da arte abstracta
Fundo
Os pacientes com diabetes mellitus tipo 2 (DM2) aumentaram severidade da periodontite. receptor Toll-like (TLR) 4, os seus co-receptores CD14 e MD-2, e MyD88 adaptador têm um papel central na lipopolissacarídeo (LPS) Triggered inflamação do tecido e periodontite. Este estudo investigou os efeitos da diabetes mellitus tipo 2 e periodontite em TLR4, CD14, MD-2 e expressão de mRNA MyD88 nos tecidos periodontais removidos cirurgicamente.
Métodos
amostras de tecidos periodontais foram coletados de 14 pacientes sem periodontite e diabetes mellitus tipo 2 (Grupo 1) , 15 pacientes com periodontite (grupo 2), e 7 pacientes com periodontite ambos e DM2 (Grupo 3). O ARNm de TLR4, CD14, DM-2 e MyD88 foi quantificada utilizando PCR em tempo real e comparadas entre os grupos.
Resultados da análise estatística mostrou que a expressão de ARNm de CD14 periodontal foi significativamente reduzido em todos os grupos 1, 2 e 3 (p = 0,02
), enquanto que a expressão de ARNm de RST4, DM-2 e MyD88 não foi significativamente diferente entre os grupos. Além disso, quando os pacientes dos Grupos 1 e 2 foram combinados (n = 22), a expressão de ARNm de CD14 era significativamente mais baixa do que em pacientes do Grupo 1 (p = 0,04
).
Conclusões
expressão de ARNm de CD14 foi regulada negativamente em toda pacientes com periodontite nem nem DM2, pacientes com periodontite sozinho e pacientes com ambas as doenças, sugerindo que a expressão do mRNA CD14 está associada a uma resposta do hospedeiro favorável ou submetido a um regulador negativo.
Palavras-chave
periodontite CD14 TLR4 diabetes expressão génica fundo
bactérias Gram-negativas são os principais patogénios envolvidas na periodontite, que é caracterizada pela destruição inflamatória dos tecidos de estruturas que suportam os dentes [1]. Estudos têm demonstrado que a resposta imuno-inflamatória do hospedeiro ao lipopolissacárido gram-negativas bactérias derivadas (LPS) desempenha um papel crucial na iniciação e progressão da periodontite [2]. Como um grande avanço na pesquisa periodontal, Beutler e seus colegas descobriram em 1998 que o receptor toll-like (TLR) 4 é receptor de LPS e medeia LPS desencadeadas transdução de sinalização [3]. LPS-triggered activação TLR4 leva a um aumento da secreção de citoquinas pró-inflamatórias, os mediadores e as metaloproteinases de matriz (MMPs) a partir de uma variedade de células incluindo monócitos, macrófagos, neutrófilos, linfócitos e fibroblastos gengivais que contribuem para periodontal inflamação e destruição tecidual [4]. Além de TLR4, estudos bem documentados que TLR4 co-receptores CD14 e DM-2, bem como proteínas adaptadoras TLR4, como gene de resposta primária diferenciação mielóide 88 (MyD88) também são vitalmente envolvidos na sinalização desencadeada por LPS-inflamatório [8/5 ].
foi bem estabelecido que a periodontite é mais prevalente e grave em pacientes com diabetes mellitus mal controlada tipo 2 (DM2) do que os indivíduos não diabéticos [9-11]. Achados de estudos mecanicistas indicam que DM2 mal controlada leva a uma resposta do hospedeiro hyperinflammatory a microbiota periodontal e também prejudica resolução da inflamação e reparação, levando à destruição periodontal acelerada [10]. Em linha com estas noções, aumento da expressão periodontal de interleucina (IL) -6 e MMP-8 em todo pacientes com periodontite nem nem DM2, pacientes com periodontite sozinho e pacientes com ambas as doenças foi relatado pelo nosso grupo [12-14]. Além disso, também têm demonstrado através de nossos in vitro
estudos que glicose elevada aumenta a expressão de genes pró-inflamatórios em macrófagos e fibroblastos gengivais [15-19] LPS desencadeadas, indicando que fatores DM2-associados, tais como hiperglicemia melhorar a inflamação e tecido periodontal destruição e, assim, agravar a periodontite.
