arte abstracta
Fundo
A diversidade genotípica e cariogenicidade de C. albicans
da placa dentária das crianças são mal compreendido. Este estudo teve como objetivo explorar a diversidade genotípica e cariogenicidade de C. albicans
de crianças com cárie precoce na infância e as crianças livres de cárie.
Métodos
amostras da placa dental de 238 crianças com cárie precoce na infância e de 125 cárie crianças -free foram coletadas para C. albicans
isolamento. Um método de PCR com base em ADNr 25S foi usado para analisar C. albicans
genótipos, e as estirpes de diferentes genótipos foram testadas no que diz respeito a acidogenicidade e aciduricity.
Resultados Entre 129 C. albicans
isolados , 79 (61,2%) pertenciam ao genótipo A. a frequência de distribuição dos genótipos a e C ou genótipos B e C mostraram não haver diferença significativa entre as crianças com cárie precoce da infância e crianças livres de cárie (p = 0,178
e 0,148), Considerando genótipos A e B exibiram significativamente diferentes distribuições (p
= 0,010). Não houve diferenças significativas em aciduricity foram encontrados entre os três genótipos, mas o acidogenicidade de genótipos B e C diferiram significativamente do genótipo A a pH 4.0.
Conclusões
A distribuição genotípica de C. albicans
está associada com a experiência de cárie das crianças, e o genótipo pode estar relacionada com a sua acidogenicidade em pH 4.0.
Palavras-chave
Candida albicans
cariogenicidade cárie precoce na infância genótipo Rongmin Qiu e Wenqing Li contribuíram igualmente para este trabalho.
Fundo
cárie precoce na infância (ECC) é definida como a presença de um ou mais dentes cariados (lesões não cavitada ou cavitadas), dentes perdidos (devido à cárie), ou preenchidos superfícies dos dentes em qualquer dente decíduo em uma criança 71 meses de idade ou mais jovens [1]. Devido à alta prevalência em crianças em idade escolar primária, ECC é um problema de saúde pública de grande preocupação. Por causa cáries são causadas por microorganismos na placa dentária, o conhecimento sobre a relação entre os microorganismos na placa dental infantil e ECC é importante para a prevenção ECC.
C. albicans
é frequentemente detectados em crianças com cárie dentária, enquanto que esta levedura é tipicamente ausente em crianças livre de cárie [2, 3]. Estes resultados fornecem evidência indireta para a associação de C. albicans
com cárie dentária. Em nosso estudo anterior, a frequência de C. albicans
isolado na placa dentária de crianças com ECC foi confirmado para ser maior do que no livres de cárie (CF) crianças (44,1 vs. 19,2%, χ
2 = 22,213, p & lt;.
0,001), o que indica que C. albicans
está relacionada com a ECC [4]
Alguns relatórios analisaram a distribuição genotípica de C. albicans
na biofilme dental de crianças da escola primária com diferentes status de cárie e descobriu que um genótipo específico foi dominante no biofilme dental de crianças com cárie severa da primeira infância (S-ECC) [5, 6]. No entanto, as correlações entre diferentes C. albicans
genótipos e a cariogenicidade desta levedura permanecem desconhecidos.
Os pesquisadores descobriram que os fatores de virulência de C. albicans,
tais como invasão e resistência aos medicamentos, estão ligados a o genótipo [7-9] e que acidogenicidade e aciduricity são importantes C. albicans
fatores de virulência de cárie dentária. No nosso estudo anterior, as estirpes de C. albicans
isolados a partir da placa dentária das crianças ECC foram encontrados para ser mais do que aquelas aciduric de crianças com FC, o que indica que o aciduricity clínicos de C. albicans
estirpes está associada com um condição dentária da criança. Em contraste, não foram encontradas diferenças em relação a acidogenicidade entre os dois grupos [10]. Independentemente disso, as relações de acidogenicidade e aciduricity com genótipo permanecem obscuros.
Neste estudo, a hipótese de que a distribuição genotípica de C. albicans
de ECC e CF crianças difere e que diferentes C. albicans
genótipos exposição acidogenicidade variável e aciduricity. Para testar esta hipótese, C. albicans
da placa dental de ECC e CF crianças foi detectado por PCR baseada em rDNA 25S, ea acidogenicidade e aciduricity de diferentes C. albicans
genótipos foram avaliados.
