piloto da arte abstracta
Fundo
Os papilomavírus humanos (HPV) são uma grande família de vírus sem envelope de ADN, principalmente associado com cancros cervicais. evidências epidemiológicas recentes sugerem que o HPV pode ser um fator de risco independente para o câncer de orofaringe. Evidência sugere agora HPV pode modular o processo de malignidade em alguns tumores de orofaringe do Tabaco e induzida pelo álcool, mas também pode ser o fator oncogênico primária para a indução da carcinogênese entre alguns não-fumantes. Mais evidências, no entanto, é necessária sobre a prevalência de HPV oral entre adultos saudáveis para estimar o risco. O objetivo deste estudo foi realizar uma triagem de HPV de adultos saudáveis normais para avaliar a prevalência de HPV oral.
Métodos
pacientes adultos saudáveis em uma escola dental US foram selecionados para participar neste estudo piloto. O DNA foi isolado de amostras de saliva e blindados para o HPV de alto risco cepas HPV16 e HPV18 e processados usando qPCR para a quantificação e confirmar sensibilidade analítica e especificidade.
Resultados da análise do qui-quadrado revelou a amostra do paciente foi representante da a população clínica geral no que diz respeito a gênero, raça e idade (p Art & lt; 0,05). Quatro amostras de pacientes eram portadores de DNA de HPV16, que representa 2,6% do total (n = 151). Três das quatro amostras de HPV16-positivos eram de pacientes com menos de 65 anos de idade e todos os quatro eram do sexo feminino e latino-americano (não-branco). Nenhuma amostra testou positivo para HPV18.
Conclusões
O recrutamento bem sucedido e triagem de pacientes adultos saudáveis revelou HPV16, mas não HPV18, esteve presente em um pequeno subconjunto. Estes resultados fornecem novas informações sobre o estado de HPV oral, o que pode ajudar a contextualizar os resultados de outros estudos que demonstram taxas de câncer oral aumentaram em os EUA entre as duas mulheres e minorias e em algumas áreas geográficas que não são apenas explicadas pelas taxas de tabaco e álcool usar. Os resultados deste estudo podem ser de valor significativo para promover nossa compreensão da saúde bucal e risco de doença, bem como para ajudar a projetar futuros estudos explorando o papel de outros fatores que influenciam a exposição HPV oral, bem como a curto e longo . consequências a longo prazo da infecção de HPV oral
material suplementar Electrónicas | a versão online deste artigo (doi:. 10 1186 /1472-6831-11-28) contém material suplementar, que está disponível para usuários autorizados.
Fundo
o papilomavírus humano (HPV) tem sido apontada como a causa de praticamente todos os cânceres cervicais em todo o mundo [1-3]. Estes representam uma grande família de vírus sem envelope de ADN que pode ser encontrado integrado no genoma do hospedeiro, não integrados ou epissomais, ou como uma combinação ou mistura destes dois tipos de tecidos infectados [4-9]. vírus HPV infectar muitos tipos de células epiteliais, com neoplasias intra-epiteliais que representam a esmagadora maioria dos cancros relacionados com o HPV [5, 10, 11].
evidências epidemiológicas recentes sugerem que o HPV também pode ser um fator de risco independente para o câncer orofaríngeo , revelando HPV em três vezes o número de lesões orais pré-cancerosas, e quase cinco vezes mais câncer de orofaringe em comparação com a mucosa oral normal [12-14]. De todos os tipos de HPV, o alto risco estirpes de HPV 16, e a um menor grau de HPV18, são mais vulgarmente identificado a partir de biópsias oral [15-21]. Embora os fatores de risco tradicionais para o desenvolvimento de câncer de orofaringe continuam uso do tabaco e consumo excessivo de álcool, outros fatores de risco, como o HPV, pode desempenhar um papel significativo em determinar se ele se desenvolve e quão rápido ele pode progredir [14, 19, 22-28].
