da arte abstracta
Fundo
A associação entre as condições periodontais, a colonização oral do fermento e proteínas salivares em indivíduos com diabetes tipo 2 (T2D) ainda não foi documentada. O presente estudo teve como objetivo avaliar a relação entre essas variáveis em diabetes tipo 2 com referência ao sexo.
Métodos
Cinquenta e oito indivíduos diabéticos tipo 2 (23 machos e 35 fêmeas) com a glicemia ao acaso ≥ 11,1 mmol /L foram investigados. condições periodontais (índice de placa [PI], sangramento à sondagem [BOP], profundidade de sondagem [PD] (4 a 6 mm e ≥ 6 mm), leveduras orais, imunoglobulina salivar (Ig) A, IgG e concentrações de proteína total, e número de dentes presentes foram determinados
resultados
condições periodontais (PI [p Art & lt; 0,00001]., BOP [p Art & lt; 0,01] e PD, de 4 a 6 mm [p
& lt; 0,001], salivares de IgG (? g) /mg de proteína (P
& lt; 0,001) e as concentrações de proteínas totais salivares (p
& lt; 0,05) foram maiores no tipo 2 fêmeas diabéticos com Cândida albicans
( . C. albicans
) de colonização em comparação com os homens no mesmo grupo Tipo 2 fêmeas diabéticos com C. albicans
colonização tinha mais dentes em comparação com os homens do mesmo grupo (p
. & lt; 0,0001)
Conclusão
parâmetros clínicos e salivares de inflamação periodontal (BOP e IgG (mg) /mg de proteína) foram maiores no tipo 2 fêmeas diabéticos com orais C. albicans
colonização comparação com os homens no mesmo grupo. Mais estudos são necessários para avaliar a associação do sexo com essas variáveis em indivíduos com diabetes tipo 2
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Fundo
Existe uma relação positiva entre a inflamação periodontal e diabetes tipo 2 (DM2) [1]. A inflamação periodontal tem sido demonstrado ser mais elevada em indivíduos diabéticos com o nível de glucose no sangue aleatório (RBGL) ≥ 11,1 mmol /L em comparação com indivíduos com RBGL & lt; 11,1 mmol /L [1]. No entanto, tem sido demonstrado que não existe diferença na condição periodontal entre indivíduos diabéticos com RBGL) ≥ 11,1 mmol /L e indivíduos não diabéticos [1]. Oral Candida albicans
colonização (C. albicans
) é acentuadamente aumentada em pacientes diabéticos em comparação com indivíduos não diabéticos e hiperglicemia parece desempenhar um papel significativo a este respeito [2, 3]. A diabetes é uma doença metabólica caracterizada por hiperglicemia devido a defeitos na produção de insulina, a acção da insulina, ou ambos. Diabetes mellitus pode prejudicar a função de leucócitos polimorfonucleares que podem predispor os doentes diabéticos a maior risco de doenças, incluindo doença periodontal e infecções orais Candida [2]. Há um papel indistinta de leveduras orais na etiologia e patogénese da inflamação periodontal, no entanto; C. albicans
foi isolado a partir das cavidades orais de indivíduos com inflamação periodontal grave [4]. Tem sido relatado que a Cândida por via oral
colonização é significativamente mais elevada em mulheres em comparação com os machos; no entanto, esta relação permanece discutível [5, 6]. Estudos recentes têm demonstrado que C. albicans
pode colonizar as bolsas periodontais e é significativamente associada com inflamação da mucosa oral em mulheres [4, 7].
Saliva desempenha um papel importante na manutenção de um ambiente bucal saudável. Aproximadamente 95% da imunoglobulina salivar (Ig) A origem dos imunócitos das glândulas salivares, ao passo que, a maioria de IgG entra na cavidade oral, por difusão através das fendas gengivais [8]. A concentração de IgG na saliva é normalmente baixa, de aproximadamente 20 mg /L; No entanto, é aumentado significativamente em indivíduos com inflamação periodontal [9, 10]. Por conseguinte, uma concentração de IgG na saliva levantada é esperado para reflectir a inflamação periodontal [10, 11]. Aumento dos níveis de IgA salivar e IgG foram relatados em indivíduos com diabetes tipo 2 [12].