Métodos
assuntos
no total, 363 crianças de 3-5 anos (média ± SD, 3,2 ± 1,9) foram recrutados aleatoriamente a partir de quatro jardins de infância de Guangzhou, China, a partir de fevereiro-abril 2009 (200 meninos e 163 meninas ). As crianças eram saudáveis e não tinham histórico de uso de antibióticos por pelo menos 1 mês antes do estudo, e nenhum de seus dentes permanentes tinha ainda entrou em erupção. As crianças foram atribuídas a um dos dois grupos de acordo com o seu estado de cárie: o grupo ECC (n
= 238) ou o grupo CF (n
= 125). Os critérios de diagnóstico para ECC utilizados neste estudo foram propostos por Drury et al. [1]. Os pais das crianças foram plenamente informado por escrito e de consentimento informado para a participação foi obtido dos pais que decidiram tomar a participação no estudo.
A aprovação foi obtida do Comitê de Ética em Pesquisa da Sun Yat-sen University, antes do início do estudo .
coleta de amostra
recolha da amostra foi realizada na parte da manhã, e as crianças foram pediu para não comer por 2 h antes da coleta da amostra. exploradores dentários esterilizados foram utilizados para a coleta de placa dentária. Para as crianças ECC, placa dentária foi obtida a partir de lesões de cárie em dentes anteriores e /ou dentes molares e depois reunidas. Para as crianças CF, placa dentária reunido foi obtido a partir das superfícies labiais som dos dentes anteriores superiores e das superfícies vestibulares de som dos primeiros molares decíduos superiores e inferiores. Todas as amostras foram mantidas individualmente em tubos estéreis, contendo cérebro coração caldo (HKM Co., Guangdong, China) e armazenados em gelo; as amostras foram transportadas para o laboratório dentro de 2 horas após a colheita.
C. albicans
isolamento e identificação
Todas as amostras foram dispersas em vortex durante 30 segundos para dispersar quaisquer agregados de levedura. Uma aliquota de 20 ml de cada amostra foi inoculada numa placa contendo meio selectivo (CHROMagar Candida; CAC, CHROMagar Co., Paris, França) e em seguida cultivadas durante 48 h a 37 ° C [11]. Para obter o maior número de genótipos representativos de C. albicans
em uma amostra que possível, nós seleccionadas 5 unidades formadoras de colónias (CFUs) por amostra (aproximadamente 30-300 UFC por criança) de cada placa CAC usando um método descrito anteriormente [12] para minimizar o viés de seleção e para maximizar a aleatoriedade. Todas as colónias de cada amostra foram transferidos para Sabouraud de dextrose caldo (SDB) (HKM Co., Cantão, China) contendo glicerol (30% v/v
) e conservados a -80 ° C. Os métodos de
recrutamento de sujeitos, recolha de amostras, e C. albicans
isolamento e identificação foram descritos em nosso estudo publicado anteriormente [4]. Os isolados de C. albicans
foram a armazenados isola do estudo anterior [4].
Extração de DNA
Um método de ebulição foi usada para extração de DNA. suspensões congeladas de C. albicans
estirpes foram misturados, e uma alíquota de 200 ul de cada-suspensão da amostra foi adicionada a um tubo de Eppendorf e centrifugado durante 8 min a 12000 rpm. Depois o precipitado foi moido em azoto líquido, que foi deixada em repouso durante 5 min após o azoto líquido se evaporou; este procedimento foi repetido em triplicado. O precipitado foi suspenso em 30 ul de solução de extracção de DNA, cozidos a 100 ° C durante 10 min e centrifugada a 12000 rpm durante 3 min. O sobrenadante foi armazenado a -20 ° C até à amplificação por PCR. Amplificação por PCR
Os iniciadores CA-INT? L (5'-ATAAGGGAAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3 ') e CA-INT-R (5'-3-CCTTGGCTGTGGTTTCGCTAGATAGTAGAT ') foram concebidos como previamente descrito [13]. A mistura de amplificação (volume total, 50 ul) continha 10 ul de tampão de PCR; 1 uL de cada um dos dNTPs, iniciadores, e polimerase Taq (Promega, Madison, WI, EUA); 34 mL de DDH 2O; e 2 uL de ADN molde. As condições de amplificação foram como se segue: desnaturação inicial a 93 ° C durante 5 min, 40 ciclos de desnaturação a 93 ° C durante 30 s, iniciador de recozimento a 55 ° C durante 45 s e extensão a 72 ° C durante 45 s, com uma extensão final a 72 ° C durante 7 min. Para a identificação, os produtos de PCR foram carregadas em geles de agarose a 2% (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA) a 100 V durante 30 min e em seguida coradas com uma solução de brometo de etídio. As sequências de C. albicans