A comparativamente baixa presença de HPV de alto risco em tecidos normais e muito maior prevalência nas lesões de orofaringe pré-cancerosas e cancerosas podem sugerir que o HPV preferencialmente já infecta o desenvolvimento de câncer de orofaringe [12-14]. Embora seja possível que a baixa prevalência em indivíduos saudáveis pode ser atribuível a outros factores, incluindo a recolha de amostras inadequada ou a sensibilidade do ensaio, é também possível que o HPV pode funcionar para modular o processo de malignidade no desenvolvimento ou tumores da orofaringe estabelecidos, como tem sido observado em estudos de infecção por HPV em outros tipos de câncer em desenvolvimento [29-39]. Por exemplo, estudos epidemiológicos recentes e caso-controle demonstraram que pacientes com tumores de orofaringe HPV-positivos tinham melhorado significativamente as taxas de sobrevivência [12, 40, 41] e as taxas de resposta terapêutica quando comparados com os controles HPV-negativos [42]. Vários in vitro
estudos foram recentemente investigados possíveis mecanismos que podem ser responsáveis por essas mudanças fenotípicas em câncer de orofaringe [25-27]. A evidência está se acumulando que a infecção por HPV de alguns cancros orofaríngeos se correlaciona com as taxas de sobrevivência maior e melhor prognóstico entre alguns pacientes, devido a estas alterações na capacidade de resposta celular [40-45]. Estes estudos destacam a necessidade de compreender não só a prevalência da infecção pelo HPV oral, mas também a duração ea persistência de tais infecções, devido ao seu potencial para afetar a progressão do tumor de orofaringe.
É provável que o HPV pode modular o processo de malignidade em algum do Tabaco e álcool-induzida cancros da orofaringe, mas também podem ser o factor oncogénica primário para induzir a carcinogénese em um subconjunto de pacientes sem estes factores de risco tradicionais. Algumas evidências têm demonstrado que não o tabaco e não-relacionados ao álcool câncer de orofaringe foram seis vezes mais propensos a abrigar infecções por HPV do que os controles de casos de correspondência [46]. Para avaliar com precisão o risco, são necessários mais estimativas de prevalência de HPV oral entre os adultos saudáveis. Estudos internacionais têm avaliado a prevalência de HPV em adultos saudáveis, utilizando amostras de biópsia, revelando taxas de prevalência que variaram de 0 a 15% [20, 47-51]. Além disso, outros estudos começaram a relatar saliva menos invasivo e métodos de ensaio à base de lavagem oral para identificar HPV entre as amostras de saliva de adultos saudáveis, revelando taxas de prevalência entre 2,8 a 25% [15, 52-60]. Alguns destes
estudos de triagem de HPV oral, foram realizadas em os EUA em adultos normais saudáveis, além de pacientes com câncer de orofaringe [57, 58, 61]. Estes estudos relataram taxas muito mais baixas, entre 1,3 e 7%, do que em estudos internacionais anteriores [47, 50, 53]. Com base nesta informação, o objectivo deste projecto foi realizar uma triagem para as cepas mais prevalentes de alto risco de HPV, HPV16 e HPV18, em adultos saudáveis normais. Este estudo piloto foi realizado em Nevada, um estado recentemente documentado para ter taxas crescentes de câncer de orofaringe, entre 1997 e 2005 - apesar do decréscimo das taxas de consumo de tabaco e álcool no estado, bem como a diminuição das taxas de câncer de orofaringe nacional [23, 24] . O objetivo a longo prazo é fornecer informações mais detalhadas sobre a prevalência de HPV oral de alto risco para permitir estimativas mais robustas de risco de câncer de orofaringe.