nos estudos para compreender como DM2 aumenta a capacidade de resposta hospedeiro ao LPS, demonstrou-se que DM2 aumenta a expressão de TLR4 em células hospedeiras, tais como monócitos [20, 21]. Dado que TLR4 é o receptor para o LPS, é plausível que a regulação positiva da expressão de TLR4 na superfície da célula torna mais locais de ligação para LPS e, assim, aumenta a resposta de células para a provocação com LPS. Portanto, é importante para determinar se o DM2 aumenta a capacidade de resposta ao LPS hospedeiro aumentando a expressão de proteínas de RST4 e TLR4-associados no tecido periodontal. No entanto, o efeito de proteínas em DM2 expressão periodontal de RST4 e TLR4-associadas em pacientes com periodontite não tem sido bem estabelecida.
Neste estudo, a hipótese de que a expressão de RST4 ou moléculas tais como CD14, MD TLR4-associado -2 e MyD88 são regulados pela periodontite e DM2. Para testar a hipótese, foram coletados tecidos periodontais de pacientes com ou sem periodontite e DMT2 no tempo das operações necessárias e determinou-se a expressão do mRNA de TLR4, CD14, DM-2 e MyD88 usando quantitativo em tempo real da reacção em cadeia da polimerase (PCR).
Métodos
pacientes
Trinta e seis pacientes foram selecionados de uma população que se refere ao Programa de Periodontia Pós-doutoramento na faculdade de Medicina Dentária da Universidade médica da Carolina do Sul, Charleston, South Carolina. Os pacientes recrutados incluiu 14 indivíduos que não têm periodontite e diabetes mellitus tipo 2 (grupo 1), 15 pacientes com periodontite somente (grupo 2), e 7 pacientes com ambas as doenças (Grupo 3). Os pacientes do grupo 1 que necessitaram de cirurgias relacionadas com a doença não-periodontais, como alongamento coroa e extrações serviram como controle. Todos os tecidos coletados foram tecidos periodontais tomadas em coleiras da margem gengival para incluir tanto epitélio e tecido conjuntivo
Os pacientes do grupo 2 e grupo 3 reunidas as seguintes critérios diagnósticos para a periodontite [12-14]:. A profundidade de sondagem periodontal (PD) de ≥ 5 mm em dois ou mais dentes, ou nível clínico de ligação (AL) de ≥ 5 mm em dois ou mais dentes. Os critérios de exclusão foram os seguintes: Os pacientes que estavam grávidas ou inseguro sobre o estado de gravidez, creatinina sérica ≥ 1,6 mg /dL, alteração da função hepática, hemoglobinopatias (traço falciforme /anemia hemolítica) que interferem com a hemoglobina A1c (HbA1c) monitoramento, periodontite agressiva, plaquetária e distúrbios de coagulação e /ou falta de vontade de assinar o formulário de consentimento informado ou entrar no estudo. foi realizado um exame oral incluindo PD periodontal e AL clínica. Seis locais (mésio-vestibular, vestibular, disto-vestibular, disto-lingual, lingual e mésio-lingual) foram examinados para cada dente, excluindo os terceiros molares. profundidade de sondagem foi definida como a distância entre a margem gengival livre ao fundo do sulco, enquanto recessão gengival foi definida como a distância entre a junção cemento à margem gengival livre. AL clínica foi calculada como a soma de PD e recessão das gengivas. Os pacientes nos grupos 2 e 3 teve cirurgia periodontal para o tratamento de periodontite e seu tecido periodontal, incluindo epitélio e de tecido conjuntivo, foram removidas dos locais com base no maior DP e /ou AL. O PD e AL relatado neste estudo estavam relacionados com os locais de cirurgia. O teste de HbA1c foi realizada em todos os pacientes para documentar o seu estado glicêmico. DM2 foi diagnosticado previamente para todos os pacientes do Grupo 3. Todos os pacientes forneceram consentimento informado para a coleta da amostra. As formas de protocolo e de consentimento do estudo foram aprovados pela Universidade de Medicina de Revisão Institucional Conselho da Carolina do Sul (Número de aprovação: Pro00010000).
