odontogênico produtoras de queratina da arte abstracta
Fundo
queratina produtoras de cistos odontogênicos (KPOCs) são um grupo de lesões císticas que são muitas vezes agressiva, com altas taxas de recorrência e multifocalidade. KPOCs incluídos cisto orthokeratinised odontogênico (OOC) e cistos odontogênicos paraqueratóticas, que agora são considerados tumores odontogênicos queratocísticos tumores verdadeiros denominados (KCOTs). GLUT1 é um transportador de proteína que está envolvida na absorção activa de glicose através das membranas celulares e que é sobre-expresso em tumores, em estreita correlação com a taxa de proliferação e tomografia por emissão de positrões (PET), os resultados de imagiologia.
Métodos
Uma série de 58 cistos odontogênicos produtoras de queratina foi avaliada histologicamente e imunohistoquímica em termos de expressão GLUT1. Resultados
diferentes dados foram correlacionados utilizando o modelo de regressão beta em relação ao tipo histológico e expressão imuno-histoquímica de GLUT1, que foi quantificada utilizando dois métodos morfológicas diferentes.
Casos KPOC composta por 12 OOCs e 46 KCOTs, este último correspondente a 6 sindrômica e 40 KCOTs esporádicos. expressão GLUT1 foi muito baixa em casos OOC comparação com casos KCOT, com diferenças estatisticamente significativas quando a quantificação foi considerada. Diferentes padrões GLUT1 localização foram revelados por imunocoloração, com as células parabasais mostrando maior reatividade em KCOTs. No entanto, entre os casos KCOTs, expressão GLUT1 foi incapaz de estabelecer diferenças entre os casos sindrômicos e esporádicos.
Conclusões
expressão GLUT1 diferenciado entre OOC e casos KCOT, com expressão significativamente maior no KCOTs, mas não diferenciar entre sindrômica e esporádica casos KCOT. No entanto, dadas as características estruturais do KCOTs, que a hipótese de que Metodologia de imagens de PET provavelmente não é uma ferramenta de diagnóstico útil para KCOTs. São necessários mais estudos de expressão GLUT1 e exame PET em série KCOT para confirmar esta última hipótese.
Palavras-chave
Glucose proteína transportadora Imunohistoquímica queratina produtoras de cisto queratocístico tumor odontogênico odontogênico Orthokeratinised cisto odontogênico Positron tomografia por emissão de fundo
Keratin- que produzem cistos odontogênicos (KPOCs) formam um grupo heterogêneo de lesões císticas que muitas vezes são agressivos em carácter, com altas taxas de recorrência e multifocalidade [1], associada a uma atividade proliferativa marcada [2, 3]. O espectro lesional de KPOCs inclui cistos principalmente orthokeratinised odontogênicos (OOC) e ceratocistos, que, de acordo com as orientações da OMS [4] também são referidos tumores odontogênicos como queratocísticos (KCOTs), de acordo com KCOTs serem verdadeiros crescimentos tumorais. uma gestão eficaz desses lesões císticas está sujeita a discussão frequente [5] e transformação maligna é possível, embora muito raro [6].
glicose como fonte de energia primária, entra intracelularmente por uma família de transportadores chamada GLUTs, dos quais pelo menos 13 membros estão agora sabem com expressão específica de células [7]. Dentro destas famílias, GLUT1 ou glicose eritrócitos transportador é sobre-expressos em tumores, particularmente em lesões malignas, como a glicose é a principal fonte energética destes crescimentos neoplásicas [8]. Isto é baseado na utilização de uma metodologia de imagem, tomografia chamado de emissão de positrões (PET) sozinho ou combinado com tomografia computadorizada (PET-CT), que é utilizado como traçador o análogo da glicose 18F-fluorodeoxyglucose (18FGD) [9].
na área de cabeça e pescoço, GLUT1 também foi overexpressed em determinados momentos, em alguns tumores benignos [10, 11], particularmente aqueles com atividade proliferativa marcada [12]. Do mesmo modo, em alguns tumores benignos odontogénicos com elevadas taxas de recorrência, tem-se observado que a sobre-expressão GLUT1, na medida em que ele pode ser útil para o PET ou PET-CT para avaliar a ocorrência destes tumores benignos [13]. No entanto, em nosso conhecimento, expressão GLUT1 não foi investigada em KPOCs com uma alta taxa de recorrência, que são actualmente considerado como um verdadeiro tumores odontogênicos com uma alta probabilidade de recaída [1, 4, 5].