Uma vez que existe uma associação obscura entre a inflamação periodontal, a colonização de levedura oral, diabetes tipo 2 e sexo, o presente estudo teve como objetivo investigar as condições periodontais, oral leveduras colonização e de proteínas na saliva em seu perfil em indivíduos com diabetes tipo 2, com ênfase no gênero.
Métodos
o estudo foi aprovado pelo comitê de ética regional, em Estocolmo, na Suécia e na comissão de ética do Altamash Instituto de Medicina Dentária, Karachi, Paquistão. informações por escrito (consentimento), impresso em Inglês simples e urdu (língua nativa do Paquistão) foi fornecida. indivíduos consentindo foram convidados para um centro de cuidados de saúde oral para um exame periodontal, coleção de levedura oral e toda saliva amostras não estimuladas (UWS) e medição de RBGL.
critérios de inclusão e exclusão
Moradores do Punjab Colony, Karachi, Paquistão com idade variando entre 45 a 64 anos, foram incluídos no estudo [1, 13]. Indivíduos com diabetes tipo 2 diagnóstico médico e com um RBGL ≥ 11,1 mmol /L foram incluídos. Era obrigatório para os participantes ter lido /entenderam e assinaram o formulário de consentimento antes de serem incluídos no estudo.
"Fumantes" foram definidos como indivíduos fumar pelo menos um cigarro por dia durante pelo menos seis meses. Desde o tabagismo e uso de antibióticos, não-esteróides anti-inflamatórios e esteróides influência inflamação, bem como a colonização por Candida oral, os indivíduos que admitiram estes comportamentos foram excluídos do estudo [2, 14, 15].
População do estudo
Um inquérito por questionário foi realizado na colônia Punjab em que mil indivíduos foram entrevistados [1, 13]. Indivíduos que relataram ter diabetes foram convidados a apresentar os seus registos e /ou prescrições médicas, que confirmaram seu status diabetes. Entre os 1000 adultos entrevistados, 83 indivíduos relataram ter diabetes, dos quais 79 indivíduos tinham diagnóstico médico de diabetes tipo 2. Estas 79 pessoas foram convidadas para um centro de cuidados de saúde oral para medição da RBGL, coleta de amostras de levedura e saliva oral e avaliação do estado periodontal.
Cinquenta e oito indivíduos anuentes (23 machos e 35 fêmeas) satisfizeram os critérios de inclusão e foram admitidos para o estudo. Não houve diferenças significativas na idade, raça, etnia, variáveis socioeconômicas e padrões de vida entre a população do estudo.
Medição de sangue aleatório níveis de glicose
Os indivíduos foram instruídos a não comer ou beber pelo menos duas horas antes de seu RBGL foi gravada. Um glicosímetro (ACCU CHEK, sistema Advantage /tiras de conforto sensor, Roche Diagnostics, Mannheim, Alemanha) foi utilizado para gravar o RBGL que é um método prático para monitorar os níveis de glicemia em indivíduos com diabetes pré-diagnosticado [16-19].
recolha de amostras de leveduras orais
Os participantes foram instruídos a abster-se de comer e beber pelo menos duas horas antes da coleta de amostras de levedura. A amostragem foi realizada 10:00 - 13:00.
Cada amostra de levedura foi coletado por raspagem do dorso da língua, com uma zaragatoa de algodão (COPAN, Amies carvão swab único, CE 0124, Itália). Os esfregaços foram devolvidos para o tubo de contenção imediatamente após a amostragem. leveduras orais são pré-dominante na superfície dorsal da língua; portanto, raspagem de superfície da língua é um método confiável para a detecção de Candida
espécies [15].
identificação de amostras de leveduras orais
Identificação ao nível de espécie foi determinada por um sistema de identificação de leveduras (API 32-C Sistema bioMérieux identificação das leveduras programa, Lyon, França). Se a identificação não era possível com o sistema API 32, o isolado de levedura foi submetido a identificação molecular.
Para o isolamento de ADN, as células de levedura foram suspensos em 200 ul de polimerase estéril Chain Reaction (PCR) e água -grade ADN genómico foi preparado utilizando MagNA puro (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemanha) de um robô preparação de ADN [20]. Para a sequenciação de DNA e análise por PCR, uma região (cerca de 500 pb) do gene 18S de ácido ribonucleico ribossómico foi amplificado por PCR utilizando iniciadores universais e ADN AmpliTaq Gold polymarase. Os primers e os nucleótidos livres dos produtos de PCR foram, em seguida, removidos utilizando o kit de purificação PCR QIAquick (250) (Qiagen, GmbH, Hilden, Alemanha). Os produtos de PCR purificados foram processadas para sequenciação de ADN por Big Dye Terminator Cycle Sequencing usando tecnologia de electroforese capilar ABI em 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Ambas as cadeias dos fragmentos de DNA amplificados por PCR foram sequenciados para evitar erros de sequenciamento [21]. A sequência de DNA foi analisado por um software e procurou no banco de dados de DNA para identificação explosão levedura e digitação [22, 23].