Isolamento de RNA e RNA transcrição reversa (RT)
RNA total foi isolado de amostras de tecidos periodontais usando Minikit RNeasy (Qiagen, Santa Clarita, CA). O ADN complementar da primeira cadeia (ADNc) foi sintetizada com o kit de síntese de ADNc iScript ™ (Bio-Rad, Hercules, CA), seguindo as instruções fornecidas pelo fabricante. A reacção foi interrompida durante 5 min a 25 ° C, 30 min a 42 ° C e 5 min a 85 ° C utilizando um motor de PTC-200 DNA (MJ Research, Waltham, MA).
Quantitativa PCR em tempo real
a mistura da reacção RT partir das experiências acima foi, em seguida, submetido a em tempo real a amplificação por PCR. O Software Beacon Designer (Premier Biosoft International, Palo Alto, CA) foi utilizada para conceber iniciadores (Tabela 1). Iniciadores foram sintetizados por tecnologias de DNA integrados, Inc. (Coralville, IA). A PCR foi realizada em duplicado, utilizando uma mistura de reacção de 25 uL que continha 1,5 ul de mistura reaccional de RT, 0,2 uM de ambos os iniciadores e 12,5 ul de iQ ™ SYBR Green Supermix (Bio-Rad). A reacção de PCR foi realizada com o Sistema de Detecção em tempo real iCycler ™ (Bio-Rad). Quarenta ciclos consistindo de desnaturação (95 ° C durante 10 s) e de hibridação /prolongamento (56 ° C durante 45 s) foram executados. Uma experiência de fusão-curva foi subsequentemente realizada (55 ° C durante 1 min e, em seguida, a temperatura é aumentada de 0,5 ° C a cada 10 s) para detectar os dimeros de iniciadores. Os dados foram analisados com o software SmartCycler II. O ciclo médio de limiar (Ct
) de unidades fluorescente foi utilizado para a análise. A quantificação foi calculada utilizando a
Ct do sinal de alvo em relação à da desidrogenase do gliceraldeído-3-fosfato (GAPDH) de sinal do mesmo ARN sample.Table 1 As sequências iniciadoras para PCR em tempo real dos genes
sequência 5 'Primer
3' Primer sequence
CD14
CCGCTGCCTCTGGAAG
GGCGAGTGTGCTTGGG
TLR4
GTCCTCAGTGTGCTTGTAG
ATCCTGGCTTGAGTAGATAAC
MD-2
CACCATGAATCTTCCAAAGC
CTTGAAGGAGAATGATATTGTTG
MyD88
CGGATGGTGGTGGTTGTCTC
CGCTTCTGATGGGCACCT
GAPDH
CTGAGTACGTCGTGGAGTC
AAATGAGCCCCAGCCTTC
A análise estatística
A idade, sexo e raça dos participantes do estudo são apresentados como contagens e as variáveis contínuas são apresentadas como medianas. O software GraphPad Instat 3 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) foi usado para análise estatística. Não paramétrico de análise de teste para quaisquer diferenças nas variáveis contínuas entre grupos maiores do que duas foram realizadas utilizando o procedimento de teste de Kruskal-Wallis. testes de análise não-paramétrica por qualquer diferença de variáveis entre dois grupos foi realizada utilizando o procedimento de Mann-Whitney. Um valor de p Art & lt; 0,05 foi considerado significativo. A análise de correlação sobre a relação entre a expressão de ARNm de CD14 e PD, AL ou HbA1c foi avaliada pelo método de Pearson. Nossos estudos anteriores indicaram que o tamanho da amostra de 7 ou superior forneceu energia suficiente para detectar a diferença de expressão de mRNA periodontal de IL-6 e MMP-8 entre os indivíduos de controle que não têm periodontite e diabetes mellitus tipo 2, os pacientes com periodontite sozinho e pacientes com tanto periodontite e diabetes [13, 14].