Métodos
Seres Humanos
O protocolo para este estudo intitulado "A Prevalência de Oral vírus do papiloma humano (HPV) na Universidade de Nevada, Las Vegas - Faculdade de Medicina Dentária (UNLV-SDM) Clinic População "foi arquivado, alterada, e aprovados pelo Gabinete UNLV of Research Integrity - Seres Humanos (OPRs # 1002 -3361), em 9 de abril de 2010. em resumo, sujeitos desta amostra de conveniência foram recrutados por membros da Clínica UNLV-SDM durante a sua visita ao dentista em uma das 15 datas da clínica. Consentimento Informado era necessária e foi realizada no local. Os critérios de inclusão: indivíduos tinham que ter 18 anos ou mais e devem concordar em participar. Critérios de exclusão: indivíduos com menos de 18 anos de idade, assuntos que se recusaram a participar, e em indivíduos com diagnóstico prévio de câncer de orofaringe foram excluídos tamanho
Amostra
Para determinar um tamanho de amostra adequado, estudos anteriores que rastreadas para o alto. risco de HPV oral em adultos saudáveis foram avaliados para determinar a gama de tamanhos de amostra, que variaram grandemente de 12 - 1680 [47-62]. Pesquisas anteriores em UNLV ea clínica UNLV-SDM demonstraram baixas taxas de participação para invasivos, rastreios baseados no sangue [63], mas as taxas mais elevadas de participação usando biomonitorização não-invasivo e métodos de rastreio, incluindo coleta de saliva (dados não publicados). Estes estudos tinham tamanhos de amostra variando de 16 - 200. Com base nesta informação combinado o tamanho máximo da amostra foi estimado em 200.
Saliva Coleção Protocolo Online em breves adultos, saudáveis que concordaram em participar foi dada uma pequena, estéril recipiente de recolha de saliva, um tubo de polipropileno estéril 50 mL de Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ). Os participantes foram, então, pediu para mastigar um pequeno pedaço de cera de parafina durante um minuto e, em seguida, para expectorar. As amostras foram armazenadas em gelo até que o transporte para um laboratório para análise biomédica. Cada amostra de saliva foi atribuído um número único, gerado aleatoriamente para evitar viés de pesquisa. A informação demográfica sobre a amostra foi recolhida ao mesmo tempo, que consistia de apenas a idade, sexo e a etnia.
contagem celular e o isolamento do DNA
Todas as amostras foram centrifugadas durante 10 minutos a 2100 g
(RCF) e o sedimento lavou-se com solução salina tamponada com fosfato 1X (PBS) (Hyclone: Logan, UT) e ressuspensas em 5 mL de 1X PBS. O número de células foi determinada utilizando azul de tripano (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) usando um microscópio Zeiss Axiovert 40 invertido (Gõttingen, Alemanha) e um hemacitómetro (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ). Para determinar se quaisquer amostras abrigava o vírus HPV, ADN foi isolado a partir da amostra de saliva através de um mínimo de 3,5 × 10
5 células e o kit de isolamento de ADN GenomicPrep (Amersham Biosciences: Buckinghamshire, Reino Unido), utilizando o procedimento recomendado pela fabricante, como previamente descrito [26, 27, 32]. A pureza do ADN foi calculada utilizando medidas da razão de absorvância a 260 e 280 nm (razão A260 /A280 entre 1,7 e 2,0).
