periodontal da arte abstracta
Fundo
Periodontal inflamação é caracterizada por lesões em tecidos de colágeno, epiteliais, ósseas. As hipóteses a serem testadas foram relação entre a S100, BCL2 e da mieloperoxidase em tecido gengival (MPO afecta o nível de S100, BCL2). O objetivo deste estudo foi investigar de expressão s100, expressão BCL2 e expressão mieloperoxidase na inflamação periodontal.
Métodos
27 pacientes (epulis de células gigantes) e 30 pacientes (agudas e inflamações crônicas) foram incluídos no estudo para a expressão s100, expressão BCL2 e expressão mieloperoxidase por imuno-histoquímica e hematoxilina - eosina.
resultados
gigantes células em epulis positividade para mieloperoxidase tem sido observada em 100% no entanto, apenas 75,31% das células gigantes foram positivos para BCL2 expressão. Aguda de 98,2%, e inflamação crônica 89,28% foi significativa positiva para mieloperoxidase. Os achados imuno-histoquímica de S100, Bcl-2 e da mieloperoxidase em camadas epiteliais foram mostrou o resultado de 100%, 82,2%, 100% de células positivas em% aguda e 100, 78,25%, 100% no processo de inflamação crónica da respectivamente.
Conclusão
os resultados indicam que a patogénese de inflamação periodontal pode envolver a inibição da morte celular, por meio da sobre-expressão de Bcl-2, devido à identificação de factores de mieloperoxidase (resultar no dano do ADN por o produto de catálise). Os mais altos níveis de atividade s100 foram encontrados em sítios com inflamação crônica.
Fundo
infecções bacterianas são os agentes etiológicos mais importantes envolvidas na periodontite aguda e crónica, é doença multifatorial que leva à destruição do periodonto óssea [1]. infiltração de células inflamatórias foi resultou a partir de células plasmáticas periodontais: neutrófilos, T & amp; linfócitos B e macrófagos [2]. lesões periodontais têm sido caracterizadas por persistência de uma infiltração de células inflamatórias, que podem ser responsáveis para o osso colagénios resorcinol. Uma pesquisa feita por Bælum V. & amp; Lopez R. [3] demonstraram que a doença periodontal afeta entre 10% e 15% da população do mundo, sendo a maior causa de perda do dente.
As células inflamatórias (células plasmáticas) expressaram em mieloperoxidase. Os neutrófilos polimorfonucleares são largamente expressa a mieloperoxidase em células do plasma [4]. O gene da mieloperoxidase está localizado no cromossoma 17 (17q23.1) [5].
Mieloperoxidase (MPO) catalisaram a síntese de ácido hipocloroso microbicida permitindo a defesa contra as bactérias [6]. Além disso, as células plasmáticas sintetizar ácido hipocloroso de H
2O 2 e NaCl. Radical hidroxila (OH) é principalmente activa na importantes moléculas danosas, tais como proteínas de DNA e lipídios [7]. O peróxido de hidrogénio (H 2O 2) ser um potente agente de espécies de oxigénio, é capaz de atravessar a membrana nuclear e danificar o DNA. [8] Há um apoio crescente para a alegação de que a inflamação induz danos ao DNA que leva a apoptose em células periodontais [9] Além disso, os estímulos apoptóticos podem desencadear a apoptose através de diferentes mecanismos, incluindo receptores de morte celular específicos e ligantes, tais como CD95 [10 ], os sinais de stress, induzindo as moléculas directamente ou indirectamente na apoptose, por meio do p53. BCL2 é um membro da família das proteínas anti-apoptóticas que podem prevenir ou reduzir a morte celular induzida por uma variedade de estímulos [11]. O gene bcl-2 foi identificado no cromossoma humano t (14; 18) [12]. A via de morte intrínseca é iniciada pela libertação mitocondrial de citocromo c
, um processo que é inibido por proteínas BCL2 anti-apoptóticos [13].
Proteínas S100 expressaram no citosol de neutrófilos, monócitos, macrófagos activados, e queratinócitos e lançado durante a ativação ou a morte destas células. A família de genes S100 inclui pelo menos 13 membros que instalem como um cluster no cromossoma 1q21 [14]. S100 proteínas também conhecidas como antigénios L1, calgranulina A e B, macrófagos inibidor da migração, proteína relacionada com o factor de (MRP) e o antigénio fibrose cística, têm várias funções em reacções inflamatórias [15]. Os resultados
por Sun-Hee et Heo . ai. [16] demonstraram os padrões de expressão de S100A2 em tecidos gengivais durante a estimulação lipopolissacarídeo bacteriano. expressão S100A2 foi regulada por lipopolissacarídeo bacteriano.
Temos hipótese afirma que não há relação entre a s100, BCL2 e mieloperoxidase nos tecidos gengivais (MPO afeta o nível de s100, BCL2).