No presente estudo, destinado a analisar, pela primeira vez, para o nosso conhecimento, expressão GLUT1 de uma série de KPCOs, para diferenciar subtipos histológicos e avaliar o potencial para o uso do PET no diagnóstico destas lesões, semelhante ao que foi reportado em outros tumores benignos da cabeça e do pescoço com altas taxas de recidiva [13].
Métodos
foram estudados 58 casos de KPOCs que foram diagnosticados durante um período de 10 anos (2005-2015) no Departamento de Patologia da La Fe Hospital universitário, Valencia, Espanha. material histológico foi recuperado do armazenamento. Nosso trabalho fazia parte de um projeto previamente aprovado pelo Institutional Review Board (Comité Ético de Investigação Clínica -CEIC-) (protocolo nº. 2013/0045) e as orientações descritas na Declaração de Helsinki, tal como revista em Seul -Corea- 2008 foram rigorosamente seguidas. Antes de realizar a cirurgia oral, consentimento informado foi obtido em todos os pacientes, comunicando a participação de seus biópsia orais neste estudo imuno-histoquímico. Foram selecionados casos usando um patológica base de dados de diagnóstico (Pat Win® versão 4.1.4). Foi realizada uma pesquisa retrospectiva de 10 anos empregando os termos de pesquisa "ceratocisto", "cisto primordial", "tumor odontogênico queratocístico", "orthokeratinised cisto odontogênico", e "cisto queratinizado", entendendo a nomenclatura variada [14] utilizada nestas lesões .
Todos os cortes histológicos originais foram revistos microscopicamente por dois observadores (BVS, FVS), e foram reclassificados utilizando as diretrizes da OMS de 2005 (4) e critérios diagnósticos descritos no OOC [15, 16]. Os dados clínicos, radiológicos e cirúrgicos em todos os pacientes foram recolhidos a partir dos registros médicos que utilizam a plataforma Mizar® 2.0 com a ajuda do visor Luna® 3.0. Notamos os seguintes dados: idade; gênero; localização da lesão (mandibular e /ou maxilar); /radiológicos achados clínicos de acompanhamento, número de recorrências; e todos os dados clínicos, patológicos ou genéticas sugerindo uma associação sindrômica. Foram utilizados os critérios de Kimonis et al. [17] para o diagnóstico de síndroma de carcinoma basocelular nevóide (SCBCN).
Secções de 5 um de espessura foram cortadas a partir dos blocos embebidos em parafina originais e montadas em lâminas de vidro poli-Llysine- revestido antes da coloração imuno-histoquímica. Epitopo recuperação prosseguiu a 97 ° C durante 20 min em solução de pH elevado EnVision FLEX alvo de recuperação, seguido por lavagem durante 5 minutos em tampão de lavagem EnVision FLEX. GLUT 1 foi imunocorado utilizando um anticorpo policlonal concentrado (Mestre Diagnostica, Granada, Espanha), na diluição 1/50. O tempo de incubação foi de 20 min e a coloração foi visualizada utilizando o sistema de alta-pH EnVision FLEX. secções placentária e eritrócitos membranas servido, respectivamente, como externa e interna, os controlos positivos de coloração e os controlos negativos foram secções de teste simuladas-corados (o anticorpo primário foi substituído por solução salina tamponada com fosfato -PBS-).
GLUT 1 a imunocoloração nível epitelial do KPOC foi quantificada utilizando o sistema de microscopia eletrônica digital Leica DMD108 (Leica Microsystems
©, Wetzlar, Alemanha) e dois procedimentos diferentes. Em primeiro lugar, a espessura (valores de 0 a 100%) do epitélio marcado por GLUT1 foi medida. Em segundo lugar, uma pontuação de imunorreactividade para GLUT1 (IRS-GLUT1), com base no descrito por IRS Remmele et ai. [18], foi criada. IRS avalia dois parâmetros: a intensidade da imunocoloração (0 = ausente, 1 = fraco; 2 = moderada, 3 = forte) e percentagem de células marcadas (valores de 0 a 4: 0 = 0%; 1 = 1-25%; 2 = 25-50%, 3 = 50-75%; 4 = 75-100%). Produto de ambos os parâmetros fornece os IRS (valores de 0 a 12). Além disso, a localização de imunocoloração (basal, suprabasal, intermédia ou superficial) foi registada.
