Procedimento Para A trombina autóloga activação de plaquetas em plasma rico em plaquetas (PRP)

ANTECEDENTES

As plaquetas são pequenos corpos granulados anuclear que aderem, agregar e formar um tampão de plaquetas nos sitios de lesão vascular para evitar a perda de sangue. concentração de plaquetas no sangue é de aproximadamente 300 mil /ul, e que normalmente têm uma meia-vida de 4 dias. Eles são formados a partir de células estaminais gigantes comprometidos chamados megacariócitos visto que belisque bits do seu citoplasma e extrude-los para a circulação sanguínea. As plaquetas têm microtúbulos em torno de sua periferia e uma membrana extensivamente invaginado em contato com o líquido extracelular.

As suas membranas contêm receptores para uma série de substâncias, incluindo colágeno, difosfato de adenosina (ADP), fator de von Willebrand e fibrinogénio. Alguns dos conteúdos de seu citoplasma têm sua origem nos megacariócitos, alguns são sintetizados internamente, e alguns são armazenados após a endocitose. Entre os organelos intracelulares são dois tipos de grânulos:

1) grânulos densos, que contêm as substâncias não proteicos, que são segregadas em resposta à activação de plaquetas, incluindo a serotonina, ADP /ATP, histamina, dopamina e catecholamines.1

2) * -granalhas, que contêm secretadas proteins.1-3 Entre estas proteínas armazenadas são factores de crescimento mitogénicos e angiogénicos que são essenciais para a regeneração dos tecidos duros e moles e reparação. Marx4 da América do Norte e Anitua et al1 da Europa têm mostrado que mais cedo e com maior densidade óssea é obtido em locais cirúrgicos tratados com PRP, em comparação com os locais de controlo. Os factores de crescimento de plaquetas são o factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crescimento transformante (TGF), factor de crescimento endotelial vascular (VEGF), factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF), factor de crescimento derivado de plaquetas epidérmico (PDEGF), e insulina -like growth factor-1 (IGF-1). Estes são variadamente envolvidos na estimulação da quimiotaxia, proliferação celular e de maturação em healing.1 ferida

No início de 1990 plasma rico em plaquetas (PRP) foi introduzido como um biomaterial.5,6 autólogo Uma variedade de máquinas foram adaptados para alcançar a separação centrífuga ideal de PRP para uso terapêutico de pequenas quantidades de citrato blood.7-13

Em 2002, Gonshor9 desenvolveu um procedimento caracterizado por um método de dupla rotação centrifugação usando uma centrífuga não automatizada para sequestrar e concentrar as plaquetas para um nível de valores de sangue inteiro de quatro a oito vezes o valor basal. As concentrações técnica produzido de PDGF-AB acima de 500%, e TGF maiores do que 800%. Sua testes mostraram que o rendimento de 85,1% de plaquetas permaneceu em repouso durante todo o processo, manter a sua integridade e viabilidade, sem a activação inadvertida. trombina bovina 5000 unidades e solução de cloreto de cálcio 10% foram utilizados para a ativação plaquetária, a criação de um gel de PRP.

Em 2005, Marx e Garg15 publicou um excelente livro sobre "Dental e Craniofacial Applications de Plasma Rico em Plaquetas". Neste texto, os autores afirmam que "fatores de crescimento têm surgido como o" Santo Graal "na cicatrização de feridas" e eles projetaram preparação trombina bovina liofilizada como o padrão para iniciar a coagulação do PRP e ativação das plaquetas.

No entanto, uma ano antes, em 2004, a trombina bovina tornou-se indisponíveis no Canadá. Este acontecimento precipitou uma busca por uma alternativa à trombina bovina. trombina autóloga e /ou trombina humana recombinante foram as escolhas lógicas. portanto, necessidade tornou-se a mãe da invenção, e uma busca foi lançada para uma alternativa.

SUJEITOS

Este estudo consistiu de 21 pacientes que necessitaram de colocação dos implantes e /ou enxerto ósseo. Dos 21 pacientes 5 necessária a colocação do implante imediato com enxerto ósseo, apenas 8 necessária a colocação do implante, e 8 óssea necessária enxertia somente.

MATERIAIS E MÉTODOS

Materiais

1) finalidade centrífuga geral (não-automático) com um rotor de seis posições, ou centrífuga automática.

2) 4 amarelo-top VACUTAINERS -10ml contendo solução de dextrose de citrato ácido (ACD-a).

3) 6 -10 ml red-top VACUTAINERS noncoagulant

4). 21 -. calibre borboleta agulhas e 19 gauge agulha borboleta

5) 21/2 "(63 milímetros) agulha romba .