O objetivo deste estudo é comparar os níveis de S100, BCL2 e MPO nos tecidos gengivais em diferentes fases da doença periodontal e expressão em comparação com as epúlide de células gigantes.
Métodos
selecção do paciente e de recolha gengival tecidos
as amostras de estudo ter incluído a epulis periodontal e tecidos dos pacientes. Os indivíduos foram divididos em dois grupos iguais:
grupo de pacientes (Grupo 1). espécimes granuloma de células gigantes foram coletadas de 27 pessoas que tiveram um diagnóstico morfológico do granuloma de células gigantes (oito homens e 14 mulheres, com idades de 30 a 70 anos, média, 47,51 ± 12,37 anos).
grupo controle (grupo 2) consistia de 30 pacientes que tinham morrido no Hospital Regional Sumy. Os pacientes tinham vários diagnósticos somáticas (não complicações ateroscleróticas) e dental - parodontit. 17 homens e 13 mulheres, com idades de 43 a 69 anos, média de idade de 57,33 ± 8,31 anos têm vindo a investigar. Os espécimes de gengiva overgrown foram coletados durante mandíbulas serrar procedimentos. Depois de amostras grupo 2 tecidos manchados por foo hematoxilina eosina, todas as amostras foram divididas em dois grupos (agudas e crónicas). grupo de controle tem dois subgrupos. subgrupos agudas - 13 (5 homens e 3 mulheres, com idades de 43 a 69 anos, com idade média de 54,38 ± 7,9 anos). subgrupos crônicas -. 17 (7 homens e 15 mulheres, com idades de 44 a 68 anos, a idade média, 59,58 ± 8,11 anos)
consentimento informado por escrito foi obtido de todos os sujeitos do estudo, de acordo com as diretrizes estabelecidas pelo Conselho de Saúde da Ucrânia. O presente estudo foi aprovado pela Universidade do Estado de Sumy (Protocolo nº 5/2012.)
Hematoxilina e eosina (H & amp; E).
Manchas têm sido usados por pelo menos um século e ainda são essenciais para a identificação de vários tecidos tipos e a alteração morfológica.
imunomarcações
Para s100, BCL2 e MPO foram realizados fixado em formol (pH 7,4) de tecido. secções de tecido embebidas em parafina foram tratados DY rato monoclonal anti-S100, anti-BCL2 e anti-mieloperoxidase (Thermo Fisher Scientific UK). Resumidamente, 4 uM secções de tecido de espessura foram desparafinados em xileno e foram colocados em água a através de álcoois graduados. recuperação de antigénio foi realizada por microondas lâminas em tampão de citrato 10 mM (pH 6,2) durante 30 minutos a alta potência, de acordo com as instruções do fabricante. Para remover a actividade de peroxidase endógena, as secções foram tratadas com peróxido de hidrogénio recentemente preparada de 1,0% no escuro, durante 30 minutos à temperatura de 37 ° C. A ligação de anticorpo não especifica foi bloqueada por meios de bloqueio de soro. As secções foram incubadas durante 30 min, à temperatura de 37 ° C, com os anticorpos primários contra S100, BCL2 e mieloperoxidase diluído 1: 100 em tampão fosfato salino (PBS) pH 7,2, em seguida, uma lavagem tripla com PBS segue. Anti- (IgG de ratinho) conjugado com peroxidase de rábano (diluição 1:40 000) tiver sido satisfeita para a detecção de a S100, Bcl2 e anticorpos primariy MPO, em seguida, as secções foram incubadas durante 20 min, à temperatura de 37 ° C. A cor foi visualizada por DAB.
O aparecimento dos fatores positivos foi detectado semiquantitativa através da contagem de células gigantes positivos no campo visual.
Os dados foram analisados utilizando Statistica 8.0 software, o usuário versão STA862D175437Q. Os resultados foram apresentados como média ± SD. O teste normalize têm tido um uso antes da análise dos dados. Além disso, o método Student não-paramétrico foi aplicado para realizar uma análise comparativa simples. O valor de P & lt; 0,05 foram considerados para ser um significativo.
Resultados
Os grupos 1 e 2 de homens e mulheres consistia principalmente a faixa etária de 30 a 70 anos. Grupo 1 células gigantes ocorreu no maxilar inferior (55%) mais frequentemente do que no maxilar superior. No grupo 2, os pacientes foram divididos em 13 com aguda e 17 com inflamações crónicas.