reacção em cadeia da polimerase (PCR)
DNA de cada amostra foi então utilizada para realizar PCR com o Fisher exACTGene PCR kit completo (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) e um gradiente termociclador Mastercycler (Eppendorf: Hamburgo, Alemanha) utilizando os seguintes iniciadores para HPV 16 [26, 27], HPV18 [27, 32], e glyceraldehyde- 3- fosfato desidrogenase (GAPDH) [64], sintetizado por SeqWright (Houston, TX):
HPV16 iniciador directo, ATGTTTCAGGACCCACAGGA;
HPV16 iniciador inverso, CCTCACGTCGCAGTAACTGT;
HPV18 iniciador directo, ATGGCGCGCTTTGAGGATCC;
HPV18 iniciador reverso , GCATGCGGTATACTGTCTCT;
GAPDH iniciador directo, ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH iniciador inverso, ACCACTGACACGTTGGCAGT;
Um ug de ADN molde foi utilizado para cada reacção. O passo inicial de desnaturação decorreu durante três minutos a 94 ° C. Um total de 30 ciclos de amplificação foram corridos, que consiste de 30 segundo desnaturação a 94 ° C, 60 segundos de emparelhamento a 58 ° C e 30 segundos de extensão a 72 ° C. extensão final foi executada durante cinco minutos a 72 ° C. Os produtos da reacção de PCR foram separados por electroforese em gel usando 4% NuSieve Reliant ® 3: 1 géis Além disso agarose (Lonza: Rockland, ME). As bandas foram visualizadas pela iluminação UV de etídio-coradas com brometo de géis e capturou a utilizar um sistema Kodak Gel Logic 100 Imaging and 1D Imagem Software Análise (Eastman Kodak: Rochester, NY): Quantitative PCR (qPCR)
amostras de DNA. foram então processados usando qPCR para fornecer quantificação mais específico e sensível. Iniciadores e sondas foram concebidos utilizando a biblioteca Roche Universal Sonda software de desenho de ensaio (UPL) para amplificar a região de sobreposição de E6 e E7 de HPV16 sequência do gene de [GenBank: Genbank K02718] e o gene de manutenção β-actina humana [GenBank: M10277]. Todos os primers foram adquiridos a partir de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.) E as sondas de compra a partir de Roche Applied Science (Indianapolis, IN.)
HPV16 E6 /E7 iniciador directo 5'-CAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAA-3 ', HPV16 E6 /E7 iniciador de sentido reverso 5'-CCAGCTGGACCATCTATTTCA-3 ', HPV16 E6 /E7 de hidrólise "Taqman" sonda 5' - (fAM) -AGGAGGAG- (escuro corante extintor) -3 '(UPL sonda # 63) foi utilizada para amplificar os pares de base 73 (pb) a região entre a posição 535 nucelotide (nt) e 607 posição nt. Humana β-actina iniciador directo 5'-GTGGGGTCCTGTGGTGTG-3 ', humanos β-actina 5'-GAAGGGGACAGGCAGTGA-3', hidrólise β-actina "Taqman" Human sonda 5 '- (FAM) -GGGAGCTG- (escuro quencher corante) - 3 '(UPL sonda # 24) amplificaram a região de 61 pb entre 2642 posição nt e 2.702 posições nt.
o tempo real mistura de reacção foi preparada num LightCycler ® 480 placa com múltiplas cavidades 96 contendo 1 × LightCycler ® 480 Sondas Mestre (Roche Applied Sciences), 1 mM de cada respectivo conjunto de primers (frente e verso), 0,2 mM de respectiva sonda e 2 ul de modelo de DNA; num volume de reacção final de 20 ul. A mistura de sondas mestre continha tampão de reacção, mistura dNTP (incluindo dUTP em lugar de dTTP), MgCl mM 3,2 2, e Taq DNA polimerase
