diferente da arte abstracta
Fundo
regeneração dos tecidos periodontais é um dos principais objetivos da terapia periodontal. células-tronco de polpa dentária (DPSC) mostrar propriedades das células mesenquimais com potencial para a engenharia de tecidos dentários. derivado de esmalte matriz (EMD) e factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) são exemplos de materiais que actuam como moléculas de sinalização para melhorar a regeneração periodontal. agregado trióxido mineral (MTA) tem sido comprovado para ser biocompatível e parece ter algumas propriedades de osteocondução. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da EMD, MTA e PDGF sobre DPSC diferenciação osteogênica.
Métodos
DPSC humanos foram cultivadas em meio contendo EMD, MTA, ou PDGF. Também foram estabelecidos grupos de controle. Avaliação da osteogênese alcançado foi realizada por análise de computador de fosfatase alcalina (ALP) -stained câmaras, e espectrofotometria de nódulos mineralizados manchado de S Vermelho de alizarina.
Resultados
EMD aumentou significativamente as quantidades de expressão ALP e mineralização em comparação com todos os outros grupos (P
& lt; 0,05). Enquanto isso, o MTA deu resultados variáveis com ligeiros aumentos em certos parâmetros de diferenciação, e PDGF não mostrou aumento significativo na diferenciação alcançado.
Conclusões
EMD mostraram uma capacidade muito forte osteogênico comparação com PDGF e MTA, e os resultados atuais fornecem apoio para a sua utilização na regeneração periodontal.
Palavras-chave
células-tronco da polpa dentária Osteogenesis MTA EMD PDG fundo
O principal objetivo da terapia periodontal é regenerar as estruturas de suporte dos dentes destruídos pela doença periodontal [1]. engenharia de tecido periodontal envolve interacções complexas entre diferentes células e moléculas de sinalização, bem como suportes biológicos [2].
Numa tentativa de imitar os eventos de desenvolvimento originais, a utilização integrada de populações de células precursoras com estimulantes biológicos específicos está sob investigação [ ,,,0],3, 4]. As células-tronco representam células não especializadas primitivos com amplas capacidades de diferenciação e regeneração dos tecidos. Até à data, as células estaminais mesenquimais foram isolados com sucesso a partir de vários órgãos do corpo [5], incluindo múltiplos tecidos com origens dentárias [6-9]. Tais células-tronco derivadas de tecido dental foram encontrados para reter a capacidade potente de diferenciação específicos em células formadoras de tecido dental [6, 10, 11]. Gronthos e colegas isolaram com sucesso células-tronco de polpa dentária humana (DPSC), e mostrou-se tanto a sua multipotency e auto-renovação capacidade [11, 12]. Estudos posteriores confirmaram suas descobertas [13, 14]. Este multipotência, para além da sua acessibilidade relativa, feita DPSC uma fonte atraente de células para aplicação na medicina regenerativa [15-18]. Na verdade, vários trabalhos têm demonstrado a sua superioridade em diferentes aspectos, incluindo a diferenciação osteogênica [19, 20], que apoiou a sua utilização para a regeneração de defeitos craniofaciais [21, 22], bem como defeitos ósseos alveolares [23, 24]. Além disso, as origens embrionárias semelhantes de células pulpares e células periodontais [25] e sua presença dentro de camadas protetoras de estrutura dentária têm incentivado o seu uso para a regeneração do tecido periodontal [26, 27].
Estudos sobre engenharia de tecidos têm usado mediadores biológicos para melhorar selectivamente o recrutamento de populações celulares em feridas periodontais [28]. derivada da matriz do esmalte (EMD) é uma proteína colhida a partir de desenvolver dentes suína que tem sido relatado para induzir a formação de cemento e regeneração periodontal [29]. Ao nível celular, EMD foi provado ter efeitos reguladores sobre vários tipos de células periodontais [28, 30].
Factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF) é um factor regulador muito potente que inicia os eventos de cura quase toda a ferida. A principal função do PDGF é estimular a replicação celular (mitogênese) de células-tronco cura-capable e células osteoprogenitoras parcialmente diferenciadas, que são parte do tecido conjuntivo-osso cura make-up celular [31]. Aumentos significativos na formação do osso e do cemento foram relatados histologicamente [32]. Ao nível celular, PDGF aumentou o número de células de síntese de colagénio [33] e estimuladas sialoproteína óssea transcrição [34]. Outra
material com a capacidade para induzir a regeneração é agregado trióxido mineral (MTA). MTA é uma mistura de silicato de dicálcio, o silicato de tricálcio, aluminato tricálcico, gesso, e aluminoferrite de tetracálcio [35]. Torabinejad et ai. [36] relataram um desempenho biológica favorável do MTA quando em contacto directo com osso, através da deposição e formação de apatita hidroxila em sua superfície. O material também foi encontrada para melhorar a produção celular de colagénio do tipo I, osteocalcina, fosfatase alcalina (ALP), sialoproteína óssea e osteopontina [37]. Uma revisão sistemática sobre as respostas histológicas do periodonto ao material concluiu que MTA promoveu a cura para a regeneração [38].
Os resultados acima sugerem performances clínicas semelhantes para os três materiais sem tentativas anteriores para comparações directas. Assim, o objetivo do presente estudo foi analisar e comparar os efeitos do EMD, PDGF, e MTA na diferenciação osteogênica de DPSC.
Resultados
isolamento celular e caracterização
células-tronco da polpa dentária na primária culturas começaram a aparecer em 5-14 dias e tornou-se ligado às superfícies da placa (Fig. 1a). Células da segunda passagem formada com sucesso várias colónias, com cerca de 50 células por colónia (Fig. 1b). Fluxo expressões positivas análises de citometria confirmados de marcadores associados a células do estroma, com expressões negativas de hematopoiéticas e endoteliais marcadores (Fig. 1G). As células que foram submetidos a indução osteogénico mostraram um aumento da coloração de ALP comparada com as células de controlo negativo (FIG. 1c, d), enquanto que as células cultivadas no meio adipogênica exibiram vários O-positivo grânulos óleo vermelho lipídicas (Fig. 1E, F). FIG. 1 imagens invertidas luz microscópicas mostrando um dentários células-tronco da polpa mesenquimais em cultura primária, Ampliação 5 ×. b Unidade formadora de colónias de fibroblastos (CFU-M) de ampliação 5 ×, c, d coloração com fosfatase alcalina para DPSC 14 dias após osteoindução (C) em relação ao controlo negativo (d), uma ampliação de 10 x, e coloração com óleo vermelho O para DPSC 14 dias depois indução adipogênica (e) versus controle negativo (f), ampliação de 40 ×. g FACS resultados da análise de uma linha de células da polpa dentária representante
aplicação de materiais
coloração ALP
As amostras apresentaram diferentes graus de coloração ALP (Fig. 2). One-way ANOVA revelou diferenças significativas entre os grupos comparados (P & lt; 0,0001) (Tabela 1). FIG. 2 imagens Scanoscope para ALP manchado diferentes grupos experimentais de DPSC. A imagem interna representa o campo avaliada, o que faz com que cerca de 1/4 de imagem. Ampliação original 1,4 ×. Barra de escala 1 mm. um controle negativo, controle b Referência (OT), c EMD, d MTA, e PDGF
Tabela 1 representa os resultados alcalinas análise fosfatase para todos os grupos
de Material /Grupo
Média
desvio padrão (SD)
post hoc teste de Tukey para a significância entre os grupos
Percent total positivo
controlo negativo
16,29
4,95
OT *
EMD *
MTA *
PDGF *
OT
72,92
9,24
Negative control*
EMD*
MTA*
PDGF*
EMD
95.59
4.69
Negative control*
OT*
MTA*
PDGF*
MTA
64.19
9.95
-ve control*
OT*
EMD*
PDGF*
PDGF
48.80
12.62
Negative controle *
OT *
EMD *
MTA *
Média
Optical densidade
Negative control
0.18
0.01
OT*
EMD*
MTA*
PDGF*
OT
0.26
0.02
Negative control*
EMD*
MTA
PDGF*
EMD
0.35
0.03
Negative control*
OT*
MTA*
PDGF*
MTA
0.26
0.02
Negative control*
OT
EMD*
PDGF
PDGF
0.24
0.03
