Abstract
Fundo
A candidíase oral é uma infecção causada por um fungo do tipo levedura denominado Candida
. Vários métodos podem ser utilizados para isolar Candida
a partir da cavidade oral. No entanto, é difícil de diagnosticar correctamente e satisfatoriamente candidíase oral porque actualmente não há padrões microbiológicos de laboratório ou com base em amostras da cavidade oral estão disponíveis. O objetivo deste estudo é estabelecer um teste de laboratório confiável para o diagnóstico de candidíase oral
Métodos
swab oral, enxaguar e amostras de lavagem concentrados foram obtidas de 200 pacientes ambulatoriais consecutivos (103 pacientes do sexo masculino e 97 do sexo feminino;. Idade média, 47,2 anos, variando idade, 9-89 anos). Candida
colónias a partir de amostras de cultura foram enumerados para comparar as sensibilidades e especificidades dos métodos de amostragem acima mencionadas, e as associações entre Candida
detecção ou concentração e os sinais clínicos orais foram examinados.
Resultados
A média número de colónias foram 263 ± 590 CFU /mecha para o método de zaragatoa, 2894 ± 6705 UFC /100 mL para o método de lavagem, e 9245 ± 19030 CFU /100 uL para o método de lavagem concentrado. Os números médios foram de 23 CFU /mecha para o método de zaragatoa, 56 UFC /100 mL para o método de lavagem, e 485 UFC /100 mL para o método de lavagem concentrado. Candida
foi detectado na cavidade oral de 33,5% e 52,0% dos pacientes externos pelo método de zaragatoa e de lavagem concentrado, respectivamente. Candida
concentrações determinadas pelo enxaguamento concentrado foram intimamente relacionadas com a severidade dos sinais clínicos orais. Os valores preditivos positivos de raiz residual, vermelhidão da mucosa oral, prótese, glossalgia, boca seca e alteração do paladar foram preditores úteis de candidíase oral.
Conclusões
concentrado de amostragem de lavagem é adequado para avaliar a candidíase oral, e Candida
concentrações examinadas usando este método fortemente associada com os sinais orais associadas à infecção por Candida
.
Palavras-chave
concentrado método Swab método de lavagem oral Oral candidíase Candida
Fundo
candidíase oral é uma comum infecção oportunista da cavidade oral e é causada por leveduras do género Cândida
, principalmente Candida albicans
. Apresenta-se clinicamente de diversas formas, incluindo pseudomembranosa (aguda /crônica), eritematosa (aguda /crônica), a placa-like (crónica) e nodular (crónica) formas [1]. No entanto, Candida
espécies são frequentemente isoladas da cavidade oral em indivíduos saudáveis de todas as idades, com uma prevalência de 15-75% [2-4], e por isso é difícil diferenciar candidíase oral do estado commensal por detecção microbiológica do Candida
espécies presentes na cavidade oral. Além disso, candidíase oral tem sido muitas vezes diagnosticada com base em achados clínicos, independentemente se foi detectado um Candida
espécie. Portanto, os critérios microbiológicos adicionais são necessários para diagnosticar Candida
infecção oral corretamente.
Vários métodos podem ser utilizados para isolar Candida
da cavidade oral, incluindo manchas, cotonetes simples, culturas impressão, coleta de saliva total, concentrados enxaguatórios bucais e biópsias da mucosa [5, 6]. Destes, o método de lavagem oral concentrada é uma das técnicas mais adequadas para a determinação das concentrações de Candida
na cavidade oral [7]; No entanto, este método é insuficiente para detectar a Candida
local da infecção. concentrações Candida
sob 600 UFC /mL em amostras de lavagem concentrados foram relatados para o transporte saudável commensal [8], enquanto que os indivíduos com concentrações de Candida
acima 2-3 × 10
3 UFC /mL estão predispostos a via oral Candida
infecção [7]. No entanto, White et al. informou que Candida
níveis de até 9 × 10 3 UFC /mL foram observados em controlos saudáveis e que estes níveis eram ocasionalmente maior do que aqueles em pacientes com candidíase oral [9].
candidíase oral ocorre freqüentemente em indivíduos imunocomprometidos, incluindo os pacientes HIV-positivos e AIDS, transplantados e pacientes de quimioterapia [10]. De facto, a doença é frequentemente o sinal inicial de várias doenças de imunodef iciência, e a sua significância clínica como um biomarcador foi reconhecido nos últimos anos [11]. No entanto, é difícil de diagnosticar correctamente e satisfatoriamente candidíase oral porque actualmente não há padrões microbiológicos de laboratório ou com base em amostras da cavidade oral estão disponíveis. Neste estudo, nós examinamos as associações entre os achados clínicos orais e métodos de diferenças para obtenção de amostras da cavidade oral para determinar quais critérios poderiam ajudar a diferenciar candidíase oral da presença de Candida
no estado comensais.