Recolha de amostras de saliva inteiros não estimuladas
As amostras UWS foram obtidos imediatamente após a coleta de leveduras orais. Para coletar as amostras UWS, os participantes estavam sentados em uma posição inclinada para a frente em uma cadeira confortável e instruídos a cuspir durante cinco minutos contínuos (sem engolir) para um funil de plástico limpo ligado a um cilindro de medição [24, 25]. O volume de saliva foi medido imediatamente e as amostras foram congeladas em 3,5 ml descartáveis tubos de plástico com tampa (Sarstedt, lote: 4071801, Alemanha). Todas as amostras congeladas foram selados em uma caixa térmica contendo gelo seco e transferido para o Hospital Karolinska University (Divisão de Imunologia Clínica) Huddinge, Suécia.
Determinação de IgG salivar, IgA e concentrações de proteínas totais
Níveis de IgG salivar, IgA e a concentração de proteína total foram determinados como descrito anteriormente [11]. Em breve, placas de microtitulação (Corning Inc. NY, EUA) foram revestidos com 100 pi por poço de IgG anti-humano e anti-IgA humana (DAKO S /A, Dinamarca) em tampão de revestimento (tampão de carbonato-bicarbonato 0,05, pH 9,6) e incubou-se à temperatura ambiente durante 24 horas. Após lavagem, 100 uL /poço de IgG (calibrador proteína de soro humano. Dako A /S, Dinamarca) padrões e IgA (colostro humano), controlo positivo (saliva de um indivíduo saudável), o controlo negativo apropriadamente diluído (saliva de adultos com deficiência de IgA amostras sujeitas) e saliva foram adicionados aos respectivos poços da microplaca. Após incubação à temperatura ambiente, as microplacas foram lavadas para remover as proteínas não ligadas. fosfatase alcalina purificada conjugado de IgG anti-humana e IgA (DAKO S /A IgA /AP, Dinamarca) foram adicionados (100 ul /poço), e as microplacas foram incubadas durante três horas à temperatura ambiente. Após a lavagem, /poço de substrato (p-nitrofenil fosfato
) em dietanolamina 1,0 M, MgCl 0,5 mM
2, pH 9,8, (Sigma S-0942) foi adicionado 100 uL. A absorvância foi lida a 405 nm num fotómetro de placas de microtitulação (Molecular Devices, Vmax, Sunnyvale, CA, EUA).
O ácido bicinconínico (BCA ™) Protein Assay Kit Reagente (Produto No. 23227, Pierce Chemical, Co ., Rockford, IL, EUA), foi usada para determinar a concentração total de proteína nos sobrenadantes de saliva. Utilizando albumina como padrão, alíquotas de saliva (200 ul /poço) foram colocados em placas de microtitulação. O reagente de ensaio de proteína foi adicionado, e as placas foram incubadas a 37 ° C durante 30 minutos. densidades ópticas foram lidas a 550 nm num fotómetro de placas de microtitulação (Molecular Devices, Vmax, Sunnyvale, CA, EUA).
exame periodontal, número de dentes e
Um índice de placa boca cheia vestindo dentadura (PI), sangramento à sondagem (BOP) e profundidade de sondagem (PD) (4 a 6 mm e ≥ 6 mm) foram medidos em quatro locais (mesial, distal, bucal e palatal /lingual) de cada dente [1, 26-28]. Os indivíduos foram investigados para o número de presente dentes (excluindo maxilar e terceiros molares inferiores) e uso de próteses. Dentes com restos de raiz única embarcados foram consideradas como desaparecidas. A porcentagem do número de dentes presentes também foi calculada pela seguinte fórmula: Análise estatística
A análise estatística foi realizada utilizando STATISTICA v 6.0, (Statsoft, Inc. 1984-2005, Tulsa, OK, EUA).. A significância das diferenças das variáveis dependentes (níveis de Ig, a concentração de proteína, Candida oral,
colonização, número de dentes e condições periodontais) em indivíduos diabéticos tipo 2 foi determinada por meio de regressão logística múltipla. As variáveis independentes foram classificados como variáveis dicotômicas; por exemplo, tipo 2 homens diabéticos com C. albicans
colonização; 0 e tipo 2 fêmeas diabéticos com C. albicans
colonização; 1. Para as comparações múltiplas, foi realizada Bonferroni Post Hoc
teste.