Na Fig. 1a A observou-se infiltração de células low-size na inflamação aguda. infiltração de células significativa e proliferação do epitélio (Fig. 1b) pareceu ser mais intensa na inflamação crónica. células inflamatórias agudas e crónicas são leucócitos, células plasmáticas e macrófagos teciduais circulantes. Fig 1 Os tecidos periodontais hematoxilina e eosina (x100 ampliação) Um (a) - pint-size células de infiltração com edema sobreposta, B (a) - camadas do epitélio, C (b) - grandes células de infiltração com edema sobreposta, D (a) - proliferação epitelial, E (C) - zona de hemorragia, F (c) - células gigantes
epúlide periférico de células gigantes é mostrado na Fig. 1c exame microscópico revelou o tecido com a abundância de células gigantes (Fig. 1c F), o tecido conjuntivo fibroso, com áreas de hemorragia (Fig. 1c E) e alguns capilares. Não havia nenhum sinal de malignidade. A inflamação crônica quando os macrófagos não se desintegrou várias partículas, se fundem e formam células gigantes multinucleadas. Além disso, células gigantes morfologicamente distintas também aparecem em alguns tumores também.
S100, Bcl2 e MPO expressa em células gigantes. S100 expressão, expressão BCL2 e expressão mieloperoxidase em células gigantes epúlide são mostrados na Fig. 2. Por imunohistoquímica, 100% das células gigantes pareceu ser positivo para a mieloperoxidase, enquanto que apenas 75,31% de células gigantes eram positivos para Bcl-2 (P & lt; 0,05). Pelo facto de a proteína S100 foi expressa em 10,72% de células gigantes. A mieloperoxidase tem fisiologicamente expressa em células sanguíneas de epúlide 87,69%. S100 e Bcl-2 foram expressos em células plasmáticas 24,34% (P & lt; 0,05) e 11,28%, respectivamente, Bcl-2 e a expressão de mieloperoxidase ser fraco ou ausente no tecido conjuntivo. Figura 2 Expressão de S100, bcl2and mieloperoxidase no tecido gengival (x100 ampliação): A - as camadas do epitélio com a expressão mieloperoxidase, B - Glóbulos infiltração com expressão mieloperoxidase, C - pericelular e edema perivascular, D - glóbulos infiltração com expressão mieloperoxidase , e - as camadas do epitélio com expressão mieloperoxidase e proliferação, F - células gigantes com expressão mieloperoxidase, G - estroma fibroblástico, H - células do sangue infiltração com expressão mieloperoxidase, I - edema pericelular e perivascular, G - Blood células infiltração com 2expression Bcl , K - as camadas do epitélio com elevado nível de expressão de Bcl-2, G - as camadas do epitélio com 2expression bcl, N - estroma fibroblástico, M - Glóbulos infiltração com Bcl-2 de expressão, o - pericelular e perivascular edema, P - gigante células com expressão de Bcl-2, Q - as células do sangue infiltração com baixa 2expression bcl, R - Blood células infiltração com expressão s100, S - pericelular e edema perivascular, T - camadas do epitélio com expressão s100, U - camadas do epitélio com baixa expressão s100, V - estroma fibroblástico, W - As células do sangue infiltração com expressão s100, X - estroma fibroblástico, Y - células gigantes com expressão s100 "pobre"
A imunoexpressão da s100, BCL2 acabam MPO (Grupo 2) foram confirmados pela presença de citoplasma manchado marrom na infiltração de células. Em geral, S100 coloração era mais intensa nas células plasmáticas. Na inflamação aguda S100 (Fig. 2), apenas 36,2 ± 5,3% das células pareceu ser positivo. A infiltração de células, mostraram imunorreactividade BCL2 figurado 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) no processo agudo (Fig. 2). A mieloperoxidase foi expressa em 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01). As células positivas em inflamação aguda
Figura 2 mostra os resultados do S100, BCL2 e expressão de MPO no processo crónico
mieloperoxidase 82,. 28 ± 2,5% P & lt; 0,01 foi expressa em infiltração de células durante a inflamação crónica plasmática. Bcl-2 foi expressa em células plasmáticas crónicas infiltração 55,67 ± 6,1% de P & lt; 0,05. ? He imunoexpressão da S100 na infiltração de células mostrou o resultado de células positivas 95,0 ± 0,31%.
? He imunoexpressão da s100, BCL2 e MPO em camadas epiteliais (processo agudo) têm mostrado o resultado de 100%, 82,2 ± 2,93% e 100%, respectivamente. No processo de inflamação crônica das células positivas demonstratrd s100 - 100%, BCL2 - 78,25 ± 4,23% e mieloperoxidase -. 100%, respectivamente
Discussão
Este estudo afirmou que MPO foi capaz de estimular maior de expressão BCL2 em células de inflamação durante o processo de crônica e aguda. actividade de mieloperoxidase expresso em neutrófilos recrutados para a gengiva após insultos químicos ou imunológicos contribui para a destruição dos tecidos. Meloperoxidase pode influenciar a extensão e /ou a gravidade das doenças periodontais [17].