Métodos
amostras obtidas de 200 pacientes ambulatoriais consecutivos (103 pacientes do sexo masculino e 97 do sexo feminino, com idade média, 47,2 anos; faixa etária, 9-89 anos) que consultou um dentista pelo Aizawa Hospital a partir de março de 2011 a junho de 2011, foram participaram deste estudo. As amostras de 30 voluntários (17 homens e 13 mulheres, com idade média, 30,1 anos; faixa etária, 23-43 anos) sem sintomas orais e sinais clínicos de candidíase também foram utilizados. Em todos eles, um dente não foi quebrada e os dentes cariados foram completamente tratado. O consentimento informado foi obtido de todos os pacientes, os pais de menores e voluntários. O Comitê de Ética em Aizawa Hospital aprovou este protocolo de estudo com número de aprovação H22-14. A preparação das amostras
e determinação de CFU
Os 3 métodos de amostragem utilizados no estudo foram os seguintes.
Método 1. Swab
: os materiais foram obtidos por raspagem da superfície dorsal da língua com 5 pancadas (cerca de 2 cm de comprimento) de um cotonete de algodão (Hakujuji Co Ltd. Tóquio, Japão), e, em seguida, a compressa foi directamente inoculados em meio CHROMágar Candida (Kanto Chemical Co. Ltd., Tóquio, Japão)
2. enxaguamento método
:. Depois de uma amostra foi obtido usando o método de zaragatoa, uma amostra de solução de lavagem oral foi recolhido por lavagem da boca com 10 mL salina estéril, que foi realizada na boca por 5 s antes de ser recolhido em um recipiente estéril. Cem microlitros de solução de lavagem foi inoculado para o meio CHROMágar Candida
3. Concentrado método de enxaguamento
:. A cavidade oral é enxaguado com 10 ml de solução salina estéril, e 7 a 10 ml foi recolhida como a solução de enxaguamento . A solução de lavagem concentrada foi preparado por centrifugação a 2300 × que
g durante 20 min. Depois o sobrenadante foi removido, o sedimento celular foi ressuspenso em 500? L, o qual foi inoculada em meio CHROMágar Candida em alíquotas de 100 uL. Candida
colónias foram contadas após incubação a 37 ° C durante 48 h. Se havia muitos Candida
colónias a serem contados, a Candida
soluções foram diluídas dez vezes.
Associações entre a presença de Candida
espécies e sinais clínicos orais
Em seguida, examinaram a associação entre a presença de Candida
espécies e sinais orais clínicos usando amostras obtidas através do método swab eo método de lavagem concentrado. As associações entre Candida
contagens de colónias (Candida
concentrações) e sinais clínicos orais foram então determinados utilizando amostras obtidas através do método de lavagem concentrado. A Tabela 1 mostra os sinais clínicos orais utilizadas neste estudo e as suas grading.Table 1 sinais clínicos orais e sua classificação
Grade
Signs
0
1
2
3
Glossalgia
Negative
Slight
Moderate
Severe
Taste transtorno
negativos
ligeira
Moderado
grave
boca seca
negativo
ligeira
Moderado
grave
Vermelhidão da mucosa oral
negativos
ligeira
Moderado
grave
Vermelhidão da língua
negativos
ligeira
Moderado
grave
língua revestida
ligeira negativo
Moderado
grave
queilite angular
negativo
unilateral
bilateral
ulceração
negativo
Single
múltipla
raiz residual
negativo
Individual
múltipla
dentadura
negativo
unilateral
bilateral
avaliações orais