resultados da população do estudo
Os dados clínicos para a idade do paciente, sexo, raça, tabagismo, HbA1c, PD periodontal e AL foram apresentados na Tabela 2.Table 2 pacientes e doença periodontal em três grupos
Grupo 1: pacientes sem diabetes e periodontite
Grupo 2: pacientes com periodontite sozinho
Grupo 3: pacientes com ambas as doenças periodontais e diabetes
paciente número
14
15
7
Idade
58 ± 11
56 ± 11
63 ± 6
gênero (masculino /feminino)
11/3
10 /5
7/0
Raça e etnia
caucasianos /afro-americanos (nonhispanic)
6.0 (12/2)
2,8 (11/4)
0,17 (1/6) *
estado de tabagismo (fumantes /não-fumantes )
0,4 (4/10) +
1,5 (9/6)
2.5 (5/2)
HbA1c (% )
5,81 ± 0,55
5,60 ± 0,56
8,19 ± 1,24 *
PD (mm)
2,45 ± 0,86 +
4,20 ± 2,00
4,80 ± 2,32
AL (mm)
2,48 ± 0,89 + 5,03
± 2,48
5,24 ± 2,39
Os dados são a média ± SD. * P Art & lt; 0,05 vs grupo 1 ou grupo 2; + P Art & lt; 0,05 vs grupo 2 ou grupo 3. PD
profundidade de sondagem, AL
nível de inserção
Idade - A idade dos indivíduos dos grupos 1, 2 e 3 variou de 42 a 79, 40 a 79, e 52 a 71 com um desvio-padrão médio ± de 58 ± 11, 56 ± 11 e 63 ± 6, respectivamente. Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos
Sexo -. As proporções de sexo masculino /feminino nos grupos 1, 2 e 3 foram de 3,7 (11/3), 2 (5/10) e 7 (7/0) , respectivamente. Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos
Race -. Os rácios de caucasianos contra afro-americanos nos grupos 1, 2 e 3 foram 6,0 (12/2), 2,8 (11/4), e e 0,17 (1 /6), respectivamente. A análise estatística indicou que os afro-americanos no grupo 3 foram significativamente mais do que aqueles no grupo 1 ou grupo 2, o que é consistente com os relatórios anteriores que os afro-americanos têm um alto risco de desenvolver DM2 e periodontite [22, 23].
fumar estado - Os rácios fumador /não-fuma dos grupos 1, 2 e 3 foram de 0,4 (4/10), 1,5 (9/6) e 2.5 (5/2), respectivamente. A análise estatística indicou que fumantes no grupo 2 e grupo 3 foram significativamente mais do que aqueles no grupo 1, o que é consistente com os relatórios anteriores que o tabagismo está associado com um alto risco de periodontite [24]
Periodontite -. O PD em grupos 1, 2 e 3 foi de 2,45 ± 0,86, 4,20 ± 2,00 e 4,80 ± 2,32 milímetros, respectivamente. O AL em grupos 1, 2 e 3 foi de 2,48 ± 0,89, 5,03 ± 2,48 e 5,24 ± 2,39 mm, respectivamente. Foi encontrada uma diferença significativa de PD e AL entre o grupo 1 eo grupo 2 ou grupo 3, mas não houve diferença significativa de PD e AL foi encontrada entre o grupo 2 e grupo 3.
Diabetes - Todos os pacientes do grupo 3 relataram ter DM2. A HbA1c significativo nos Grupos 3 variou de 7,0% a 10,7% com um desvio padrão de média ± 8,19 ± 1,24%, que é significativamente maior do que 5,81 ± 0,55% e 5,60 ± 0,56%, respectivamente, no Grupo 1 e Grupo 2. Quatro sete pacientes foram prescritos metformina em monoterapia ou em combinação com Glucotrol (Glipizide, Pfizer) ou insulina NPH (Humulin, Eli Lily and Company). Um paciente foi a insulina prescritos glargina (Lantus, Sanofi-Aventis) insulina, um paciente foi prescrito Aspart (NovoLog, Novo Nordisk), e um paciente não relatou tomar qualquer medicação para diabetes. Expressão
Periodontal de CD14, TLR4, MD -2 MyD88 e em três grupos
A expressão de CD14, RST4, DM-2, e em MyD88 tecidos periodontais removidos cirurgicamente com sucesso foi quantificada utilizando PCR em tempo real. Como mostrado na Tabela 3, a expressão de CD14 foi mais elevada entre quatro genes em pacientes sem periodontite e DM2 (Grupo 1). A análise estatística utilizando o teste não paramétrico de Kruskal-Wallis mostrou que a expressão periodontal de RST4, DM-2 e MyD88 teve nenhuma diferença significativa entre os 3 grupos. Curiosamente, a expressão de CD14 foi encontrado para ser significativamente regulada negativamente em todos os grupos 1, 2 e 3 (p = 0,020