Alto nível da MPO foram observados em células gigantes. Elevados níveis de expressão bcl2 pode impedir a apoptose celular, induzindo desse modo a permanecer células inflamatórias no local do tecido periodontal, causando consequente secreção excessiva de citoquina, que leva à destruição progressiva dos tecidos periodontais [1]. Mieloperoxidase pode ser libertado a partir de neutrófilos ativados por desgranulação apenas em níveis moderados [18], e da disponibilidade bcl2 protege regiões. Citólise de neutrófilos no curso de formação de inflamação poderia fornecer um mecanismo de liberação [18, 19] e explicar os altos níveis de mieloperoxidase e S100. Atividade de S100A12 e proteína C-reativa podem ser marcadores de atividade inflamatória na periodontite crônica [20]. Estudos anteriores sugeriram que a apoptose está envolvida na patogénese da doença periodontal inflamatória [21]. Também tem sido demonstrado que a mais elevada frequência de expressão de Bcl-2 resulta na destruição periodontal progressiva [22].
Gamonall et all. [23] não foi encontrada diferença estatística em varions quantidade de BCL2 na gengiva saudável e na gengiva de pacientes com doença periodontal. Nossos estudos confirmaram o ponto de vista de Pandilova [24] e Ellis et all. [25] que a progressão crônica da diminuição da inflamação expressa Bcl-2. Em fibroblastos gengivais humanos com activação inflamação da BCL2 não foi observada em diferentes fases de infecção e as epúlide de células gigantes. Sule Bulut et all. [26] Os resultados indicam que a patogénese da ciclosporina A crescimento gengival induzida pode envolver a inibição da apoptose e a sobre-expressão de Bcl-2 na configuração de níveis séricos elevados de ciclosporina A. O presente estudo demonstrou um elevado nível de expressão BCL2 e a inibição da apoptose em células do epitélio gengival. Acreditamos que este é devido às funções de proteção do epitélio. Em epitélio gengival S100 também está relacionado com o estádio de diferenciação [27]. Estas células são positivas que se sabe activar os macrófagos ou neutrófilos [28]. Pesquisa por Saito et ai. [29] demonstraram numerosas células epiteliais Bcl-2 positivas em biópsias gengivais de doentes que estavam a tomar a nifedipina e fenitoína, indicando que esta proteína pode estar envolvida no desenvolvimento de hiperplasia gengival induzida por nifedipina. Acreditamos que a presença da proteína Bcl-2 não é um indicador de cursos favoráveis de células gigante epúlide.
S100 desempenha um papel importante na resposta imunitária relacionada com periodontite. s100 liga 2 Ca2 + e 2 iões de Zn2 +. Se Zn2 + se liga a S100 que diminui a sua Ca2 + afinidade. S100 também interage com p53 numa forma dependente de Ca2 +, o que afecta a estabilidade da interacção S100-p53 [30] interacção referidos antes S100-p53 conduz à inibição da apoptose durante a inflamação. A proteína Bcl-2 é um inibidor potente da morte celular, enquanto que a proteína p53 de tipo selvagem activa o circuito apoptótico [5].
P53 mutadas perde esta função e permite a proliferação de células neoplásicas. Bcl-2 também modula a função de p53 e desencadeia a proliferação e transformação [31] célula.
Thr expressão de S100 ter sido detectado como pró-inflamatória fagócitos células em locais de inflamação intestinal [32, 33]. doenças autoimunes sistêmicas (dermatomiosite, lúpus eritematoso sistémico, doença de Kawasaki etc.) têm uma associação clara com expressão S100 em macrófagos infiltraton com degeneração do tecido [34, 35].
Conclusão
Investigações sobre marcador BCL2 em células gengivais durante periodontal inflamação nós sugestão de que periodonto tecidos, continuamente expostos a infecções bacterianas podem conter células com alto nível de resultados mieloperoxidase que o DNA danos causados por produtos de catálise.
Os mais altos níveis de atividade s100 foram encontrados em sítios com inflamação crônica. Os nossos resultados sugerem que a baixa expressão S100 pode desempenhar um papel importante na actividade de células gigantes em epúlide de células gigantes. Isto é considerado como sendo os factores de prognóstico mais importantes em granuloma de células gigantes. Como resultado de nossa pesquisa, criamos um diagrama Fig. 3. Fig 3 S100, BCL2 e interação proteína myeloperoxid durante a inflamação periodontal
Declarações
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer ao Laboratório de Imunologia da Universidade do Estado de Sumy.
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concorrentes. interesses
os autores declaram que não têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
PCCF foram responsáveis pelo desenho do estudo. SCT analisados e interpretados os dados. MTX escreveu o relatório. BFPP fez o trabalho de laboratório. RM, ajudou a redigir o manuscrito. Todos os autores leram, comentou e aprovado o artigo final.