sinais orais clínicos foram classificados como se segue. Glossalgia foi graduada utilizando a Escala Visual Analógica (negativo: 0 mm; ligeiro: 1 mm; moderada: 30 mm; grave: mais de 54 mm) [12, 13]. alteração do paladar foi graduada utilizando os Critérios de Terminologia Comum para Eventos Adversos v3.0 publicado pelo Instituto Nacional do Câncer (negativo: nenhuma mudança no gosto; ligeiro: Paladar mas nenhuma mudança na dieta; moderada: Paladar com mudança na dieta ou nocivos ou sabor desagradável; grave: perda do paladar) [14]. boca seca foi classificada usando a classificação fornecida por Kakinoki et al. (Negativo: não-seca; ligeiro: saliva mostra viscosidade; moderada: saliva mostrando pequenas bolhas na língua; severa: língua seca, sem viscosidade, pouca ou nenhuma saliva) [15]. Vermelhidão da mucosa oral foi graduada utilizando o Guia de Eilers Oral Avaliação (negativo: não vermelhidão na mucosa oral; ligeiras: localizada áreas vermelhidão sem ulcerações; moderada: vermelhidão sobre toda a mucosa oral sem ulcerações; severas: ulcerações com ou sem sangramento) [ ,,,0],16]. saburra
foi graduada utilizando os escores visuais desenvolvidos por Kojima et al. (Negativo: menos de 1/3 da língua ligeiramente revestido; ligeiro: cerca de 2/3 da língua ligeiramente revestidos ou cerca de 1/3 da língua densamente revestido; moderada: cerca de 2/3 da língua densamente revestido; severa: . mais de 2/3 da língua densamente revestido [17] vermelhidão da língua foi graduada de forma semelhante (negativo: menos de 1/3 da língua mostrando ligeira vermelhidão; ligeiro: cerca de 2/3 da língua mostrando ligeira vermelhidão ou cerca de 1/3 da língua mostrando forte vermelhidão; moderada: cerca de 2/3 da língua mostrando forte vermelhidão; severa:. mais de 2/3 da língua mostrando forte vermelhidão)
Determinar o intervalo normal de transporte commensal saudável
Foram examinados 30 voluntários sem sinais orais clínicos de candidíase para a presença de Candida
espécie. Utilizou-se o maior número de colónias obtidas a partir de sua swab e amostras de lavagem concentrados como o limiar para a candidíase oral distintiva do estado commensal oral de Candida
espécies. A Candida
relação de detecção, foram então determinadas as associações entre sinais clínicos orais e detecção de Candida
, e as associações entre os sinais clínicos e o número de Candida
colónias obtidas utilizando o método swab e o método de lavagem concentrado. A sensibilidade e especificidade de cada sinal clínico foram examinadas quando Candida
espécies foram detectadas.
Análise estatística
A χ Página 2 teste foi utilizado para determinar a significância da diferença entre as taxas de Candida positivo
usando o método de detecção de zaragatoa oral e o método de lavagem oral concentrada. Os valores médios do número de detectados Candida
que foram obtidos a partir de indivíduos idênticos foram comparados usando o Wilcoxon não paramétrico assinado rank. A importância das relações entre as concentrações da mediana Candida
e as notas de cada sinal via oral clínica foram analisados utilizando o teste de Kruskal-Wallis
significância estatística foi estabelecido em p & lt
.; 0.05 para todos os métodos de análise. Além disso, teste de Bonferroni foi utilizado para a adopção de comparação múltipla. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando a versão do software SPSS 22 (SPSS, Chicago, IL, EUA).