6) 3 "(76mm) agulha romba.

7) 10% de cloreto de cálcio Solution.

8) 6- 5ml seringas esterilizadas.

9) 6 -... 1 ml seringas esterilizadas

10) recipiente estéril para PRP

11) recipiente estéril para PPP

12) recipiente estéril para soro

13) 4 pratos Dappen estéreis.

14) Pacote de membrana de colágeno estéril. (Tape Colla ou Fita Neo)

15) rack de tubo de ensaio.

A coleta de sangue e processamento

Os tubos de sangue foram retiradas da região antecubital com um calibre 21 ou 19 gauge agulha borboleta e coletado em amarelo-top tubos de coleta de sangue 4-10ml contendo dextrose de citrato ácido (ACD-A) solução. Dois tubos adicionais de sangue foram recolhidas como descrito acima, exceto em vermelho-top VACUTAINERS 10ml sem anticoagulante. (Cada um dos dois tubos de vermelho-de topo foi marcada com um X) (fig. 1). Os quatro tubos amarelo-top de sangue foram processadas para produzir PRP usando o Gonshor Procedure9 (Figs. 2-4). Os tubos de dois redtop de sangue foram postas de lado a coagular.

Usando a centrífuga de propósito geral descrito na publicação do Gonshor, 9 os dois vermelho-top tubos com sangue coagulado foram centrifugados a 2000 rpm durante 10 minutos ao longo com os quatro tubos de vermelho-top com plasma para a segunda centrifugação (Fig. 3). O soro foi cuidadosamente removida de cada tubo com uma seringa estéril e reunidas, em um recipiente estéril (Fig. 5). Os recipientes contendo PRP (4.5mls), o PPP (6.5mls) e o soro (2,5 mL) foram cobertas e colocadas na operatório cirúrgica, juntamente com um tubo de ensaio de 10% de cloreto de cálcio, pratos Dappen estéreis, 5ml e seringas de 1 ml estéreis (Fig . 6).

ATIVAÇÃO dE PRP

para ativar o PRP para obter um gel de plasma rico em plaquetas, 1 ml de PRP foi distribuído por cada um dos quatro pratos Dappen (Fig. 7). 10% de cloreto de cálcio foram adicionados a cada prato Dappen numa proporção de 1 CaCl 2: 5 em volume PRP (0,2 ml de CaCl2: 1 ml de PRP). O soro foi então adicionada ao PRP calcificado em cada prato Dappen numa proporção de 1 Soro: 2 em volume de PRP (0,5 ml de soro: 1 ml de PRP). O complexo foi deixada em repouso à temperatura ambiente e o tempo de formação do gel de PRP foi registado (Fig. 8). O processo de activação acima foi também conseguida aspirando as quantidades apropriadas de PRP calcificada e soro para um 5mls. seringa. O complexo activado pode então ser entregue através da seringa para qualquer sítio alvo. Quando foi feito enxerto ósseo, osso autógeno, aloenxertos, xenoenxertos ou um enxerto composto foi adicionado ao PRP calcificada, em seguida, foi adicionado soro para produzir um gel de PRP, na presença do material de enxerto (Figuras 9 & amp;. 10). O tempo para a formação do gel PRP foi registada e o complexo enxerto-gel de PRP foi em seguida colocado in situ. Em todos os casos em que foram utilizadas membranas reabsorvíveis, para fornecimento de factores de crescimento in situ, oclusividade celular e /ou a regeneração guiada de tecidos, as membranas foram imersas em PRP calcificada, activado com soro, em seguida, imediatamente colocados in situ entre o osso e tecido macio antes de gel de PRP foi formado. Os tempos de formação de gel in situ de PRP foram registados. Ao plasma pobre em plaquetas (PPP) foi usado como um selante de tecido que também foi activado com cloreto de soro e 10% de cálcio. Depois da distribuição 1 ml de PPP numa solução de cloreto de cálcio prato Dappen foi adicionado numa proporção de 1 CaCl 2: 2,5 em volume PPP (0,4 ml de CaCl2: 1 ml PPP). O soro foi então adicionado em uma proporção de 1 Soro: 1 em volume de PPP (1,0 ml de soro: 1 ml PPP). O complexo foi deixada em repouso à temperatura ambiente durante 10 minutos, em seguida, utilizadas para selar os pontos linha de incisão e sutura cirúrgicas entrada (Fig. 11). Foi deixado em repouso durante 5 minutos in situ. Este processo também foi realizado por aspiração dos respectivos volumes de calcificada PPP, 2 e soro em uma seringa de 5 ml e deixados em repouso durante 10 minutos antes da utilização.