foram classificadas em cinco genótipos de acordo com o padrão de bandas: genótipo A (450 pb), o genótipo B (840 pb), o genótipo C (450 e 840 pb), o genótipo D (1080 pb), e genótipo e (1400 bp) [14, 15]. preparação
Suspensão
Vinte cepas de cada C. albicans
genótipo foram examinadas para a produção de ácido e tolerância ao ácido. estoques congelados das estirpes foram inoculadas em SDB e crescida a 37 ° C com agitação (150 rpm), sob condições aeróbicas. Após as células de levedura foram cultivadas durante 17-24 h, que foram colhidas na fase de crescimento exponencial tardia [16] e lavou-se duas vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS, contendo Na 0,05 mM 2HPO 4 /KH < sub> 2 PO? 4, pH 6,8). As células foram suspensas em PBS e ajustadas para uma densidade óptica (DO) de 1,0 a 540 nm (equivalente a 1 × 10 8 células /ml) durante a produção de ácido e os testes de tolerância a ácidos. O valor de OD foi detectada utilizando um espectrofotómetro de ultravioletas (752S, Lengguang Tech. Co., Xangai, China).
Produção de ácido e ensaios de tolerância ao ácido
estéril SDB (contendo glucose 100 mM) foi utilizado para a produção de ácido e Os ensaios de tolerância ao ácido; o pH do meio foi ajustado para diferentes valores iniciais de pH de 7.0, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, e 4.0 (pH S-25, Xangai precisão & amp; Scientific Instrument Co., China) usando HCl ou 4 estéril 2 mM mM NaOH [17]. Resumidamente, aliquotas de 50 ul de suspensões de cada um dos diferentes genótipos, um OD 540 de 1,0 foram adicionados separadamente a 5 ml de SDB, cultivadas durante 48 h a 37 ° C e, em seguida, centrifugadas a 4500 rpm durante 8 minutos a 4 ° C. O pH do sobrenadante final foi detectada utilizando um medidor de pH padrão para determinar a formação de ácido. O ΔpH (igual ao valor de pH inicial menos o valor final de pH) foi utilizado para avaliar a produção de ácido.
Para avaliar o crescimento sob condições ácidas, o precipitado foi lavado 3 vezes em PBS e em seguida diluída com 2 ml de PBS. Em seguida, a turbidez foi medida a 540 nm (OD 540), utilizando um espectrofotómetro.
Estas experiências foram realizadas em triplicado. O ΔpH média e OD 540 foram cada calculado a partir de três amostras idênticas. Um valor maior ΔpH indicaram uma maior capacidade de produzir ácido e um OD maior valor de 540 indicaram um melhor crescimento e maior aciduricity. A análise estatística
A análise dos dados foi realizada usando SPSS 16.0 (SPSS, Chicago, IL , EUA). A relação entre a diversidade genotípica de C. albicans
e diferentes experiências de cárie foram analisados utilizando testes de qui-quadrado. Para evitar erros do tipo I quando se compara vários grupos através de testes de qui-quadrado, uma correção crítica-required p-valor
foi aplicado, eo limiar
p-valor foi definido para 0,017 em comparações de três vias. Diferenças na ΔpH e OD 540 valores entre os três genótipos de C. albicans
foram analisados por ANOVA. Resultados Quando uma diferença significativa foi encontrada entre os três genótipos, o LSD-t método
foi utilizado para analisar a diferença entre dois grupos, e o nível de significância para os testes estatísticos foi fixado em 0,05.
C. albicans
distribuição genotípica
C. albicans
estirpes foram isoladas de 129 indivíduos (35,5% de 363 crianças): 105 crianças com ECC e 24 crianças com FC. Cada criança de quem C. albicans
foi isolado apresentou apenas um genótipo, com os genótipos A, B e C, sendo os três genótipos detectados. Os genótipos D e E não foram detectados. Entre os isolados, 79 (61,2%) pertenciam ao genótipo A; 20 (15,5%), para genotipar B; e 30 (23,3%), para genotipar C. O genótipo A foi o componente principal em ambos os grupos de crianças (56,2% no grupo ECC, 83,3% no grupo CF); as frequências de genótipo B foram 19,0% e 0, e as freqüências de genótipo C foram 24,8 e 16,7%, respectivamente.