Resultados da População do estudo
Dos 58 participantes, houve 29 indivíduos (17 homens e 12 mulheres) com C. albicans
colonização. Neste grupo, a idade média de machos e fêmeas foi de 50,5 anos (variando de 45-64 anos) e 49,3 anos (intervalo 45-59 anos) respectivamente. Em indivíduos sem C. albicans
colonização (n = 29), havia seis homens e 23 mulheres. As idades médias de homens e mulheres deste grupo foram 50,6 anos (intervalo 45-56 anos) e 51,1 anos (intervalo 47-59 anos) correspondente.
As durações de diabetes tipo 2 em indivíduos com e sem C. albicans
colonização foram de 10,5 (variação 8-14 anos) e 10,8 anos (variando de 8-12 anos) correspondente.
colonização de levedura oral em indivíduos com T2D
Oral C. albicans
colonização foi significativamente maior nos diabéticos tipo 2 machos comparado com fêmeas, como mostrado na Figura 1 (p
& lt; 0,01). Figura 1 colonização Oral Candida (C.) em relação ao sexo entre diabetes tipo 2. † P Art & lt; 0,01. Outros (machos): C. lusitaniae
Outros (fêmeas): C. kefyr
. † Diferenças no orais de Candida albicans
(C. albicans
) colonização entre o tipo 2 machos diabéticos e fêmeas foram testadas por meio de regressão logística múltipla. Para comparações múltiplas, foi realizada Bonferroni Post Hoc
teste.
Prevalência de prótese vestindo Online em diabetes tipo 2 com C. albicans
colonização, prótese de desgaste foi mais frequente no sexo masculino (47% ) em relação ao sexo feminino (16,6%). Não houve diferença em 2 indivíduos diabéticos em tipo de desgaste sem dentadura C. albicans
colonização (dados não mostrados).
Taxa de fluxo salivar (SFR), salivares de IgG (? G) /mg de proteína, IgA (mg) /mg proteína e concentração de proteína total em relação à C. albicans colonização, número de dentes e sexo
Tipo 2 fêmeas diabéticos tinha uma SFR inferior (média de 0,15 ml /min; gama de 0,1-0,3 ml /min) em comparação com os homens com T2D (média de 0,38 ml /min; gama de 0,2-0,5 ml /min) (p Art & lt; 0,05).
fêmeas com C. albicans
colonização tinham níveis mais elevados de IgG (mg) /mg de proteína ( p Art & lt; 0,001) e concentração de proteína total (p Art & lt; 0,05) em comparação com os homens com C. albicans
. Estes resultados são mostrados na Figura 2 e na Figura 3. As fêmeas também teve mais dentes (número de teeth19.5 significar; gama 13-21 dentes), em comparação com os machos (número de dentes 12 média; gama 10-16 dentes (p) Art & lt; 0,0001). Figura 2 salivar IgG (mg) /mg proteína e IgA (mg) /concentrações de proteína mg em diabetes tipo 2 com e sem C. albicans orais colonização em relação ao sexo. # P Art & lt; 0,001 indica uma concentração mais elevada de IgG salivar (ug) /concentração de proteína mg em tipo 2 diabéticas em comparação com homens com diabetes tipo 2 e de C. albicans orais
colonização. Diferenças nos níveis de IgG salivar (mg) /mg de proteína e IgA (mg) /mg de proteína no tipo 2 machos diabéticos e mulheres com e sem oral de Candida albicans
colonização (C. albicans
) foram testados usando logística múltipla regressão. Os dados são média ± 2 desvios-padrão.
Figura concentrações de proteína total de 3 salivar em diabetes tipo 2 com e sem C. albicans orais colonização em relação ao sexo. * P Art & lt; 0,05. As diferenças nas concentrações de proteínas totais salivares no tipo 2 homens diabéticos e mulheres com e sem Candida albicans orais
colonização (C. albicans
) foram testados por meio de regressão logística múltipla. Os dados são média ± 2 desvios-padrão.