Negative controle *
OT *
EMD *
MTA
escore histológico
Negative control
20.633
7.034
OT*
EMD*
MTA*
PDGF*
OT
132.974
22.944
Negative control*
EMD*
MTA
PDGF*
EMD
221.992
23.818
Negative control*
OT*
MTA*
PDGF*
MTA
114.340
20.914
Negative control*
OT
EMD*
PDGF*
PDGF
82.330
28.254
Negative controle *
OT *
EMD *
MTA *
comparação NBIntergroup foi estatisticamente significativa utilizando o teste ANOVA, P Art & lt; 0,0001
* Indica significância estatística com P Art & lt; 0,05
para todos os parâmetros analisados, EMD foi significativamente maior do que todos os outros grupos (P & lt; 0,05). EMD revelou significativamente maior percentagem de área total de coloração positiva, a densidade óptica média, e pontuações histológicas (95,6 ± 4,7%, 0,35 ± 0,03, 221,99 ± 23,8) do que MTA (64,19%, 0,26 ± 0,02, 114,34 ± 20,90; P & lt; 0,05) PDGF (48,8% ± 12,62, 0,24 ± 0,02, 82,33 ± 28,3; P & lt; 0,05). e controlo de referência
em contraste, o MTA deu resultados inconsistentes, embora o aumento da actividade de ALP de um modo similar ao controlo de referência, quando avaliada pela densidade óptica média, o material resultou em reduções de outros parâmetros, em comparação com o controlo de referência, embora essas reduções não foram sempre significativa (P
& gt; 0,05)
no que diz respeito a PDGF, geralmente expressão ALP. revelou resultados mais baixos em comparação com o controlo de referência para os três parâmetros, respectivamente, e essas reduções foram consistentemente significativa (P & lt; 0,05; Tabela 1)
Alizarina S coloração vermelho e Havia diferenças óbvias nos montantes de mineralização entre. os grupos (FIG. 3). One-way ANOVA revelou que a diferença é significativa (P Art & lt; 0,0001) (Tabela 2). FIG. 3 invertido imagem microscópica de luz apresentando Alizarina S vermelho coloração para diferentes DPSC grupos experimentais. ampliação original de 10 ×. A barra de escala 200? M. um controle negativo, controle b Referência (OT), c EMD, d MTA, e PDGF
Tabela 2 representa a taxa média de absorbância para vermelho de alizarina S câmaras manchadas de todos os grupos
de Material /Grupo
média
desvio padrão (SD) de teste
hoc Tukey Mensagem do de significância entre os grupos
negativos control
0.079
0.007
OT
EMD*
MTA*
PDGF
OT
0.107
0.016
Negative control
EMD*
MTA
PDGF
EMD
1.197
0.132
Negative control*
OT*
MTA*
PDGF*
MTA
0.163
0.117
Negative control*
OT
EMD*
PDGF*
PDGF
0.097
0.010
Negative controle
OT
EMD *
MTA *
OT
controlo de referência para a osteoindução , EMD
Emdogain, MTA
agregado trióxido mineral, PDGF
crescimento derivado de plaquetas fator-BB
comparação NBIntergroup foi estatisticamente significativa pelo teste ANOVA, P Art & lt; 0,0001
* Indica significância estatística com P Art & lt; 0,05
O grupo EMD tiveram um aumento significativo na quantidade de formação de nódulos mineralizados em comparação com todos os outros grupos, que dá uma absorvência média de 1,2 ± 0,13 (P
& lt; 0,05). O grupo
MTA significativamente maior quantidade de mineralização (absorvância: 0,16 ± 0,12)., em relação ao grupo de controlo negativo (0,08 ± 0,01), e o grupo de PDGF (0,09 ± 0,01)
Embora a absorvância do grupo PDGF significa (0,09 ± 0,01) pareceu ser ligeiramente diferente do que os outros grupos, estas diferenças não foram estatisticamente significativas (P
& gt; 0,05; Quadro 2). Discussão
neste estudo, o isolamento bem sucedido de células de polpa dentária foi conseguida através da aplicação de enzimático digestão com certas modificações no protocolo de Gronthos et al. [11]. As células obtidas foram submetidos a várias investigações para avaliar suas propriedades. De acordo com a Sociedade Internacional de Terapia Celular [39], os critérios mínimos para a definição de células multipotentes estromais mesenquimais incluem: (1) a adesão a pratos de plástico; (2) potencial de diferenciação multipotentes; e (3) expressão de marcadores de superfície específicos do estroma (CD73, CD90, CD105) com falta de expressão de marcadores hematopoiéticas (CD45, CD34, CD14 e /ou CD11b, CD19, CD79α) e o marcador de HLA-DR. As células isoladas neste estudo apresentou todas as características acima.