Os resultados obtidos foram expressos como a média, desvio padrão (SD), mediana e gama interquartis para cada tipo lesionada. Para contrastar as diferenças na expressão de GLUT1, a espessura percentual do epitélio coradas e pontuação IRS foram comparados, utilizando o modelo de regressão beta, redimensionando as variáveis "pontuação" e "espessura percentual manchado" no intervalo [0-1]. A análise estatística foi realizada utilizando o software estatístico R, versão 3.1.2, considerando um valor de P menor que 0,05 como indicativo de significância estatística.
Resultados Após análise histológica, os 58 KPOCs foram classificados, utilizando os critérios da OMS, em 46 KCOTs e 12 OOCs. Dos 46 KCOT casos, seis foram considerados sindromática KCOT (S-KCOT) porque outras lesões ou anormalidades consistentes com a presença de SCBCN também foram anotados. A tabela 1 resume os dados epidemiológicos, bem como a frequência de recidivas, com base em informações da clínica e radiológica follow-up. Notavelmente, o diagnóstico em nenhum caso, em nossa série foi de imagem realizados usando PET.Table 1 epidemiológicos e dados de acompanhamento
tipo lesional
N ° casos
média idade (anos)
M /F rácio
Acompanhamento
um
% recorrência
Localização
b
Mb
-
83,33%
OOC
12
35,50 ± 12,10
7/5
39,0 ± 26 , 01
0%
Mx
-
16,66%
Mb
-
75,00%
NS-KCOT
40
45,67 ± 21,20
21/19
29,6 ± 31,04
35%
Mx
viajantes -
22,50%
Mb & amp; Mx
-
2,50%
Mb
-
33,33%
S-KCOT
6
23,00 ± 18,07
1/5
112,0 ± 76,10
100%
Mx
-
16,33%
Mb & amp; Mx
-
50,00%
um clínico-radiológica seguimento médio expresso em meses
b Mb: mandibular; Mx: maxilar
S-KCOT (seis casos) ocorreu em cinco fêmeas e um macho, com idade entre 9-54 anos, ea idade média dos pacientes no momento do diagnóstico foi de 23 ± 18,07 anos. Todos os pacientes tiveram recidivas; o número médio de recorrências foi de 3 ± 1,41 ao longo de um tempo médio de acompanhamento de 112 ± 76,1 meses. As lesões ocorreram na mandíbula e maxila (três pacientes), mandíbula sozinho (dois pacientes), e no maxilar sozinho (um paciente). A região pré-molar foi a mais acometida, seguida pelas regiões molares e anterior
não-sindrômica KCOT (NS-KCOT; 40 casos) ocorreu em 21 homens e 19 mulheres (proporção M /F: 1,10). Com uma média idade de 45,67 ± 21,2 anos (variação, 9-84 anos), e 35% dos pacientes (14 de 40) recidivas (uma média de 1,4 ± 0,6 recaídas) ao longo de 29,6 ± 31,04 meses de follow-up. De todos os pacientes, 75%, 22,5%, e 2,5% tinham lesões na mandíbula, maxila, ou ambos, respectivamente. A região mandibular pré-molar foi mais acometido, ea região anterior menos afetados.
OOCs foram observados em sete homens e cinco mulheres, ea média de idade no momento do diagnóstico foi de 35,5 ± 12,1 anos (variação, 19-65 anos). Do total de pacientes, 83,5% tinham envolvimento mandibular, exclusivamente, e apenas dois apresentavam lesões na maxila. O molar área mandibular, seguida da região mandibular pré-molar, foi o local mais acometido. Cinco dos doze cistos (41,6%) foram associados com dentes impactados e foram inicialmente clínica e radiologicamente diagnosticada como cistos dentígeros. Nenhum paciente OOC tinha lesões múltiplas, e nenhum paciente teve recorrência ou desenvolvido de outra lesão durante um tempo médio de acompanhamento de 39 ± 26,1 meses (variação, 9-95 meses), confirmando uma diferença significativa (p = 0,039
) comparação com OOC contra todas KPOCs em relação à recorrência.