Entre tipo 2 machos e fêmeas diabéticas sem C. albicans
colonização, IgG salivar (mg) /níveis de proteína mg foram 32,2 ng /mg (intervalo 7-107,7 ug /mg) e 38,6 ug /mg (gama 2,8-79,3 ug /mg) de modo correspondente. Nestes indivíduos, a média de IgA salivar (mg) /níveis de proteína mg foram 364,9 g /mg (intervalo de 155-1489 ug /mg) e 391,8 mg /mg (intervalo 90-1863 ug /mg). As concentrações de proteína total salivar, nestes indivíduos, foram 2181 mg /L (gama 879,5-3.812,3 mg /L) e 2.569,4 mg /L (gama de 1914,8-3.107,7 mg /L), respectivamente.
número de dentes médio em diabéticos tipo 2 machos e fêmeas sem C. albicans
colonização foram de 12,1 (intervalo 9-15) e 15,6 dentes (intervalo 9-16), respectivamente.
condições periodontais e número de dentes em relação a C. albicans
colonização e género
tipo 2 fêmeas diabéticos com C. albicans
colonização teve maior PI (p Art & lt; 0,00001), BOP (p Art & lt; 0,01) e PD (4-6 mm) (p
& lt; 0,001) em comparação com os machos do mesmo grupo. Estas mulheres tinham mais dentes (número de dentes 19,5 dizer, variando 16 a 26) em relação ao tipo 2 machos diabéticos com C. albicans
colonização (número médio de dentes 12; intervalo de 10 a 16) (p Art & lt; 0,0001). Estes resultados são mostrados na Figura 4. A Figura 4 condições periodontal em sujeitos diabéticos tipo 2 com e sem Candida albicans orais (C. albicans) colonização relativamente ao sexo. Os dados são média ± 2 desvios-padrão. * P Art & lt; 0,00001 # p Art & lt; 0,01 • p Art & lt; 0,001. §p Art & lt; 0,0001. PI: Índice de Placa (%). BOP: sangramento à sondagem (%). PD: bolso profundidade de sondagem (%). As diferenças entre PI, BOP, Pd (4 a 6 mm e ≥ 6 mm) entre o tipo 2 machos diabéticos (n = 17) e fêmeas (n = 12) com Cândida albicans
(C. albicans
) foram colonização testado por meio de regressão logística múltipla. Os dados são média ± 2 desvios-padrão.
Discussão Entre os indivíduos não-diabéticos, C. albicans
colonização tem sido relatada a ser maior no sexo feminino dentados comparação com os homens [6]. O presente estudo mostrou que os parâmetros clínicos e salivares de inflamação periodontal (BOP e IgG por miligrama de a concentração de proteína total da saliva [IgG (mg) /mg de proteína]) são elevados no tipo 2 fêmeas diabéticos com orais C. albicans
colonização comparação com os homens no mesmo grupo.
sabe-se que os diabéticos têm um SFR reduzido em comparação com controles não-diabéticos e é independente dos níveis de glicemia [29, 30]. No presente estudo, homens e mulheres tinham níveis de glicose no plasma ocasional semelhantes; no entanto, a SFR era quase duas vezes mais elevada nos homens em comparação com as fêmeas. Uma explicação que foi dada no presente contexto é que o tamanho das glândulas salivares é menor em comparação com as fêmeas machos [31]. A concentração de IgG salivar levantada tem sido relatada em pacientes com diabetes tipo 2 [12]. Vale ressaltar que a SFR diminuição concentra as proteínas salivares, expressando assim concentrações elevadas de proteínas salivares incluindo IgA e IgG. Por conseguinte, as concentrações de IgA e de IgG salivares deve ser expressa como IgA (ug) /mg de proteína e de IgG (? G) /mg de proteína, para normalizar contra volume. Um aumento do nível de IgG salivar (ug) /concentração de proteína mg reflecte uma inflamação bucal levantada [11]. A intensidade da inflamação periodontal tem sido associada com o número de dentes afectados [32]. Isto reflecte o facto de um maior número de dentes com tecidos periodontais inflamadas permitir que um grande derrame de IgG no interior da cavidade oral, através das fendas gengivais. Em indivíduos com C. albicans
colonização, os níveis de IgG (mg) /mg de proteína eram quase duas vezes mais elevada nas mulheres, comparado com os machos. No entanto é de salientar que estas mulheres tinham quase o dobro de dentes como os machos do mesmo grupo. Por conseguinte, entre os indivíduos diabéticos tipo 2 com C. albicans
colonização, a presença de mais dentes parece ser a explicação mais provável para a mais elevada de IgG (? G) /mg de proteína em níveis de fêmeas em comparação com os machos.