. O ensaio de PCR em tempo real foi realizada em um sistema LightCycler 480 (Roche Applied Science) com os seguintes parâmetros do ciclo: pré-incubação durante a activação inicial da enzima a 95 ° C durante 10 minutos, seguido por 45 ciclos de 95 ° C durante 10 segundos (taxa de rampa de 4,4 ° C /segundo), 60 ° C durante 30 segundos (velocidade de rampa de 2,2 ° C /segundo) e 72 ° C durante 1 segundo (velocidade de rampa de 4,4 ° C /segundo). A seguir fase de amplificação, um passo de arrefecimento foi realizada a 40 ° C durante 30 segundos (velocidade de rampa de 2,2 ° C /segundo). Aquisição do sinal de fluorescência foi realizada utilizando a configuração (465-510 nm) a seguir a 72 ° C fase de extensão de cada ciclo de Mono hidrólise da sonda. Todas as amostras foram realizadas em triplicado
sensibilidade analítica of the CaSki (American Type Culture Collection; Manassas, VA). A linha celular de adenocarcinoma cervical foi usado para desenvolver curvas padrão, tanto para o HPV16 (600 cópias /genoma) e β -actina (2 cópias /genoma) genes. DNA extraído a partir de células CaSki foi diluída em série de dez vezes a partir de 50 ng a 0,0005 ng [65]. Esta etapa permitiu a quantificação relativa do nível de entrada e de ADN quantidade final quanto o número de cópias /genoma /célula virai. A quantificação foi realizada com Threshold Cycle (C T), medido com o segundo método de máxima derivada (LightCycler 480 Software versão 1.5.0.39; Roche Applied Science). Saliva amostras & gt; 0,001 copy /genoma foram considerados HPV positivo. Especificidade análise foi realizada no ensaio qPCR contra HPV 18 e verificou-se ser de 100% de especificidade (resultados não apresentados)
A avaliação estatística
A sensibilidade e especificidade foram calculados como a proporção de verdadeiros positivos e verdadeiros negativos (valor de corte & gt;. 0,001 cópias /genoma), respectivamente. Após a aquisição de amostras de saliva e nos resultados de rastreio de HPV, informação demográfica de cada amostra foi comparado com o perfil demográfico global da piscina paciente unlv-SDM (N = 71, 051) usando um teste de qui-quadrado (χ2), para determinar se qualquer característica (sexo, raça, idade) era diferente do que o esperado entre os pacientes avaliados neste estudo (n = 151). Um nível de probabilidade de alfa (α) = 0,05 foi utilizado para determinar a significância estatística.
Resultados Amostras de saliva foram coletadas de 151 pacientes UNLV-SDM entre 2 de Junho e 1 de Outubro de 2010. Os pacientes dos quais amostras foram recolhidos e selecionados não foram estatisticamente diferentes da população geral da clínica UNLV-SDM no que diz respeito ao sexo, raça ou idade (Tabela 1). Mais especificamente, o número total de fêmeas e machos da amostra era aproximadamente igual (52,3% e 47,7%, respectivamente) e não significativamente diferente do que a população clínica global (p = 0,589
). Houve pacientes um pouco mais brancos na amostra do estudo (48,3%) do que na população geral UNLV-SDM (40,8%) (p = 0,133
). Além disso, havia um pouco menos de 18 - 64 anos de idade na amostra (80,8%) do que na clínica geral (85,3%) (p = 0,354
) 1 A análise demográfica .table dos participantes do estudo
Variáveis
UNLV-SDM
pesquisa amostral
análise estatística
Sexo
|
|
Feminino
n = 35.952 (50,6%)
n = 79 (52,3 %)
χ2 = 0,119, df = 1
Masculino
n = 35.099 (49,4%)
n = 72 (47,7%)
p
= 0,589
Corrida
|
|
|
Branco
n = 28.989 (40,8%)
n = 73 (48,3%)
χ2 = 1,621, df = 1
Non-White
n = 42.062 (59,2%)
n = 78 (51,7%)
p
= 0,133
Idade
|
|
|
18 - 64 anos
n = 60.598 (85,3%)
n = 122 (80,8%)
χ2 = 1,056, df = 1
65 +
n = 10.453 (14,7%)
n = 29 (19,2%)
p
= 0,354
Análise de amostras de saliva revelou contagem de células que variam entre 0,8-2,4 × 10 6 células /mL (Tabela 2). O DNA foi isolado com sucesso de todas as amostras de saliva coletadas, com concentrações médias de DNA que variam entre 820 - 1047 ng /mL. As medições de absorvância e análise de relação A260 /A280 confirmou a pureza do DNA isolados, que em média entre 1,87 e 2.05.Table 2 contagem celular e isolamento de ADN