). Também comparamos a expressão de CD14 entre dois grupos. Os resultados mostraram que apesar da expressão CD14 no Grupo 2 (pacientes com periodontite sozinho) é menor do que no Grupo 1 (ambos os pacientes sem periodontite e DM2), a diferença não é estatisticamente significativa. No entanto, quando os pacientes do Grupo 2 foram combinados com o Grupo 3 (doentes com ambas as doenças periodontais e DM2), a expressão de CD14 foi significativamente menor do que no Grupo 1 (p = 0,04
) (Tabela 4). Além disso, descobrimos que a expressão de CD14 no Grupo 3 é significativamente mais baixa do que no Grupo 1 (p = 0,003
), indicando que a expressão de CD14 periodontal em pacientes com ambas as periodontite e DMT2 é significativamente mais baixa do que em pacientes sem periodontite e DMT2 .table 3 expressão periodontal de CD14, TLR4, MD-2 e MyD88 em três grupos
Grupo 1 (n =
14)
Grupo 2 (n
= 15)
Grupo 3 (n =
7)
análises não paramétricos (teste de Kruskal-Wallis) para eventuais diferenças de grupos
Sem ambos periodontite e diabetes
Com periodontite, sem diabetes
Com ambos os periodontite e diabetes
estatística do teste
P
-value
CD14
1.92
1.39
0.68
7.81
0.02
(0.78, 11,88)
(0,30, 17,80)
(0,17, 1,66)
TLR4
0,74
0,58
0,74
0,97
0,62
(0,28, 5,25)
(0,15, 18,31)
(0,14, 1,25)
MD-2
0,46
0,35
0,50
1,49
0,48
(0,21, 2,96)
(0,04, 5,76)
(0,19, 1,66)
MyD88
0,81
0,61
0,71
3,32
0,19
(0,50, 1,21)
(0,22, 2,19)
(0,45, 1,01)
Os dados apresentados são medianas (mínimo, máximo)
Tabela 4 A diferença de expressão CD14 entre os pacientes em Grupo 1 e combinadas pacientes do Grupo 2 e Grupo 3
Grupo 1 (pacientes sem periodontite)
combinação de Grupo 2 (pacientes com periodontite sozinho) e Grupo 3 (pacientes com ambas as doenças periodontais e diabetes )
dois-atado
P
valor
paciente número
14
22
0,04
mediana (mínimo, máximo)
1,92 (0,78, 11,88)
1,22 (0,17, 17,80)
Os dados apresentados são medianas (mínimo, máximo)
A relação entre a expressão do mRNA CD14 e PD, AL ou HbA1c
A relação entre a expressão do mRNA CD14 e PD, AL ou HbA1c foram analisados estatisticamente e não há correlações significativas foram encontrados entre a expressão de mRNA CD14 e estes parâmetros clínicos (Tabela 5) .table 5 A relação entre a expressão do mRNA CD14 e PD, AL ou HbA1c
PD
AL
HbA1c
CD14 mRNA expression
n
36
36
36
r
-0.1271
-0.1862
-0.1967
p
0,4602
0,2770
0,2500
PD
Profundidade de sondagem, AL
nível de inserção
discussão
O nosso estudo mostrou que o nível de ARNm de CD14 foi significativamente reduzida entre pacientes com periodontite nem nem DM2, pacientes com periodontite sozinho, e pacientes com periodontite ambos e DMT2, sugerindo que a periodontite e DMT2 regula negativamente a expressão do gene de CD14 em tecido periodontal. Nossas descobertas são consistentes com aqueles por Jin et ai., Que relataram que o nível de proteína CD14 nos tecidos gengivais de biópsia a partir de pacientes com periodontite foi significativamente menor do que em indivíduos sem periodontite [25]. Eles também relataram que o nível de CD14 secretado no fluido gengival (GCF) foi menor nos pacientes com bolsos mais profundos do que em pacientes com bolsos profundos menos [26]. Desde seus estudos se concentraram em nível de proteína CD14 no tecido periodontal, ainda não está claro se o nível de proteína CD14 diminuiu é o resultado de regulação negativa da expressão de mRNA CD14 que pode sugerir o envolvimento de regulação da transcrição de expressão CD14. Nosso estudo forneceu a nova visão sobre os mecanismos envolvidos na regulação da expressão de CD14.