Após a realização de imuno-histoquímica em nossa série KPOC (Fig. 1 e 2), observou-se que a expressão GLUT1 era baixa e imperceptível no OOC, mostrando apenas uma reactividade citoplasmática e membranosa fraco, que foi distribuído, na basal, parabasais e camadas intermediárias de epitélio cística, por vezes, com predominância na reatividade basal. Em contraste, a imunorreactividade foi maior em KCOT, com imunocoloração membranosa mais pronunciado em parabasais do que em células basais. As células intermediárias de KCOT também foram marcados com a imunocoloração moderada mas, muitas vezes, um pouco maior do que células basais. Além disso, observou-se que GLUT1 imunocoloração foi muito semelhante, tanto em intensidade e localização, em casos NS-KCOT S-KCOT e. FIG. expressão 1 GLUT1 em KCOT e OOC. KCOT (a e b) mostrando um GLUT1 pronunciado imunocoloração com um padrão predominantemente membranosa (a). Imunoreatividade é especialmente marcada na parabasais e níveis epitélio intermediários (b). imunocoloração GLUT1 fraco em OOC (c e d), com um padrão citoplasmático e também ligeiramente membranosa granular, um tanto mais pronunciada a nível basal (d). (GLUT1, 200x e 400x)
Fig. expressão 2 GLUT1 em KCOT e OOC. vista panorâmica e detalhes de imunocoloração GLUT1 em KCOT (a, b, c, d) e as amostras OOC (E, F, G e H), mostrando a diferente proporção da espessura do epitélio com imunocoloração GLUT1. Eritrócitos (asteriscos) aparece com uma marcação intensa, como um controlo positivo interno. (GLUT1, 100, 200x e 400x)
Quanto quantificação da expressão GLUT1, o IRS-GLUT1 (pontuação com valores que variam de 0 a 12) resultados numéricos foram geralmente baixas (Tabela 2), especialmente nos casos OOC (pontuação dizer: 3,84 ± 2,93) em comparação com casos KCOT (pontuação dizer: 5,53 ± 2,62). ambas as pontuações médias comparadas, através do modelo de regressão beta, uma tendência estatística próxima da significância (p = 0,057
) foi encontrada, em relação ao IRS de grupo OOC, que foram menores do que aqueles no grupo KCOT. Da mesma forma, entre os casos KCOT, os casos S-KCOT mostrou uma IRS ligeiramente superior (6,28 ± 2,13) que os casos NS-KCOT (IRS: 5,37 ± 2,72) e que os valores de IRS de ambos os subgrupos S-KCOT e NS-KCOT, embora sem diferença significativa (p = 0,477
) .table 2 GLUT-1 expressão em casos KPOC
por outro lado, na avaliação da expressão pela percentagem espessura epitelial GLUT1 + (Tabela 2) (fig. 2), descobriram que casos OOC ter uma espessura menor (31,46 ± 19,94%), com GLUT1 + imunocoloração do que os casos KCOT (56,61 ± 22,34%), ea diferença foi estatisticamente significativa (p
= 0,002). Assim, a análise da percentagem de espessura do epitélio GLUT1 + coloração permitiu a discriminação dos dois subtipos KPOC. Finalmente, em S-KCOT subgrupo, a espessura percentual com GLUT1 + imunocoloração (66,42 ± 17,96%) foi maior do que nos casos esporádicos (NS-KCOT) (52,03 ± 22,60%), embora sem diferença significativa (p
= 0,128).
Discussão no presente estudo, analisamos pela primeira vez para o nosso conhecimento, a expressão de GLUT1, um transportador de proteína envolvida no transporte activo de glucose através das membranas celulares, de uma série de KPOCs, que constituem um grupo heterogêneo de lesões odontogênicas císticas, que muitas vezes são agressivos em carácter, com altas taxas de recorrência e multifocalidade [1], e estão associados a uma atividade proliferativa marcada [2, 3].
expressão GLUT1 tem uma relação importante com a metodologia 18FGD-PET, uma modalidade funcional de geração de imagens em rápido desenvolvimento que tem mostrado grande promessa no campo da educação primária, recorrente e detecção de tumor metastático, bem como no planejamento e monitoramento do tratamento de vários tumores [19] .