A contagem de células (células /mL)
concentração de DNA Média (ng /mL)
A260 /A280
amostras (n)
0,8-1,2 × 106
915
2,05
31
1.6- 1,9 × 106
820
1,87
94
2,1-2,4 × 106
1047
1,95
26
A o DNA extraído foi subsequentemente rastreadas para a presença de HPV16 e HPV18 usando PCR (Figura 1). A partir deste rastreio, quatro amostras dos pacientes foram determinados como sendo HPV-positiva, o que representou 2,6% do total blindado (n = 4/151). Todas as quatro amostras abrigava ADN HPV16 e nenhum foi encontrado para ser positivo para HPV18. Embora uma piscina amostra positiva de apenas quatro pacientes não permite quaisquer inferências mais amplas ou conclusões, uma análise descritiva preliminar de informações demográficas revelou estes quatro amostras eram de mulheres, que também eram minoria (não-Branco, Hispânico) (Tabela 3). Três das quatro amostras eram de pacientes entre os 18 - 64 anos de idade (2,0%), e uma amostra foi proveniente de um paciente de 65 anos de idade (0,7%). A Figura 1 Rastreio de amostras de pacientes para o HPV. PCR utilizando ADN extraído de amostras de doentes (n = 151) foi rastreada utilizando HPV16- e iniciadores específicos de HPV18, que revelou quatro amostras de HPV16 nutria (2819, 2718, 2527, e 2430). Nenhuma amostra foram encontrados para abrigar HPV18. ADN extraído previamente a partir de linhas de células de adenocarcinoma cervical CaSki, e GH354, foi utilizado como HPV16 e HPV18 controlos positivos, respectivamente.
Tabela 3 Análise de HPVscreening
Variables
HPV16-positive
HPV18-positive
HPV-negative
Sexo
|
|
Feminino
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 75 (49,7%)
Masculino
n = 0
n = 0
n = 72 (47,7%)
Corrida
|
|
|
Branco
n = 0
n = 0
n = 73 (48,3%)
Non-White
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 74 (49,0%)
Idade
|
|
|
18 - 64 anos
n = 3 (2,0%)
n = 0
n = 119 (78,8%)
65 +
n = 1 (0,7%)
n = 0
n = 28 (18,5 %)
amostras de DNA foram então processados usando qPCR quantitativa para fornecer uma avaliação quantitativa, assim como a medição da sensibilidade e especificidade (Figura 2). Análise da gama de número de cópias /genoma para o gene doméstico (β-actina) no prazo de HPV-negativo (intervalo: 4 - 363 cópias /genoma) e as amostras de HPV-positivo (intervalo: 75-1096) foram semelhantes e bem acima do valor de corte (& gt; 0,1 cópias /genoma). Análise de qPCR resultados no número de cópias /genoma para HPV revelou diferenças notáveis em números de cópias entre HPV-negativo (gama: 0,0001 - 0,000004 cópias /genoma) e HPV-positivos (gama: 70 - 111), as quais foram facilmente distinguidas utilizando o cutoff valor (& gt; 0.001 cópias /genoma). Sem falsos positivos ou falsos negativos foram encontrados, que demonstram sensibilidade e especificidade suficientes para determinar a proporção de verdadeiros positivos (4/4 ou 100%) e negativos verdadeiros (147/151 ou 100%). Figura 2 Análise gráfica da qPCR HPV rastreio resultados. Trama de número de cópias /genoma para o gene housekeeping (β-actina) foi semelhante a partir de amostras de HPV-positivos (intervalo: 75-1096) e amostras de HPV-negativos (intervalo: 4 - 363 cópias /genoma). número de cópias /genoma utilizando qPCR foi significativamente acima do valor de corte (& gt; 0,1 cópias /genoma), confirmando as amostras HPV-positivos fez porto HPV16 ADN (intervalo: 70 - 111 cópias /genoma), mas não HPV18. Os valores para as amostras de HPV-negativos foram bem abaixo do valor de corte (intervalo: ,0003-0,000004 cópias /genoma)., Com exceção de três amostras (2867, 2854, 2792) que estavam abaixo do limite de detecção