RESULTADOS

O volume de PRP concentrado obtida ascendeu a uma média de 1,1 ml /tubo. Isto comparado favoravelmente com results.9 de Gonshor O volume total de PRP obtido a partir da 4 citrado tubos de sangue foi 4.5mls. O volume de soro obtido a partir dos 2 tubos de sangue completo coagulado após centrifugação foi de 2,5 ml. O volume de PPP obtido foi de 6,5 ml. Para a formação do gel de plasma rico em plaquetas in vitro (Fig. 8), o intervalo de tempo foi de 5-10 minutos. A faixa foi 30-60 segundos em situ. processamento de sangue completo levou aproximadamente 30 minutos. gel de PRP foi formado rapidamente na presença de auto-enxerto (Fig. 9) e do aloenxerto (Fig. 10). Um coágulo de PPP foi formado em 10 minutos, quando o soro foi adicionado ao PPP calcificada (Fig. 11). Este foi usado como um selante de tecido autólogo para os pontos da linha de incisão e sutura entrada cirúrgicos.

DISCUSSÃO

benefícios fisiológicos do PRP

A fim de colher os benefícios fisiológicos do PRP , é da maior importância que os factores de crescimento ser libertado a partir de plaquetas viáveis, uma vez que é durante o acto de exocitose de grânulos de plaquetas que a completa structure.2,3,9 terciária da proteína do factor de crescimento a estrutura terciária, com a sua conformação original é o mais biologicamente estrutura ativa. A conformação molecular permite que a proteína de apresentar apropriadamente o seu local activo para o seu substrato específico para que a catálise pode prosseguir. Anitua et al1 listei uma série de situações em que nortearam secreção de produtos de plaquetas autólogas podem promover a cicatrização e reparação de feridas. As situações são: cirurgia maxilo-facial e enxertos ósseos, cirurgia de implante dental, cirurgia ortopédica e reconstrução óssea, plástica facial e cirurgia plástica, úlceras de pele, cirurgia de retina do olho reparação buraco, medicina desportiva, cartilagem e reparação de tendão. Até à data, a utilização mais generalizada de PRP está em odontologia, 4,5,11,12,15 onde vários autores demonstraram que a administração de PRP em uma variedade de locais cirúrgicos têm rapidamente precipitado tanto duro e macio regeneração de tecidos e repair.1 , 5-7,15,16 Outros afirmam que o uso de plaquetas autólogas podem afetar positivamente o resultado quando autoenxertos, aloenxertos e xenoenxertos são usados ​​para aumento de rebordo alveolar procedures.15,16

a regeneração óssea requer o recrutamento , proliferação e maturação de osteoblastos, os quais são derivados de cells17,18 estaminais mesenquimais e um estudo sugere que produtos libertados de plaquetas também promover a migração de cells.19 estaminais mesenquimais Gonshor9 afirma que a combinação de factores de crescimento PDGF e TGF foi mostrado para acelerar a reparação do osso, 20 promover a proliferação de fibroblastos, aumentar a vascularização do tecido, taxa de formação de colágeno, 21,22 mitose de células-tronco mesenquimais, células endoteliais, assim como osteoblastos, desempenhando papéis importantes na taxa e extensão da formação óssea.

uma série de 20 pacientes submetidos a múltiplas extracções, coágulo PRP foi depositado nas tomadas de um dos lados da boca enquanto a outra serviu de controlo. As biópsias ósseas foram feitas em locais de extracção de entre 10 e 16 semanas. Na maioria dos pacientes com coágulos de PRP, a regeneração óssea era extensa e tecido ósseo compacto com trabéculas foi bem organizada. Em contraste, no grupo de controlo foi principalmente a cavidade cheia com tissue.1 conjuntivo Usando modelos animais alguns autores demonstraram que, tal como nos seres humanos, a adição de PRP-coágulo de implantes de titânio em torno rugosas, no momento da sua implantação em goats23 e minipigs24 melhorada tanto a extensão ea qualidade da regeneração óssea ao redor dos implantes.

o que está iniciando o coágulo?