GLUT1 ou transportador de glucose de eritrócitos é o membro mais conhecido da família dos transportadores GLUTs independentes da insulina que são sobre-expressos em lesões tumorais [7], especialmente os malignas, dado o aumento de consumo de glucose presente em células tumorais necessários para fornecer energia para a proliferação de células [8]. expressão GLUT1 em diferentes modelos de crescimento de tumor tem sido estreitamente relacionada, em primeiro lugar, com a taxa de proliferação de células, e a segunda, com a eficácia da metodologia 18FGD-PET como técnica de imagiologia de diagnóstico [20], uma vez que, como a glicose, 18FDG passa através a membrana celular através de GLUTs, e, em seguida, é submetida a fosforilação por hexoquinase para formar FDG-6-fosfato. GDF-6-fosfato não é metabolizado ainda mais, e se acumula em tecidos com o metabolismo da glucose [21].
Dentro do espectro lesional de KPOC, formas císticas de carácter relativamente inócuo foram identificadas, tal como o chamado OOC [ ,,,0],15, 16]; ceratocistos e formas agressivas também incluídos, classicamente denominadas [1] e hoje chamado KCOT [4]. Estas últimas lesões mostram marcada atividade proliferativa [2, 3] e têm um alto potencial de recorrência [5], a ponto de ser considerado o verdadeiro crescimento do tumor odontogênico [4].
Em nossos resultados, verificou-se que o OOC presente em basal, parabasais e camadas intermediárias uma expressão muito limitado de GLUT1. Comparativamente casos KCOT mostram uma alta reatividade, voltada principalmente para a camada de células parabasais. Além disso, os níveis de expressão de GLUT1 e quantificados em OOC KCOT mostrou uma diferença estatisticamente significativa (ou estavam perto de significância estatística) de acordo com a espessura do epitélio cística marcada por GLUT1 ou IRS-GLUT1, respectivamente. No entanto, em nosso estudo, expressão GLUT1 não discriminar entre sindrômicos e esporádicos de KCOT.
Nos tumores, expressão GLUT1 está bem correlacionada com as taxas de proliferação celular dado o metabolismo da glicose ativa de tumores altamente proliferação [21]. Esta relação foi confirmada em nosso estudo pelas claras diferenças na expressão de GLUT em OOC e KCOT. Nossos resultados parece estar de acordo com os de outros estudos que relataram diferenças óbvias nas taxas de proliferação de ambas as lesões odontogênicas císticas, utilizando vários marcadores imunoistoquímicos de proliferação, tais como Ki 67 [2] ou ciclina D1 [2, 3]. GLUT1 expressão foi estabelecida nos casos KCOT, com uma intensidade mais elevada, em especial ao nível de células parabasais, e estes dados reforçaram o papel das células parabasais como elementos intervenientes do crescimento do tumor de KCOT [2, 3]. Considerando-se que o tipo de tratamento realizado é conhecida por ter uma influência notável na taxa de recidiva de KCOT [5], deve notar-se que, dado o carácter retrospectiva do nosso estudo, com diversos e não homogéneos tratamentos, não é possível estabelecer com certeza a relação entre a expressão GLUT1 e recorrência da lesão.
Outro aspecto a considerar é a relação entre a expressão de GLUT1 e a eficácia da detecção de tumores por PET ou combinados PET-CT. Vários estudos de imuno-histoquímica têm demonstrado a sobre-expressão de GLUT1 em tumores malignos humanos e uma correlação entre a expressão GLUT1 e progressão neoplásica [21]. Além disso, a sobre-expressão de GLUT1 foi relatado para ser estreitamente relacionada com a absorção de 18FGD em PET, porque 18FGD também é retomado através do transporte intracelular por GLUT1 [21-25].
Usos e aplicações de PET, paradoxalmente, não estão limitados a possíveis tumores malignos; Assim, na área da cabeça e pescoço, verificou-se que alguns tumores benignos [26], como o adenoma pleomorfo [10], myofibroma [12] e adenoma ceruminoso [11], demonstram positividade pelo PET. Estas lesões benignas são frequentemente incluídos na lista de possíveis erros e armadilhas na avaliação dos casos de câncer de cabeça e pescoço usando PET mas este conhecimento correto pode fornecer informações de diagnóstico útil em um contexto clínico adequado [26].