No presente estudo, foram empregados em tempo real técnica de PCR para quantificar o nível de TLR4, CD14, MD-2 e MyD88 expressão de mRNA no tecido periodontal. É bem conhecido que a regulação da expressão das citocinas ao nível do ARNm através factor nuclear kappa B (NFkB) mediada por activação da transcrição desempenha um papel crucial na periodontite [27]. Portanto, estudos que investigaram a expressão do gene nos níveis de mRNA são importantes para a compreensão dos mecanismos moleculares envolvidos na patogênese da periodontite. Além disso, uma vez que PCR em tempo real é um método inteiramente quantitativa e bem controlado a normalização para o gene de manutenção, os dados são valiosas para a avaliação da expressão do gene. Além de PCR em tempo real quantificação da expressão de genes ao nível do ARNm, imuno-histoquímica e imunofluorescência também são comummente empregues nos estudos de expressão de genes ao nível da proteína. Embora estes métodos têm vantagens na caracterização de tecido ou expressão de genes específicos de células ao nível da proteína, que também tem desvantagens, como uma abordagem semi-quantitativa [28] que pode conduzir a variabilidade inter-estudo. Por exemplo, usando imuno-histoquímica, um estudo mostrou que a periodontite diminuiu RST4 [29], mas outro estudo demonstrou que a periodontite aumento do nível de RST4 no epitélio gengival [30].
CD14 foi caracterizado como receptor de LPS em 1990 [31], quase uma década antes da descoberta do TLR4. Enquanto RST4 tem um domínio transmembranar para a transdução de sinal desencadeada por LPS, CD14 não possui o domínio transmembranar e é incapaz de transmitir a sinalização de LPS. CD14 está ancorado com a glicosilfosfatidilinositol (GPI) na superfície da célula e expressa como uma glicoproteína de 55 kDa [32]. Além da forma ligada a membrana (mCD14), CD14 também é expresso como uma forma solúvel (sCD14) por secreção de CD14 sem acoplamento para a âncora GPI ou de derramamento ou clivagem a partir de mCD14 [33]. A função principal do CD14 é o de servir como um receptor para o LPS inicial e facilitar a ligação de LPS a RST4 /DM-2 complexo [34]. Além disso, reconhece a CD14 também outros padrões moleculares associados a agentes patogénicos, tais como o ácido lipoteicóico [35].
Estudos anteriores mostraram que CD14 tem o duplo papel em resposta a bactérias gram-negativos [36]. Para exemplos, um estudo mostrou que a neutralização de CD14 induzida por LPS impedido resposta pró-inflamatória não controlada e subsequente morte hospedeira [37], revelando um efeito pró-inflamatória das células CD14. Um outro estudo, no entanto, relataram que, quando CD14 foi bloqueada, os animais infectados com Shigella, um agente patogénico diarreica, exibiu um aumento de 50 vezes na invasão bacteriana e lesão tecidual mais grave, em comparação com animais sem CD14 bloqueio [38], indicando um anti-inflamatório efeito de CD14. Estes estudos sugerem que, enquanto a regulação negativa da expressão de CD14 periodontal reduz o efeito estimulador do LPS sobre a sinalização pró-inflamatória, que também podem afectar a imunidade inata contra patógenos LPS-independentes e, assim, aumenta a inflamação dos tecidos.
Estudos anteriores também demonstraram o duplo papel de CD14 no DM2. Por um lado, foi relatado que a expressão de CD14 foi significativamente associada com DM2 e correlacionada com as concentrações séricas de proteína C-reactiva [39]; Por outro lado, foi referido que a injecção de CD14 solúvel humano recombinante a ratinhos diabéticos aumentou a acção da insulina [40] e os ratinhos com CD14-deficiência exibida intolerância à glicose significativa [41], sugerindo um papel benéfico de CD14 na sinalização da insulina e da glucose homeostatsis.
A constatação de que CD14 foi regulada negativamente em pacientes com periodontite também pode revelar um mecanismo de feedback negativo pelo qual tecidos periodontais de pacientes com periodontite evitar mais danos de ataques repetidos por LPS de bactérias derivadas. Curiosamente, Nemoto et al. relatou que a expressão de CD14 em fibroblastos gengivais humanos (hgfs) foi marcadamente reduzida por forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) -activated leucócitos polimorfonucleares (PMN) num sistema de co-cultura de HGF e PMN [42]. A sua investigação adicional demonstrou que, como resultado da redução de CD14, a produção de citoquinas inflamatórias induzido por LPS, tais como IL-8 por hgfs foi suprimida. Estes resultados sugerem que, embora os PMN activados desempenham um papel crucial na inflamação do tecido, hgfs têm um potencial mecanismo de retroalimentação negativa para controlar a inflamação por regulação negativa da expressão de CD14.