Discussão
O objectivo principal deste estudo foi realizar uma triagem oral de adultos saudáveis normais em Nevada para o HPV de alto risco. Tentativas anteriores de esta instituição e no interior do estado para obter amostras à base de sangue para outros tipos de exames, tais como os níveis de chumbo (Pb), têm falhado devido à apreensão paciente e medo de coleta de sangue [63]. Para evitar estes problemas específicos, este estudo utilizou saliva não-invasiva coletadas para realizar esta análise. Estes esforços, em última análise permitiu a recolha e selecção de dezenas de amostras de pacientes; uma melhoria acentuada das taxas de participação do paciente sobre outra anterior, mas semelhante, as tentativas de coletar espécimes biológicos da população local. Os resultados deste estudo fornecem novos dados a partir de uma população de pacientes previamente rastreados e área geográfica para complementar a crescente corpus de informações sobre a prevalência de HPV oral entre adultos saudáveis.
Estes dados demonstram uma taxa de prevalência de alto risco HPV oral (2.6 %) praticamente o mesmo que os mais recentes estudos multinacionais de adultos saudáveis, sem câncer (3,1% a 5%) [61, 62]. Ao longo das últimas décadas, estudos internacionais que avaliaram a prevalência de HPV em adultos saudáveis, utilizando amostras de biópsia, que registraram amplamente as taxas de prevalência variáveis que variaram de 0 - 15% [47-51]. No entanto, outros relatórios publicados recentemente triagem para a infecção por HPV oral entre os adultos saudáveis, utilizando saliva e testes de lavagem oral, relataram taxas de prevalência globais que foram também perto desta gama (1,3%, 2,8%, 7%) [52-59].
além disso, embora os resultados deste estudo constatou infecção oral por HPV só entre quatro pacientes, que eram minoria e mulheres, a grande maioria dos pacientes do sexo feminino e das minorias neste estudo tiveram nenhuma evidência de infecção por HPV oral. Como um estudo piloto inicial, estes dados sugerem uma análise mais abrangente e aprofundada dessa população podem ser necessárias, como estudos epidemiológicos recentes têm demonstrado que as taxas de refúgio câncer de orofaringe aumentou consideravelmente entre as mulheres minoritárias em os EUA, apesar das taxas de declínio global [ ,,,0],66]. De modo mais geral, as taxas de câncer de orofaringe subiram entre alguns subgrupos minoritários [67], apesar de um declínio geral na população em geral em os EUA [23, 24, 68]. Isso pode ser explicado, em parte, por maiores taxas de consumo de tabaco e álcool, mas também pode ser atribuído a outros fatores, incluindo educação, renda, estresse, dieta, saúde alfabetização e exposição a agentes infecciosos orais [22, 25]. Este estudo piloto fornece informações preliminares sobre a prevalência de HPV oral e os resultados sugerem que uma investigação mais aprofundada pode ser justificado, particularmente à luz das disparidades de saúde que enfrentam as duas mulheres e minorias em Nevada e os EUA, em geral [23, 24].
este estudo também revelou a presença da estirpe HPV16 de alto risco, mas não de HPV18. Embora alguns relatórios sugeriram que a infecção oral por HPV pode envolver múltiplas estirpes de HPV [15-21, 69], este resultado não é diferente de outros resultados que sugerem HPV16 pode contribuir para a esmagadora maioria das amostras orais HPV-positivos [48, 49, 53, 57, 59]. É provável que a expansão deste projecto para incluir amostras maiores vai descobrir estirpes de HPV adicionais para fornecer mais extensas estimativas de infecção oral por HPV nesta população.