As frequências dos diferentes distribuições genotípicas na ECC e grupos CF foram significativamente diferentes (p = 0,042
). Genótipos A e B foram distribuídos de forma significativamente diferente nos dois grupos (p = 0,010
): genótipo A apresentou maior frequência no grupo CF, eo genótipo B apresentou maior frequência no grupo ECC. As frequências de distribuição de genótipos A e C ou genótipos B e C não apresentaram diferença significativa entre os dois grupos e os valores
P- foram 0,178 e 0,148, respectivamente (Tabela 1 e Fig. 1) distribuição .table 1 genotípica de C. albicans
de placa dental de crianças com diferentes experiências de cárie, n
(%)
Grupo
número total de isolados
genótipo A
genótipo Ba
genótipo Cb, c
p
valor
ECC
105
59 ( 56,2)
20 (19,0)
26 (24,8)
0,042
CF
24
20 (83,3)
0
4 (16,7)
total de
129
79 (61,2)
20 (15,5)
30 (23,3)
a comparação das freqüências genotípicas de a e B entre grupos ECC e CF (p = 0,010
)
bComparison das freqüências genotípicas de a e C entre os grupos ECC e FC (p = 0,178
)
cComparison das freqüências genotípicas de B e C entre ECC e grupos CF (p = 0,148
)
Fig. 1 diferentes subgrupos genotípicas de C. albicans
como determinado por PCR. Lanes 17
, 21
, 22
, e 23
show de genótipo A (o produto de amplificação PCR é de aproximadamente 450 pb). Lanes 18 Comprar e 25
show de genótipo B (o produto de amplificação PCR é de aproximadamente 840 pb). Lanes 19
e 24
show de genótipo C (dois produtos de PCR: uma banda é de aproximadamente 450 bp, e a outra banda é de aproximadamente 840 pb)
acidogenicidade e aciduricity
o crescimento de C. albicans
foi gradualmente inibido como o valor de pH inicial do meio diminuiu; no entanto, C. albicans
foi capaz de crescer em pH 4.0. À medida que o pH inicial das culturas diminuiu, as sub> <540 valores de OD também diminuiu. O OD valores 540 para as C. albicans
isolados dos três genótipos não foram significativamente diferentes quando cultivadas em meios com diferentes valores de pH (p & gt;
0,05) (Tabela 2) .table 2 OD valores de diferentes genótipos de C. albicans
isolados (média ± SD)
genótipo
valor OD540
4.0
4,5
5.0
5,5
6,0
6,5
7,0
A (n = 20
)
1,41 ± 0,11
1,49 ± 0,10
1,52 ± 0,13
1,58 ± 0,14
1,58 ± 0,11
1,62 ± 0,14
1,63 ± 0,14
B (n = 20
)
1,49 ± 0,13
1,53 ± 0,14
1,55 ± 0,14
1,57 ± 0,08
1,63 ± 0,10
1,65 ± 0,13
1,64 ± 0,16
C (n = 20
)
1,49 ± 0,10
1,50 ± 0,07
1,54 ± 0,24
1,60 ± 0,15
1,61 ± 0,14
1,64 ± 0,14
1,64 ± 0,14
p-
value
0.187
0.256
0.282
0.496
0.145
0.231
0.244
À medida que o pH inicial da cultura diminui, a produção de ácido por todos os isolados C. albicans
foi reduzida. O pH final de todas as culturas variou 3,16-3,76. Todas as estirpes apresentaram os valores mais altos ΔpH a pH 7,0. Entre os três genótipos, não foram encontradas diferenças significativas para ΔpH quando cultivadas em meios com valores de 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0 e 4.5 pH (p & gt;
0,05). No entanto, foram encontradas diferenças significativas para ΔpH quando os isolados foram cultivados em meio a pH 4,0 (p
= 0,029). Depois de comparações de pares, não se observou nenhuma diferença significativa entre os genótipos em ΔpH B e C (p = 0,836
) quando cultivadas em meio a pH 4,0. Em contraste, foram encontradas diferenças significativas entre os genótipos A e B (p