é um fato fisiológico bem conhecido que o sangue começa a coagular quando é exposto ao colágeno em vivo. O facto de uma peça de colagénio reduzido tempo de activação é evidência de que uma superfície apropriada foi fornecida para a iniciação da cascata de coagulação. Os precursores e enzimas do sistema de coagulação, portanto, deve estar presente no soro a ser utilizado, assim, iniciar a cascata de coagulação. A trombina normalmente não está presente no soro após a coagulação está completa visto que a sua produção é parada pela antitrombina III de inibição de factores 1Xa, Xa, Xla, e Xlla com a ajuda do seu cofactor de heparina, e o que resta é complexada com trombomodulina para a fibrinólise com o ajuda de proteína C, proteína S, ativador do plasminogênio tecidual (tPA), uroquinase plasminogênio ativador do plasminogênio (uPA) e plasmina.

a investigação precisa ser feito sobre a quantificação dos componentes precursoras de coagulação e enzimas de soro e sua estabilidade sob condições variáveis. Outros estudos também precisam ser conduzidos sobre a estabilidade de fatores de crescimento, depois de terem sido libertados a partir de plaquetas.

IN SITU RESULTADOS

Os resultados obtidos in situ são semelhantes aos resultados obtidos por Anitua et al1 quando irrigada superfícies peri-implante com PRP calcificada misturado com sobrenadante extrudido de um coágulo recolhido imediatamente após a colocação do implante.

Os resultados in vitro

As vezes mais tempo de coagulação obtidos in vitro poderia ser uma indicação de que as concentrações de precursores de coagulação e enzimas pode ser relativamente baixa no soro e leva tempo para que as reacções se desenvolvem. No entanto, uma vez que a activação foi iniciada a coagulação subsequente prosseguiu rapidamente. Isto é consistente com a natureza /parácrina autócrina da comunicação intercelular através de mediadores químicos durante a ativação plaquetária. Anitua et AL1 afirma que a administração de plaquetas activadas no coágulo de fibrina ou cola de fibrina proporciona um suporte adesivo que pode limitar a secreção a um local escolhido, e a apresentação de factores de crescimento ligados a plaquetas e /ou fibrina pode resultar num aumento da actividade sobre proteínas recombinantes . Alargado em tempos de activação in vitro poderia ser vantajoso quando ósseo autógeno, aloenxertos e xenoenxertos são para ser misturado com PRP antes da colocação in situ para enxertos cume de aumento, enxertos de manutenção do cume, enxertos de elevação do seio, reparação de membrana schneideriano, bem como uma rápida cicatrização dos tecidos moles e maturação.

CONCLUSÃO

o procedimento aqui apresentado mostra como trombina autóloga no soro do paciente pode ser usado para ativar as plaquetas. Deve proporcionar uma alternativa segura para uso terapêutico. A pronta disponibilidade de PRPgel autólogo com a libertação do factor de crescimento e cola de fibrina autólogos como um selante de tecido mostra que a trombina autóloga no soro de pacientes pode efectivamente activar plaquetas e, assim, proporcionar uma alternativa para continuar a estimulação da regeneração de tecido, reparação e maturação em odontologia e medicina .

Cuidado

* Os níveis de factor de crescimento, contagem de plaquetas e tempos de activação irá variar de indivíduo para indivíduo, bem como com a idade e estado de saúde.

* O envelhecimento soro e PRP podem afetar os tempos de activação uma vez que as proteínas são muito instáveis ​​in vitro.

* Quando este procedimento é usado, devem ser tomadas medidas para assegurar que um ambiente estéril máximo é fornecido para coleta de sangue, tratamento PRP e ativação.

Dr. Smith tem sido na prática privada por 25 anos em New Westminster, BC. Em 2004, ele inventou um procedimento específico do paciente para a ativação de trombina autóloga de plaquetas em plasma rico em plaquetas (PRP).

Saúde Bucal saúda este artigo original.
< p> Agradecimentos

gostaria de agradecer ao Dr. Aron Gonshor de Montreal, Dr. Ross MacGillivray, Dr. Ed Pryzdial, e Dr. Dana Devine do Centro de Pesquisa de sangue, University of British Columbia, por sua discussões de valor inestimável.

Divulgação

O autor afirma não ter interesse financeiro em qualquer empresa ou qualquer um dos produtos mencionados neste artigo.

Referências

1.Eduardo Anitua, Isabel Andia, Bruno Ardanza, Paquita Nurden (3,4), Alan t. Nurden. plaquetas autólogas como fonte de proteínas para a cicatrização e regeneração dos tecidos. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2004; 91: 4-15

2.Rendu F, Brohard-Bohn B. O plaquetas reacção de libertação:. 'Grânulos constituintes, secreção e função, plaquetas de 2001; 12:. 261-73

3.Reed GL. secreção de plaquetas. Em Plaquetas (ed: AD Michelson) ,. Elsevier Science, San Diego de 2002, pp181-95.