Este estudo teve várias limitações que devem ser consideradas. Em primeiro lugar, embora a natureza não invasiva do presente estudo era suficiente para o recrutamento e a triagem de um número significativo de pacientes, o tamanho total da amostra foi um tanto limitada em comparação com os estudos multinacionais maiores mencionados anteriormente [57, 58, 61]. O número dos adultos saudáveis rastreados para HPV oral no presente estudo piloto, no entanto, compara-se favoravelmente com um número de outros relatórios - com tamanhos que variam de exemplo 12-97 [20, 47-53]. Em segundo lugar, dados demográficos e comportamentais detalhados não foram designados como fundamental para os objetivos iniciais deste estudo piloto, no entanto, a inclusão de tabagismo e uso de tabaco, bem como informações mais detalhadas sobre outros comportamentos, habitação, educação, renda e outros indicadores socioeconômicos , bem como as práticas sexuais podem fornecer informações adicionais em futuras investigações [55, 58, 59, 70]. Por fim, o rastreio de estirpes adicionais de HPV de alto risco [71-75] e outros agentes infecciosos orais pode ser possível no futuro estudos com recursos mais significativos e pessoal.
Conclusões
Este estudo recrutou com sucesso pacientes e amostras de saliva selecionados para HPV de alto risco, confirmando HPV16, mas não HPV18, esteve presente em um pequeno subconjunto dos pacientes adultos saudáveis em um US população clínica-escola dental. Estes pacientes eram do sexo feminino e minoria. Muitos disparidades de saúde enfrentam mulheres e minorias em os EUA, e com alguma evidência sugerindo que as taxas de câncer de orofaringe de fumar e pode estar a aumentar nestes subgrupos populacionais, os resultados deste estudo podem ser de valor significativo aos outros dentários, profissionais médicos e de cuidados de saúde para promover uma compreensão da saúde e risco de doença bucal
abreviações
(HPV):.
papilomavírus humano
(US):
United Estados
(DNA): ácido desoxirribonucléico
(UNLV-SDM):
Universidade de Nevada, Las Vegas - Faculdade de Medicina Dentária
(PCR): reação em cadeia da polimerase
(GAPDH):
gliceraldeído-3- fosfato desidrogenase
(qPCR):
reação em cadeia da polimerase quantitativa
(pb):
par de bases
(nt):
nucleotídeo
(RCF):
força centrífuga relativa
( PBS):
tampão fosfato
(dNTP):
desoxirribonucleótido trifosfato
(dUTP):
2'-desoxiuridina trifosfato
(dTTP):.
desoxitimidina trifosfato
Declarações
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer da Universidade de Nevada, Reno (UNR) Faculdade de Medicina, a Escola de Ciências UNLV comunitários de Saúde e UNLV-SDM Departamento de Ciências Biomédicas e Instituto de Pesquisa para o fornecimento dos insumos e reagentes para este estudo piloto inicial. KK gostaria de agradecer a Laurel Pritchard, Kenneth Fernandez e Chandler Marrs para a sua assistência. 'Arquivos enviados originais para imagens
Abaixo estão os links para os autores'
Autores arquivos enviados originais para imagens. 'arquivo original para a figura 1 12903_2010_195_MOESM2_ESM.pdf Autores' 12903_2010_195_MOESM1_ESM.pdf Autores arquivo original para a figura 2 Conflito de interesses
Os autores declaram que não têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
KK, SW, AB e RW concebido, monitorado e coordenado o projeto experimental. RB, JC, JF, DM, e JM foram responsáveis por recrutar pacientes, consentimento informado, a recolha de amostras, e alguma análise biomédica. DT, KK, e SW realizada a extração de DNA, análise de PCR e qPCR. KK, SW e DT foram responsáveis pela análise dos dados, bem como a escrita e edição deste manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
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