Dentro de tumores odontogênicos , um estudo anterior [13] mostrou quatro casos de ameloblastoma, um tumor benigno com uma alta taxa de recorrência, com reactividade contra GLUT1 e positividade no exame PET, postulando que PET-TAC pode ser útil no diagnóstico por imagem das recorrências em ameloblastoma. Neste relatório [13], GLUT1 imunomarcação não foi quantificada, por isso não é possível comparar os nossos resultados em KCOT com os relatados em ameloblastomas. Por outro lado, não há nenhum estudo publicado sobre o uso de PET-CT no diagnóstico ou acompanhamento de KCOT, e em nossa série de KPOC, nenhum caso foi submetido PET ou exame PET-CT.
No entanto, apesar desta esta última limitação, vários pontos sugerem que a metodologia PET não é uma ferramenta de diagnóstico útil no caso de KCOT. Em primeiro lugar, a média IRS-GLUT1 encontrado em nosso estudo foi baixa (5,53 ± 2,62) sobre uma possível pontuação máxima de 12, e um segundo aspecto muito importante a considerar é a estrutura tumor. Assim, KCOT é uma lesão tumoral cística onde reactividade GLUT1 está limitado ao revestimento epitelial. Otsuru et ai. [13] relataram um caso de ameloblastoma unicístico e três tipos não-unicísticos. Curiosamente, ameloblastoma unicístico apresentaram menor reactividade a GLUT1 e menor absorção 18FDG em comparação com os tipos de tumores sólidos [13]. Esta constatação sugere que a eficácia do 18FGD-PET é ligada, independentemente da reactividade de GLUT1, para o volume da massa tumoral [27]. Além disso, a hipótese de que a metodologia PET-CT provavelmente não é útil no caso de KCOT, é estabelecido por causa da absorção celular de 18FGD por KCOT não alcançar níveis suficientes para causar uma SUVmax adequada (valor máximo normalizado). Novos estudos, analisando a expressão GLUT1 e PET em série KCOT, são necessárias, em nossa opinião, para determinar se a análise de expressão GLUT1 em ameloblastoma é aplicável a KCOT e se 18FGD-PET é uma ferramenta útil no diagnóstico de KCOT recorrência.
Conclusões
expressão GLUT1 diferenciado entre OOC e casos KCOT, com expressão significativamente maior no KCOTs, mas não diferenciar entre casos KCOT sindrômicas e esporádicos. No entanto, dadas as características estruturais do KCOTs, que a hipótese de que Metodologia de imagens de PET provavelmente não é uma ferramenta de diagnóstico útil para KCOTs. São necessários mais estudos de expressão GLUT1 e exame PET em série KCOT para confirmar esta última hipótese
abreviações
GLUT1:.
eritrócitos transportador de glicose 1
KPOC: produtoras de queratina cistos odontogênicos
KCOT:
tumor odontogênico queratocístico
OOC:
orthokeratinised cisto odontogênico
SCBCN:
nevóide basocelular carcinoma síndrome
PBS:
tampão fosfato
IRS: pontuação
imunorreativo
PET:
tomografia por emissão de positrões
CT: tomografia computadorizada
18FGD:
18F-fluorodeoxyglucose
QUEM:
Organização Mundial da Saúde
< DFN> S-KCOT:
odontogenic tumor queratocístico sindrômica
NS-KCOT:
não sindrômica odontogenic tumor queratocístico
declarações
Agradecimentos
os autores agradecem a David Hervas Marín por sua ajuda com a análise estatística e análise crítica do estudo
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concorrentes. interesses
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes contribuições
dos autores
de estudo:. BVS. Recolha de amostras biológicas: BVS, FVS. revisão histopatológica: BVS, FVS. Processamento de amostras de estudo /imuno-histoquímica: FVS. A análise dos dados: BVS, LFN. Interpretação dos resultados: BVS, LFN. Escrevendo da primeira versão: BVS, LFN. Escrevendo de dratf final: FVS. revisão crítica do manuscrito: Todos os autores. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