Diferentes concentrações de materiais foram avaliados, e foram selecionadas as concentrações com o melhor diferenciação. Estas concentrações foram 200 ug /ml para o EMD, 5 ng /ml para PDGF, e 0,05 mg /ml para o MTA. As mesmas concentrações foram utilizados anteriormente em outros estudos [34, 40, 41]. Neste estudo, foram seleccionados análise de computador para a actividade de ALP e uma técnica de avaliação semi-quantitativa para a coloração de S vermelho de alizarina, como estas duas técnicas foram relatados para dar resultados com sensibilidade relativa, e foram utilizadas em estudos anteriores [42, 43].
Para EMD, os resultados revelaram um aumento significativo na expressão de ALP e valorização mineralização abundante após a sua aplicação. Esses achados estão de acordo com vários outros estudos que avaliaram os efeitos deste material em várias linhas de células [40, 44-48]. Duan et al. [44] verificaram que o EMD reforçada a diferenciação osteogénica de células estaminais pluripotentes induzidas, como evidenciado pelo aumento da expressão do mRNA RUNX2. Kémoun et ai. [45, 46] avaliaram os efeitos de EMD em células foliculares [45] e de células estaminais do ligamento periodontal [46]. Em ambos os estudos, EMD foi encontrada para melhorar a libertação de ALP e deposição de cálcio, para além da elevação de vários marcadores de mineralização. Outro estudo de Guven et al. [47] verificaram que EMDOGAIN foi o material mais eficaz para aumentar a proliferação e diferenciação odontogénica de células estaminais de gérmen de dente humano, através da avaliação da actividade de ALP, a coloração de Von Kossa, e análises de RT-PCR para a dentina sialophosphoprotein (DSPP) e imunocoloração para colágeno tipo I e DSPP. Um estudo realizado por Wang et al. [48] verificaram que EMDOGAIN reforçada a mineralização de DPSC bem como a sua /expressão do marcador odontogénica osteogénico. No entanto, os estudos com resultados contraditórios também estão disponíveis [49, 50]. Foi relatado que EMD pode não ter efeitos significativos sobre a diferenciação osteoblástica em células ligamento periodontal [49] ou células da medula óssea de ratos [50]. Embora o mecanismo de controle exato ainda não está claro, estes efeitos foram explicadas por diferenças nos graus de imaturidade celular, ou seja, o material foi pensado para aumentar a proliferação de células mais imaturas, mas a diferenciação de células em fases posteriores da maturidade [51].
no presente estudo, MTA deu resultados inconsistentes. O material revelou aumento da mineralização em comparação com o controlo de referência, reduções em determinados parâmetros ALP (percentagem da área total de coloração positiva e de pontuação histológico), e manutenção de outros parâmetros (densidade óptica média). Embora Yasuda et al. [52] e Lee et ai. [53] relataram que o aumento da produção de ALP MTA e /ou a formação de nódulos mineralizados em comparação com células de controlo, tanto Koh et ai. [54] e Nakayama et ai. [55] relataram a expressão de ALP semelhante entre as células tratadas com MTA e as células de controlo negativo. Essas inconsistências sugerem que uma avaliação mais aprofundada dos diferentes parâmetros orientadores e que afetam o desempenho deste produto é garantido.