4.Marx RE, Carlson ER, Eichstaedt RM, Schimmele Sr, Strauss JE, Georgeff KR. O plasma rico em plaquetas. melhoria do fator de crescimento para enxertos ósseos. Oral Surg Oral Pathol Oral Med 1998; 85:. 638-646

5.Whitman DH, Berry Rl, DM Green. gel de plaquetas: uma alternativa autólogo para cola de fibrina com aplicações em cirurgia oral e maxilo-facial. Jornal maxillofac Surg 1997; 55: 1294-9

6.Marx RE, plasma rico em plaquetas:. Uma fonte de múltiplos factores de crescimento autólogos para enxertos ósseos. In: Lynch Se, Genco RJ, Marx RE (eds). Engenharia de Tecidos: aplicações em cirurgia maxilo-facial e Periodontia. Chicago: Quintessence, 1999:. 71-82

7.Snchez Ar, Sheridan PJ, Kupp LI. plasma rico em plaquetas é o factor de intensificação perfeito? Uma revisão atual. Int J Oral Maxillofac Implants 2003; 18:. 93-103

8.Zimmermann R, Jakubietz R, Strasser E, et al. Diferentes métodos de preparação para se obter os componentes de plaquetas como uma fonte de factores de crescimento para a aplicação local. Transfusion 2001; 41: 1217-1224

9.Aron Gonshor, BSc, PhD, DDS, FRCD (c) * técnica para produzir Plasma Rico em Plaquetas e concentrado de plaquetas:. Antecedentes e processo. O Jornal Interno de Periodontia e Dentística Restauradora. Volume 22, Número 6, 2002.

10.Sonneleitner D, Huemer P, Sullivan Dy. A técnica simplificada para a produção de concentrado de plasma e plaquetas rico em plaquetas para as técnicas de enxerto ósseo intra-orais: a nota técnica. Int J Oral Maxillofac Implants 2000; 15:. 879-882 ​​

11.Anitua E. Plasma rico em factores de crescimento: Resultados preliminares de utilização na preparação de futuros locais para implantes. Int J Oral Maxillofac Implants 1999; 14:. 529-535

12.Lazada JL, Caplanis N, Proussaefs P, Willardsen J, Kammeyer G. rico em plaquetas aplicação de plasma na cirurgia de enxerto do seio: Parte 1-Antecedentes e técnicas de processamento. J Oral Implantol 2001: 27: 38-42

13.Landesberg R, Roy M, Glickman RS.. Quantificação dos níveis de factor de crescimento utilizando um método simplificado de preparação do gel de plasma rico em plaquetas. J Oral Maxillofac Surg 2000; 58:. 297-300

14.Landesberg R, Moses M, Karpatkin M. risco do uso de gel de plasma rico em plaquetas. J Oral Maxillofac Surg 1998; 56: 1116-7

15.Robert E. Marx e Arun K. Garg.. Aplicações Dental e Craniofacial de Plasma Rico em Plaquetas. Quintessence Publishing Co. Inc. 2005.

16.Tischler M. plasma rico em plaquetas. A utilização de factores de crescimento autólogos para aprimorar osso e enxerto de tecidos moles. NY Estado Dent J 2002; 68:. 22-4

17.Ducy P, Schinke T, Karsenty G. O osteoblastos: um fibroblasto sofisticada sob vigilância central. Ciência 2000; 289:. 1501-4

18.Harada S-I, Rodan GA. Controle da função dos osteoblastos e regulação da massa óssea. Nature 2003; 423:. 349-55

19.Oprea Nós, Karp JM, Hosseini MM, et al, Efeito da releasate plaquetas sobre a migração de células ósseas e recrutamento in vitro.. J Craniofac Surg 2003; 14:. 292-300

20.Tang YQ, Yeaman MR, Selsted Me. peptídeos antimicrobianos de plaquetas humanas. Infect Immun 2002; 70:. 6515-7

21.Burnstock G. Purinérgicos de sinalização e proliferação celular vascular e morte. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2002; 10:.. 271-85

22.Schober um, Manka D, von Hundelshausen P, et ai, Deposição da RANTES plaquetas provocando o recrutamento dos monócitos requer P-selectina e está envolvido na neoíntima formação após lesão arterial. Circulation 2002; 106:. 1523-9

23.Anitua E, sistema de implante Andia Ortiz I. BTI: O primeiro sistema de implantes com uma superfície bioativa. Maxilares 2001; 39:.. 2-7

24.Zechner W, Tangl S, Tepper G, et al, Influência do plasma rico em plaquetas na cicatrização óssea de implantes dentários: Uma histológica e estudo histomorfométrico em minipigs . Int J Oral Maxillofac Implants 2003; 18: 15-22
.