Para além de CD14, o nosso estudo também examinada a expressão periodontal de TLR4, MD-2 e MyD88. Os resultados mostraram que as expressões de ARNm periodontais de RST4, DM-2 e MyD88 teve nenhuma diferença significativa entre os 3 grupos. Embora nosso estudo atual é o primeiro com foco na expressão de mRNA TLR4, Promsudthi et al. e Rojo-Botello et al. relataram o efeito do DM2 e periodontite crónica na expressão da proteína RST4 [29, 30]. Promsudthi et ai. mostrou que pacientes com periodontite tinham reduzido proteína TLR4 no epitélio gengival, mas os pacientes com ambos periodontite e diabetes apresentaram percentuais maiores de células TLR4-positivos em comparação com indivíduos adultos saudáveis [29]. Rojo-Botello et al. demonstraram que pacientes com periodontite e diabetes teve uma proteína TLR4 maior no epitélio gengival de pacientes com periodontite sozinho. Obviamente, estes estudos concentraram-se na expressão de proteínas de RST4 periodontal, mas o nosso estudo visando a expressão de ARNm de RST4.
Tem sido bem documentado que a expressão de CD14 é regulada positivamente por citocinas inflamatórias e LPS in vitro
[43-45] . No entanto, os mecanismos envolvidos na regulação negativa da expressão de CD14 não foram bem estabelecidos. Em adição à inibição da expressão de CD14 por PMNs como descrito acima, Imai et ai. relataram que o factor de crescimento transformante beta (TGF-p) 1 é capaz de inibir a expressão de CD14 estimulada por LPS em macrófagos reduzindo factor de transcrição de activação de proteína (AP) -1 [46]. Curiosamente, o nosso estudo recente demonstrou que a expressão de TGF-p1 periodontal está aumentada em pacientes com periodontite [47]. Portanto, é provável que o TGF-p1 desempenha um papel na regulação negativa da expressão de CD14 periodontal em pacientes com periodontite. No entanto, ainda não está claro como a expressão de CD14 é ainda mais reprimidos pela DM2 e mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos pelos quais a expressão CD14 periodontal é regulada negativamente pela periodontite e DM2.
Conclusões
expressão de CD14 foi regulada negativamente em toda pacientes nem com periodontite nem DM2, pacientes com periodontite sozinho, e pacientes com periodontite tanto e DM2. Essa descoberta indica que a expressão de CD14 está associada a uma resposta do hospedeiro favorável ou submetido a um regulador negativo
abreviações
TLR:.
Toll like receptor
LPS:
lipopolissacarídeo
MyD88:
gene Mielóide diferenciação primária de resposta 88, MD-2, factor de diferenciação mielóide 2
PD:
profundidade de sondagem
AL:
nível de inserção
Declarações
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela National Instituto de Pesquisa Dental e Craniofacial (NIDCR) /Institutos Nacionais de Saúde (NIH) DE016353 concessão e do Departamento de Assuntos de veteranos, Veterans Health Administration, Escritório de Pesquisa e Desenvolvimento, Biomedical Research Laboratory e Desenvolvimento conceder 5I01BX000854 (para YH).
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concorrentes. interesses
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes contribuições
dos autores
DCH:. Dr. Hedgpeth é um periodontista que recrutou pacientes, coletadas tecidos periodontais após as cirurgias e os dados clínicos fornecidos. XZ: Xiaoming é um especialista em pesquisas que realizou a análise isolamento do RNA e expressão gênica usando PCR em tempo real. JJ: Dr. Jin é um cientista da equipe que realizou análise de expressão gênica utilizando PCR em tempo real e análise de dados. RSL: Dr. Leite é um periodontista que recrutou pacientes, coletadas tecidos periodontais após as cirurgias, fornecidos dados clínicos, e contribuiu para manuscrito preparação. JWK: Dr. Krayer é um periodontista que contribuíram para manuscrito preparação. YH: Dr. Huang é um pesquisador sênior supervisionando o projeto incluindo a obtenção de aprovação ética, delineamento experimental, análise de dados e preparação do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