Com relação ao PDGF no presente estudo, observou-se que a expressão de ALP geralmente revelaram resultados inferiores em comparação com o grupo controle negativo bem como todos os outros grupos de materiais, e as diferenças foram sempre significativa. Independentemente da ação do material acessório proliferativa, PDGF-BB não pareceu ter qualquer benefício adicional para a diferenciação osteogénica, de acordo com os parâmetros avaliados neste estudo. Vários outros autores observaram resultados similares [33, 56]. Na verdade, PDGF reforçada colágeno ósseo degradação [33], e rompidos ou formação de matriz óssea inibida [56]. Nakashima et al. [57] verificaram que o PDGF aumento da síntese de ADN, enquanto causando% de inibição da actividade de ALP 40-65. Tanaka e Liang [58] relatou que o material não exerceu qualquer efeito sobre a atividade ALP celular ou síntese de colágeno. Yokose et ai. [59] relatou que PDGF-BB reduziu significativamente a atividade de ALP de DPSC.
Conclusões interacções da superfície celular
favoráveis com EMD foram demonstradas, incluindo a expressão ALP e mineralização abundante. EMD deu resultados superiores em comparação com MTA e PDGF sobre a diferenciação osteogénica de DPSC. Os efeitos da MTA no osteogênese de DPSC não foram conclusivos e mais estudos são necessários. Além disso, nossos dados sobre PDGF não apoiar a sua capacidade de induzir a diferenciação osteogénica de DPSC. No entanto, PDGF fez facilitar a fixação e crescimento das células, sugerindo um mecanismo de acção diferente que vale a pena uma investigação mais aprofundada.
Métodos
isolamento de células-tronco
DPSC humanos foram isolados e caracterizados pelos autores na Unidade de Stem Cell, Universidade Saud king, Reino da Arábia Saudita (dados não publicados). Os dentes foram coletadas de pacientes depois que eles assinaram documento de consentimento informado, de acordo com um protocolo aprovado pelo comitê de ética da instituição (Faculdade de Odontologia Research Center-CDRC).
Resumidamente, o conteúdo de polpa de dentes molares recém-extraídos foram combinados e submetidos a 20-40 minutos de digestão enzimática utilizando colagenase tipo I (1 mg /ml) e dispase (5000 unidades caseinolítica). Subsequentemente, as células foram deixadas a crescer em condições de cultura de células normais (37 ° C, 5% de CO
2), utilizando meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 20% de soro fetal de bovino (FBS), 1% penicilina estreptomicina (pen-estrept), e 1% aminoácidos não-essenciais (tudo adquirido de Gibco-Invitrogen, EUA).
Caracterização de células estaminais
formadoras de colónias unitárias-fibroblastos (CFU-F)
CFU -F foram avaliados através da cultura de 2,5 x 10 3 células na segunda passagem em placas de cultura de 6 cm. No dia 14, as células foram fixadas com paraformaldeído a 1%, coradas com 0,5% de violeta de cristal, e submetido a avaliação microscópica utilizando um microscópio de contraste de fase de luz invertido (Zeiss, Leica, Alemanha). A citometria de fluxo
Quarta células de passagem (1,5 × 10 6) foram lavadas com tampão FACS (1 × solução salina tamponada com fosfato, 5% de FBS, 0,1% de azida de sódio), e diluiu-se em 1,5 ml de solução salina tamponada com fosfato. Em seguida, rato conjugado com PE anti-humano CD146, CD73, CD29, e HLA-DR, FITC de rato anti-humano conjugado CD34, rato CD90, CD45, CD13, e CD31, e a APC-conjugado anti-humano CD105, CD14, e anticorpos CD44 foram preparados na obscuridade (todos da BD Biosciences, EUA, com excepção de o anticorpo monoclonal contra o CD105 humano, que foi adquirido a R & amp; D Systems, EUA) e utilizado. Em cada tubo de FACS, a 100 ul de células foi misturado com 10 ul do anticorpo correspondente e incubou-se durante 30 minutos no escuro a 4 ° C. As expressões de marcadores celulares foram avaliadas usando um Becton Dickinson citómetro de fluxo FACSCalibur (BD Biosciences, EUA), e os dados resultantes foram analisados utilizando a Versão celular Busca Pro Software 3.3, biociência BD, EUA).
