias da placa e experiência de cárie podem ter sido obtidos se o inquérito foi realizado em um nível específico do local e se os parâmetros de cárie-relacionados, tais como a profundidade, palco e actividade tinham sido tomados em consideração.
Conclusões
ao contrário das amostras de saliva e o método do lado cadeira, amostras de placa pool interproximal analisados usando a "técnica de hibridização DNA-DNA do tabuleiro de damas" não revelou quaisquer relações significativas entre as contagens bacterianas e da experiência de cárie.
Notas
Anette Carlén, Guglielmo Campus e Peter Lingstrom contribuíram igualmente para este trabalho.
declarações
Agradecimentos
Nós gostaríamos de agradecer a Ann-Britt Lundberg (Departamento de Cariologia, da Universidade de Gotemburgo) e Susanne Blomqvist (Departamento de Microbiologia Oral e Imunologia, Universidade de Gotemburgo) por seu apoio técnico. Um agradecimento especial ao Dr. Nadia Al-Hazmi, cabeça de registros dentários e arquivamento, Dr. Sahar Bukhary, chefe da Divisão de Biologia Oral e Dr. Motaz Ghulman, vice-decano de Assuntos Estudantis da Faculdade de Odontologia da UAE, Reino de Arábia Saudita. O estudo foi apoiado pelo Ministério do Ensino Superior Arábia.
Conflito de interesses
Os autores relatam nenhum conflito de interesse. Contribuições
dos autores
AM participaram do desenho do estudo, realizado a coleta de dados e amostragem , correu a análise "Checkerboard DNA-DNA Hybridization", realizada análise estatística e foi responsável pela redação do manuscrito. AC participou do desenho do estudo e supervisionou a redação do manuscrito. GC assistida na análise estatística e ajudou a redigir o manuscrito. PL participou do desenho do estudo e supervisionou a redação do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