= 0,048) e entre genótipos A e C (p
= 0,019) (Tabela 3) habilidades de formação .table Ácido 3 de diferentes genótipos de C. albicans
isolados valor (média ± SD)
genótipo
△ pH
4.0
4,5
5.0
5,5
6,0
6,5
7,0
A (n = 20
)
0,84 ± 0,12
1,11 ± 0,11
1,46 ± 0,22
1,86 ± 0,19
2,37 ± 0,27
2,83 ± 0.20
3,27 ± 0,21
b (n = 20
)
0,91 ± 0.09a, b
1,21 ± 0.20
1,55 ± 0,12
1,82 ± 0,39
2,49 ± 0,24
2,87 ± 0,40
3,39 ± 0,23
C (n = 20
)
0,93 ± 0.03c
1,21 ± 0,08
1,64 ± 0,05
1,93 ± 0,26
2,57 ± 0,11
2,98 ± 0,15
3,38 ± 0,15
p-
value
0.029
0.093
0.059
0.169
0.150
0.192
0.197
A comparação das capacidades de formação de ácido de C. albicans
isolados entre o genótipo A e B cultivadas em pH 4,0 (p = 0,048
)
bComparison de habilidades formação de ácido de C. albicans
isola entre genótipo e B C cultivadas em pH 4,0 (p = 0,836
)
cComparison de habilidades formação de ácido de C. albicans
isolados entre o genótipo a e C cultivadas em pH 4,0 (p = 0,019
)
Discussão
C. albicans
é detectado com mais frequência em crianças com cárie dentária, mas é tipicamente ausente em crianças livres de cárie. Esta levedura podem facilmente aderir aos tecidos dentais duros em humanos e biofilmes formulário. Esta levedura também produz ácido metabolizando açúcares e hidratos de carbono dietéticos, causando a dissolução de cristais de hidroxiapatite no esmalte e dentina [16, 18]. C. albicans
também produz ácido a um valor de pH inferior a 4,0 e mostra a tolerância ácido forte [17]. Para avaliar a
identidade genotípica de C. albicans
estirpes, um método baseado em PCR 25S rDNA foi empregue para a classificação. Até à data, cinco genótipos de C. albicans
foram identificados, genótipos designados A, B, C, D, e E. Os genótipos A, B, e C pode ser detectada na mucosa oral [15], e a placa dental [ ,,,0],5, 6] de crianças. Genótipo D é encontrada na bolsa periodontal de pacientes com periodontite sistemicamente saudáveis [19], enquanto o genótipo E raramente está presente na cavidade oral. Os resultados deste estudo revelaram três genótipos de C. albicans
estirpes nas crianças examinadas, os genótipos A, B e C, com a cepa dominante sendo genótipo A. Estes resultados são semelhantes a um relatório anterior mostrando que a C. albicans
genótipo a é a cepa dominante na placa dentária das crianças [5, 6].
os genótipos de C. albicans
das cavidades orais de pacientes diferentes variar significativamente, possivelmente porque as condições orais locais dos pacientes são únicos [15]. No presente estudo, os genótipos B e C foram mais frequentes no grupo ECC do que no grupo CF. Em particular, o genótipo B não foi isolado do grupo CF, enquanto o genótipo A foi mais frequente neste grupo. Resultados semelhantes foram relatados em estudos anteriores, com os genótipos B e C detectada apenas no local de cárie, e não no local de som, das crianças S-ECC [5] e com o genótipo B detectadas apenas em crianças S-ECC [6]. Tais diferenças na distribuição genotípica de C. albicans
podem estar relacionados a diferenças nos locais de amostragem [5]. Para as crianças ECC, as amostras foram obtidas a partir de lesões de cárie, ao passo que as amostras para as crianças CF foram obtidos a partir de superfícies sólidas. Nas lesões de cárie, mau concentrações de higiene oral e açúcar elevado nas cavidades teria uma influência maior sobre C. albicans
colonização.