Osteogénica e diferenciação adipogênica
células na quarta passagem foram cultivadas em placas de 6 poços. A 60-70% de confluência, diferenciação osteogénica foi induzida utilizando meio osteoindução preparado de acordo com o protocolo de Vishnubalaji et ai. [60], e composto por DMEM suplementado com 10% FBS, 1% de Pen-estrept, 50 ug /ml de ácido L-ascórbico (Wako Chemicals GmbH, Alemanha), o sal de fosfato de glicerol dissódico 10 mM (β-glicerofosfato), 10 nM dexametasona, e 10 nM de calcitriol (1α, 25-di-hidroxivitamina D3) (Sigma, Reino Unido). Células mantidas em meio de cultura normal serviu como controlo. A osteogénese resultante foi avaliada após 14 dias através de coloração citoquímica para ALP.
Diferenciação Adipog�ica também foi induzida utilizando um meio padrão adipogênica [60], composto por DMEM suplementado com FBS a 10%, soro de cavalo a 10%, 1% de Pen-estrept, 100 nM de dexametasona, 0,45 mM de xantina de metilo isobutilo, 3 ug /ml de insulina (todos adquiridos a partir de Sigma, Reino Unido), e 1 uM rosiglitazona (BRL49653; Novo Nordisk, Dinamarca). A diferenciação resultante foi avaliada em 14 dias através da utilização de coloração com óleo vermelho O.
Aplicação de material
Inicialmente, um estudo piloto foi realizado para avaliar três concentrações diferentes para cada material, e as concentrações obtendo-se a maior quantidade de diferenciação foram seleccionados para as comparações (Fig. 4). Em seguida, as células na quarta passagem foram cultivadas e divididos em cinco grupos, como mostrado abaixo. FIG. 4 imagens Scanoscope para ALP manchado diferentes grupos experimentais de DPSC. Ampliação original 1,4 ×. Barra de escala 1 mm. a, b, c EMD em concentrações de 50, 100, 200 ug /ml, respectivamente. d, e, f PDGF em concentrações de 5, 10, 20 ng /ml, respectivamente. g, h, i MTA em concentrações de 0,02, 0,2, 2,0 mg /ml, respectivamente. j Percentagem de área total de coloração positiva para diferentes concentrações de cada material de
examinados 1. Controlo negativo: Células mantidas no meio normal de cultura de células para toda a experiência (DMEM com 20% de FBS, 1% de Pen-estrept, 1% não- aminoácidos essenciais).
2. Controle de referência (OT): células cultivadas no meio de osteoindução, preparado de acordo com o protocolo de Vishnubalaji et ai. [60].
3. Grupo Merck: Células cultivadas no meio de osteoindução suplementado com 200 ug /ml EMD (Straumann, EUA)
4.. PDGF Grupo: Células cultivadas no meio de osteoindução suplementado com 5 ng /ml de PDGF-BB (Osteohealth, EUA)
5.. MTA Grupo:. As células cultivadas no meio de osteoindução suplementado com 0,02 mg /ml MTA (Dentsply, EUA)
A diferenciação alcançado foi analisada por avaliação da expressão ALP através de coloração ALP e deposição de iões de cálcio através alizarin a coloração com vermelho S.