Outros factores que podem influenciar a colonização por Candida oral incluem dentadura-vestindo, xerostomia e idade [33-35]. No presente estudo, cerca de 74% dos homens foram abrigando C. albicans orais
em comparação com 23% no sexo feminino. Isto está de acordo com outro estudo em que C. albicans
colonização era dominante entre os homens (83%) em comparação com as mulheres (56%) [36]. Demonstrou-se que a Cândida por via oral
colonização pode aumentar até seis vezes na dentadura portadores [37]. Os resultados atuais mostraram que em indivíduos com C. albicans
colonização, uso de prótese foi mais frequente no sexo masculino (47%) em comparação com as mulheres (16,6%). Uma explicação neste contexto pode ser que dentaduras (parcial ou total) obstruir o fluxo salivar das glândulas salivares menores e a livre troca de oxigênio. Assim, o nível resultante de pH baixo facilita o crescimento de C. albicans
[37]. No presente estudo, entre os indivíduos com C. albicans
colonização, os machos tinham uma SFR maior em comparação com as fêmeas. No entanto, estas taxas de fluxo foram menores do que a SFR em indivíduos não diabéticos (0,5 ml /min) [38]. Sabe-se que existe uma relação inversa entre a SFR e colonização por Cândida oral. Contudo; apesar de ter uma SFR maior em comparação com as fêmeas, os machos tinham aumentado C. albicans
colonização em comparação com as fêmeas. Isto pode mais uma vez ser associado com vestindo dentadura que foi cerca de três vezes mais comum em homens diabéticos tipo 2 (47%) em comparação com as mulheres (16,6%) com diabetes tipo 2.
Existe uma relação positiva entre C. albicans
colonização e idade [35]. Contudo; na idade estudo não pode ser o efeito sobre as diferenças em C. albicans
colonização, tal como foi ajustada em ambos os grupos.
Os presentes resultados mostram um IP maior, BOP e Pd (4 a 6 mm) em mulheres com C. albicans
colonização comparação com os homens. No entanto, é notável que estas mulheres tiveram SFR inferior e tinham aproximadamente o dobro de dentes como machos. Portanto, um maior número de dentes e SFR reduzida pode, eventualmente, ser associada a um aumento condições periodontais e salivar IgG (mg) /mg de proteína e concentração de proteína total nestas mulheres, comparado aos machos.
Conclusão
parâmetros clínicos e salivares de inflamação periodontal (BOP e IgG (mg) /mg de proteína) foram maiores no tipo 2 fêmeas diabéticos com orais C. albicans
colonização comparação com os homens no mesmo grupo. Estas características específicas de gênero podem oferecer um caminho para melhorar a saúde oral para mulheres com diabetes tipo 2. No entanto, mais estudos são necessários a este respeito.
Declarações
Agradecimentos
Os autores agradecem a Maria Guglielmeti (Departamento de Medicina Laboratorial, da Divisão de Microbiologia Clínica do Hospital Universitário Karolinska em Huddinge, Estocolmo, Suécia), destinado sua cooperação em investigações micológicos. Os autores também gostaria de reconhecer a colaboração de higienista dental Sohail Hussain e Mohammad Noman (Altamash Instituto de Medicina Dental, Karachi, Paquistão) durante todo o projeto. Arquivos enviados originais
dos autores para imagens
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Os autores declaram que têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
FJ realizados os exames clínicos e salivares, realizaram a análise estatística, avaliadas resultados e escreveu o manuscrito. LK realizadas as investigações micológicos e contribuiu na redação do manuscrito e revisão. EUA contribuiu para investigações salivares, escrita manuscrito e revisão. MA ajudou na avaliação periodontal clínica dos sujeitos do estudo. BK contribuiu para manuscrito escrita, bem como revisão. PE-E supervisionou o projeto e contribuiu para investigações salivares, avaliação de resultados, a redação e revisão. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