Nossos resultados sugerem que diferentes ambientes poderia facilitar a colonização de diferentes genótipos de C. albicans
e indicaram que a distribuição de C. albicans
genótipos diferiam em crianças com diferentes experiências de cárie.
neste estudo, o crescimento de C. albicans
estirpes foi inibida gradualmente com um pH inicial de diminuição da médio, e todos os de C. albicans
estirpes foram capazes de crescer em pH 4.0 e produzir ácido. No entanto, os três genótipos não diferiram significativamente com respeito ao crescimento em qualquer valor de pH, indicando que os três genótipos tinha tolerância ácido semelhante e todos foram capazes de sobreviver em um ambiente mais acídico, continuando a produzir ácido. Neste estudo, a capacidade de formação de ácidos de C. albicans
genótipos B e C foram significativamente maiores do que a capacidade de formação de ácido de um genótipo em pH 4,0 mas não em pH 4,5-7,0. Este resultado indicou que o genótipo de C. albicans
foi relacionado com a sua acidogenicidade a pH 4,0. Notavelmente, o valor do pH lesão de cárie é geralmente menor do que a superfície de som. Os isolados de genótipos B e C foram obtidos a partir de lesões de cárie, enquanto alguns isolados de genótipo A foram obtidos a partir de superfícies sólidas. Portanto, os isolados de genótipos B e C seriam capazes de sobreviver em um ambiente mais ácido.
Além disso, C. albicans
isolados de genótipo A foram detectados mais frequentemente em crianças ECC, e genótipo A foi menos acidogênica em pH 4,0 do que os genótipos B e C. Uma das razões para este achado é que C. albicans
isolados foram obtidos de crianças com status diferentes cárie. C. albicans
isolados a partir de crianças ECC foram encontrados para ser mais do que aquelas acidogênica de crianças com FC, quando cultivadas a pH 4,0 no nosso estudo anterior [10]. No presente estudo, genótipo A isolados foram obtidos a partir de ambas as crianças ECC e crianças CF, enquanto todo o genotipo B isolados e a maioria dos isolados de genótipos C foram obtidos a partir de crianças com FC.
Se tal diversidade genética está relacionada com a virulência de C. albicans
permanece incerto. Em pacientes com infecções profundas, o genótipo A tem sido mostrado para ser o isolado mais invasiva, enquanto que a maioria das estirpes não invasivas pertencem aos genótipos B e C [7]. Outro estudo relatou que vários dos espécimes clínicos, o genótipo é o isolado C mais invasiva, enquanto que a maioria dos isolados não invasivos pertencem ao genótipo A [8]. No entanto, em pacientes com candidíase bloodborne, a distribuição genotípica de C. albicans
não estava relacionada à capacidade de invasão [20]. No presente estudo, os genótipos B e C foram detectados com maior frequência no grupo ECC do que no grupo CF, e os genótipos B e C apresentaram capacidades formadoras de ácido significativamente maiores do que genótipo A, quando cultivadas em pH 4.0. Em contraste,
não foi encontrada relação entre a distribuição genotípica de C. albicans
e tolerância ao ácido. Portanto, estudos adicionais devem ser realizados para examinar a relação entre cariogenicidade e o genótipo de C. albicans
.
Conclusões
Neste estudo, os genótipos B e C foram mais frequentes no grupo ECC do que no grupo CF, indicando que a distribuição de genótipos de C. albicans
difere entre as crianças com diferentes experiências de cárie. As capacidades de formação de ácidos de C. albicans
genótipos B e C foram significativamente mais elevada do que a de um genótipo quando cultivados a um pH de 4,0, e este resultado indica que o genótipo de C. albicans
está relacionada com a pH acidogenicidade . 4.0
Notas
Rongmin Qiu e Wenqing Li contribuiu igualmente para este trabalho
abreviações
C. albicans
:. albicans
Candida
CF:
livres de cárie
UFC: unidades formadoras de colónias
ECC:
cárie precoce na infância
OD:
densidade óptica
SDB:
caldo Sabouraud dextrose
S-ECC:
cárie precoce na infância graves
Declarações
Agradecimentos
os autores expressam sua gratidão aos diretores e professores de creches e para as crianças e seus pais para a sua cooperação. Este estudo foi parcialmente financiado pelo Fundo Nacional Chinês, Natural Science (No. 81272554), o Science and Technology Fund Programa de Guangdong da China (No. 2010B050700004), e do Fundo de Guangdong Ciência Natural da China (No. 8151008901000076).
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concorrentes. interesse em Nenhum dos autores tem interesses concorrentes. contribuições
dos autores
QRM, LWQ e ZW projetou o estudo, conduzido as experiências, analisaram os dados, e escreveu o manuscrito. LWQ e LY coletadas amostras de placa dental, analisou os dados e interpretados os resultados. YDS e ZW projetou e supervisionou o estudo e forneceu revisão crítica do manuscrito de conteúdo intelectual importante. QRM e LWQ contribuíram igualmente para este trabalho. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