actividade ALP
as células foram plaqueadas em lâminas de 8 câmaras a uma densidade de 0,02 x 10 6 células /câmara e deixadas a aderir e crescer até 50% de confluência. Em seguida, as lâminas foram divididos em cinco grupos diferentes acima mencionadas e meio de regular ou osteogénica foi aplicado em conformidade. No dia 5, as células foram fixadas e coradas para a ALP com solução de naftol-AS-TR-fosfato (Sigma, Reino Unido). Em seguida, as câmaras foram avaliados sob um microscópio digital de alta resolução onde toda a câmaras manchadas foram digitalizadas com um scanner de slides ScanScope (Aperio Technologies Inc., EUA) a 40 × ampliação da objetiva. As imagens digitais de seis câmaras diferentes de cada ensaio foram vistos e analisados usando as ferramentas de visualização e análise de imagem de software Imagem Âmbito Aperio (Versão 10.2.2.2352; Aperio Technologies Inc.). Toda a experiência foi repetida três vezes, independentemente, dando um total de 18 câmaras /grupo para análise. Os resultados de saída de análise foram exportados para planilhas de Excel, focando principalmente em percentagem total área de coloração positiva, a densidade óptica média, e escore histológico como os parâmetros de análise estatística e comparação.
Alizarina vermelha S coloração
Da mesma maneira , as células foram cultivadas em placas de 24 poços, e os cinco grupos diferentes foram estabelecidos. Os meios foram substituídos duas vezes por semana com meios regulares ou osteogênicos recém-preparado. No dia 12, as células foram coradas com 40 mM de AR-S Vermelho de Alizarina (Sigma, Reino Unido), e submetido a uma avaliação espectrofotométrica de acordo com o protocolo de Gregory et al. [61] utilizando um leitor de microplacas (Gen5 ™, versão 1.10; BioTek Instruments Inc., EUA) para medir a absorvância a 405 nm. O mesmo protocolo foi repetido três vezes, independentemente, dando nove leituras diferentes para cada ensaio
análise estatística Os dados foram analisados utilizando o software estatístico SPSS. (Versão 16.0; SPSS, EUA). estatística descritiva (média e desvio padrão) foram usados para descrever as variáveis de resultados quantitativos. one-way análise de variância (ANOVA) foi utilizado para comparar os valores médios das variáveis de resultados através das variáveis categóricas (grupos), seguido por um teste de Tukey post-hoc para comparações de pares. Os valores de P & lt;
0,05 foram considerados para indicar significância estatística
abreviações
ALP:.
Fosfatase alcalina
AR-S:
Alizarina mancha S vermelho
BRL:
rosiglitazona
° C:
grau Celsius ou graus centígrados
CD:
Cluster de diferenciação
CFU-F:
Colony formando unidade de fibroblastos
DMEM:
Eagles modificado por Dulbecco médias (com alto teor de glucose, pyrovate de sódio e L-glutamina)
DNA:
ácido desoxi-ribionucleic
DPSC :
células-tronco da polpa dentária
EMD:
derivados da matriz do esmalte
FACS:
de células activadas por fluorescência (citometria de fluxo)
FBS:
soro fetal bovino
FITC:
fluorescência iso thioocyanide
Mg:
miligramas
mL:
Milliliter
ul:
litros Micro
mRNA:
ácido ribonucléico mensageiro
MTA:
agregado trióxido mineral
< dfn> PBS:
Tampão fosfato
Pen /Strept:
penicilina /estreptomicina
PDGF:
plaquetas fator de crescimento derivado
mRNA: ácido ribonucleico
Declarações
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela concessão No. 09-BIO740 -20 do Plano Nacional de Ciências e Tecnologia Programa, Reino da Arábia Saudita. Agradecemos a todos os funcionários da Unidade de Stem Cell, Departamento de Anatomia, Universidade King Saud, Riyadh, pelo fornecimento do suporte técnico neste estudo.
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concorrentes. Grupos de interesse os autores declaram que não têm interesses conflitantes.
autores contribuições
SA participaram de diferentes aspectos de estudos laboratoriais, incluindo a caracterização das células, e aplicação de materiais, além de preparar do projecto principal para este papel. NA ajudou no desenvolvimento da idéia da pesquisa principal, preparou o projeto básico de estudo, e desde revisão crítica para toda a escrita papel. Além disso, ela organizou para a obtenção dos materiais de teste dentários. AD prestou apoio técnico geral, especialmente na caracterização de células e análise de diferenciação, além de seu papel na obtenção de todos os materiais básicos de laboratório. MN têm ajudado na osteogênico celular e estudos de diferenciação adipogênica, e supervisionou a redação da parte técnica do estudo (materiais e métodos). Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