Resultados
A fim de estabelecer os métodos necessários antes de toda a análise, um teste piloto foi realizado nas primeiras 10 amostras . As contagens das colónias obtidas a partir dos primeiros 10 pacientes externos utilizando o cotonete, lavar, e métodos de lavagem concentrados são apresentados na Fig. 1. A mediana e intervalo interquartil foram 23 CFU (intervalo interquartil, de 3 a 96 CFU) /cotonete para o método swab, 56 CFU (intervalo interquartil, 11-900 CFU) /100 mL para o método de lavagem e 485 CFU (interquartil gama, 210-6981 CFU) /100 uL para o método de lavagem concentrada nos primeiros 10 pacientes externos. Os primeiros 10 pacientes ambulatoriais foram testados utilizando os três métodos; no entanto, foi utilizado o método de lavagem concentrada para exames posteriores porque produziu mais de Candida
colônias. As contagens medianas do Candida
colónias obtidas utilizando o método de lavagem concentrado foram significativamente maiores do que as obtidas pelos outros dois métodos, respectivamente (p Art & lt; teste de 0,01, Wilcoxon assinado-rank com teste de Bonferroni). O método de lavagem concentrado foi o mais sensível, porque poderia detectar espécies de Candida
quando o método de zaragatoa ou o método de lavagem não o fez. Assim, entendemos que o método de lavagem concentrada era apropriado para exames posteriores. FIG. 1 Comparação das sensibilidades do método de zaragatoa, o método de lavagem, e o método de lavagem concentrada (N
= 10). Pontos que representam os dados do mesmo paciente são ligados por linhas
Nós presumivelmente identificados Candida
espécies da cor das colónias cultivadas em CHROMagar Candida. Usando este método, a seguinte Candida
perfis foram observadas em 68 pacientes, 12 pacientes, um paciente, nove pacientes, sete pacientes, cinco pacientes, um paciente e um paciente, respectivamente: C. albicans
, C. tropicalis
, C. glabrata
, C. albicans
+ C. glabrata
, C. albicans
+ C. tropicalis
, C. albicans
+ C. glabrata
+ C. tropicalis
, C. albicans
+ C. krusei
+ não identificados Candida
espécies e C. glabrata
+ C. tropicalis
+ não identificado Candida
espécie. Não houve diferenças significativas nos sinais clínicos orais entre os 68 pacientes com C. albicans
e 12 com C. tropicalis
. As taxas de detecção
e de colónias obtidas usando o método swab eo método de lavagem oral concentrada são apresentados na Tabela 2. Candida
espécies foram detectadas na cavidade oral em 67 de 200 pacientes (33,5%) pelo método de zaragatoa e em 104 de 200 (52%) pelo método de lavagem concentrado. O número de colónias média foi de 7 CFU (intervalo interquartil, 2-37 CFU) /cotonete para o método swab e 141 CFU (intervalo interquartil, 14-1001 CFU) /100 mL para o método de lavagem concentrado. Os rácios de detecção (p
& lt; 0,01, χ
2 de teste) e contagem de colônias (p Restaurant & lt; 0,01, Wilcoxon signed-rank) obtida pelo método de lavagem concentrado foram significativamente superiores aqueles obtidos utilizando as taxas de detecção method.Table 2 de esfregaço e de colónias para o cotonete e amostras de lavagem concentrado a partir de pacientes (n = 200
)
* χ Página 2 de teste (p Art & lt; 0,01) ; ** Wilcoxon signed-rank (p Art & lt; 0,01)
Associações entre sinais orais clínicos e Candida
detecção utilizando o método swab estão resumidos nas Tabelas 3 e 4. Quando Candida
foi detectada usando o método swab, as sensibilidades de língua revestido, boca seca, dentadura, vermelhidão da língua, ea raiz residual foram 41,8, 46,3, 40,3, 34,3, e 29,9%, respectivamente, e as especificidades de vermelhidão da mucosa oral, queilite angular , raiz residual, glossalgia, alteração do paladar, a dentadura, e ulceração foram 97,7, 99,2, 92,5, 94,0, 93,2, 88,0, e 92,5%, respectivamente. Os valores preditivos positivos de raiz residual, vermelhidão da mucosa oral, prótese, glossalgia, boca seca, e transtorno de sabor eram 66,7, 66,7, 62,8, 52,9, 54,4, e 35,7%, respectively.Table 3 Índices de sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método swab
associação entre sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método swab
Candida
P
-valor
sinais orais clínicos
(+)
(-)
(χ
2 test)
Glossalgia
(+)
9
8
0.08
(−)
58
125
Taste disorder
(+)
5
9
0.85
(−)
62
124
Dry mouth
(+)
31
26
<0.01
(−)
36
107
Redness da via oral mucosa
(+)
6
3
<0.05
(−)
61
130
Redness do tongue
(+)
23
25
<0.05
(−)
44
108
Coated tongue
(+)
28
42
0.15
(−)
39
91
Angular cheilitis
(+)
2
1
0.22
(−)
65
132
Ulceration
(+)
5
10
0.98
(−)
62
123
Residual root
(+)
20
10
<0.01
(−)
47
123
Denture
(+)
27
16
<0.01
(−)
40
117
Quadro 4 Índices de sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método swab
sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo entre os sinais clínicos orais e detecção de Candida
pelo método swab
sinais orais clínicos
Sensibilidade
Especificidade
O valor preditivo positivo
Glossalgia
13,4%
94,0%
52,9%
transtorno Taste
7,5%
93,2%
35,7%
boca seca
46,3%
80,5%
54,4%
Vermelhidão da mucosa oral
9,0%
97,7%
66,7%
Vermelhidão da língua
34,3%
81,2%
47,9%
língua revestida
41,8%
68,4%
40,0%
angular queilite
3,0%
99,2%
66,7%
ulceração
7,5%
92,5%
33,3%
raiz residual
29,9%
92,5%
66,7%
dentadura
40,3
88,0%
62,8%
associações entre sinais orais clínicos e Candida
detecção utilizando o método de lavagem concentrada estão resumidos nas Tabelas 5 e 6. Quando Candida
foi detectada utilizando o método de lavagem concentrada, as sensibilidades de língua revestido, boca seca, dentadura, vermelhidão da língua, e raiz residual foram de 45,2, 42,3, 34,6 , 29,8 e 26,0%, respectivamente, e as especificidades da vermelhidão da mucosa oral, queilite angular, raiz residual, glossalgia, alteração do paladar, dentadura, e ulceração foram de 99,0, 99,0, 96,9, 96,9, 95,8, 92,7, e 91,7% , respectivamente. Os valores preditivos positivos de raiz residual, vermelhidão da mucosa oral, prótese, glossalgia, boca seca, e transtorno de sabor eram 90,0, 88,9, 83,7, 82,4, 77,2 e 71,4%, respectively.Table 5 Índices de sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método de lavagem concentrada
associação entre sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método de lavagem concentrada
Candida
P
-valor
sinais orais clínicos
(+)
(-)
(χ
2 test)
Glossalgia
(+)
14
3
<0.01
(−)
90
93
Taste disorder
(+)
10
4
0.13
(−)
94
92
Dry mouth
(+)
44
13
<0.01
(−)
60
83
Redness da via oral mucosa
(+)
8
1
<0.05
(−)
96
95
Redness do tongue
(+)
31
17
<0.05
(−)
73
79
Coated tongue
(+)
47
23
<0.01
(−)
57
73
Angular cheilitis
(+)
2
1
0.60
(−)
102
95
Ulceration
(+)
7
8
0.66
(−)
97
88
Residual root
(+)
27
3
<0.01
(−)
77
93
Denture
(+)
36
7
<0.01
(−)
68
89
Quadro 6 Índices de sinais orais clínicos e detecção de Candida
pelo método de lavagem concentrada
sensibilidade, especificidade e valor preditivo positivo entre os sinais clínicos orais e detecção de Candida
pelo método de lavagem concentrada
sinais orais clínicos
Sensibilidade
Especificidade
O valor preditivo positivo
Glossalgia
13,5%
96,9%
82,4%
transtorno Taste
9,6%
95,8%
71,4%
boca seca
42,3%
86,5%
77,2%
Vermelhidão da mucosa oral
7,7%
99,0%
88,9%
Vermelhidão da língua
29,8%
82,3 %
64,6%
Revestido língua
45,2%
76,0%
67,1%
queilite angular
1,9%
99,0%
66,7%
ulceração
6,7%
91,7%
46,7%
raiz residual
26,0%
96,9%
90,0%
dentadura
34,6%
92,7%
83,7%
as diferenças entre as notas de cada sinal via oral clínica e número de colónias obtidas usando o método de zaragatoa são mostrados na Tabela 7. alta Candida
contagens foram significativamente associados com a boca seca. As diferenças entre os graus de cada sinal e concentrações clínicas orais de colónias obtidas usando o método de lavagem concentrado são mostrados na Tabela 8. Alta Candida
contagens foram significativamente associados com boca seca, vermelhidão da língua, da língua revestido, e 7 denture.Table as diferenças entre as notas de cada sinal via oral clínica e Candida
números pelo método swab
sinais orais clínicos
Grade
0
1
2
3
P
*
Glossalgia
Mediana
0
1
0
6,5
0,068
(n
)
183
9
6
2
transtorno Taste
Median
0
0
0
116
0,282
(n
)
186
9
4
1
boca seca
Median
0
0,5
6
98
& lt; 0,001
(n
)
143
36
20
1
Vermelhidão da mucosa oral
Median
0
24
0
0
0,015
(n
)
191
8
1
0
Vermelhidão da língua
Median
0
0
36,5
0
0,002
(n
)
152
40
8
0
língua revestida
Median
0
0
0
7
0,138
(n
)
130
57
12
1
queilite angular
Median
0
58
3
NAB
0,402
(n
)
197
2
1
