acrílica da arte abstracta
Fundo
Dada a alta prevalência de candidíase oral e o número restrito de agentes antifúngicos disponíveis para controlar a infecção, este estudo investigou a in vitro
antifúngico actividade de vinagre de álcool em Candida spp
. e o seu efeito sobre as propriedades físicas das resinas acrílicas.
Métodos
testes para determinar a concentração inibitória mínima (MIC) e Concentração Fungicida Mínima (MFC) de vinagre de álcool (0,04 g /ml de ácido acético) e nistatina ( controlo) foram realizados. A atividade antifúngica de vinagre de álcool foi avaliado por meio de crescimento ensaios cinéticos microbianas e inibição de Candida albicans
adesão à resina acrílica em diferentes intervalos de tempo. rugosidade da superfície e cor da resina acrílica foram analisados usando um dispositivo medidor de rugosidade e analisador de cores.
Resultados
álcool vinagre mostrou MIC
75% e MFC 62,5% de 2,5 mg /ml, com fungicida partir de 120 min, diferindo de nistatina (p & lt; 0,0001), o que mostrou efeito fungistático. vinagre de álcool causou maior inibição de C. albicans
adesão à resina acrílica (p ≤ 0,001) em comparação com nistatina e não alterou os parâmetros de rugosidade e a cor do material.
Conclusão
vinagre de álcool mostrou propriedades antifúngicas contra Candida
cepas e não causou alterações físicas da resina acrílica.
Palavras-chave
Candidíase Candida albicans orais
ácido acético Dental Background prótese
Dado o aumento da expectativa de vida e maior acesso da população a serviços odontológicos, há uma maior prevalência de usuários de prótese devido à perda do dente significativa entre os idosos, tanto em países desenvolvidos ou em desenvolvimento [1,2].
associados com o uso de próteses dentárias, a ocorrência de infecções causadas por espécies de fungos, particularmente Candida
, é comum e principalmente relatada em indivíduos com má saúde geral e imunossupressão [3]. Estas infecções são chamados dentadura estomatite e pode ser clinicamente identificados com base nos diferentes graus de eritema presentes na mucosa subjacente à base de próteses parciais ou totais. Entre os fatores etiológicos mais comuns, são: má higiene bucal; dentaduras mal adaptadas; sistema imunológico enfraquecido; uso indiscriminado de antibióticos; e proliferação de Candida spp
. [4].
Um dos principais fatores que contribuem para a colonização de Candida spp
. reside na sua adaptabilidade a uma variedade de "habitat" de crescimento através da formação de comunidades microbianas em anexo a uma matriz extracelular, incluindo polissacáridos proteínas salivares. Candida
pode colonizar rapidamente a base de resina acrílica, proporcionando uma maior estabilidade para a infecção fúngica no hospedeiro [5].
Infecções Como fúngicas da cavidade oral provocada por Candida spp
. são superficiais, uso tópico de nistatina e miconazol foi recomendado. Nos casos de não resposta positiva a estes agentes terapêuticos, outras substâncias, tais como fluconazol e cetoconazol pode ser prescrita para uso sistémico [6,7]. No entanto, o uso indiscriminado de resultados antifúngicos convencionais para a selecção de estirpes resistentes, especialmente em pacientes imunossuprimidos e naqueles com doenças sistémicas graves [8]. Este facto justifica o desenvolvimento de novas terapias para o uso na prática clínica diária [9]. Também deve ser mencionado que muitos
Candida spp. são capazes de penetrar a resina acrílica utilizada no fabrico de dispositivos protéticos em profundidades variando de 1 a 2 m [10], realçando assim a necessidade de um produto que permite a remoção do biofilme sem prejudicar as propriedades mecânicas da resina. Vale a pena notar que entre as propriedades requeridas para os materiais utilizados no fabrico de próteses, os relacionados com a rugosidade, tensão de superfície, interacções electrostáticas e dureza são de importância clínica, uma vez que podem influenciar a formação de biofilme e de mudança de cor. rugosidade da superfície faz com que a aderência e retenção de C. albicans
, que é de particular importância para o início da estomatite [11].
Neste fundo, é a hipótese de que o álcool vinagre pode controlar e prevenir estomatite protética devido à sua acção desinfectante sobre a resina acrílica utilizada no fabrico de dentaduras. Um baixo potencial de hidrogénio levando a difusão de ácido acético e a sua possível interacção com as enzimas envolvidas na formação de ergosterol, o principal componente das membranas plasmáticas de fungos, pode explicar a actividade anti-microbiana conhecida de vinagre de álcool, especialmente anti-Candida
propriedades. Além disso, tem baixo custo e de fácil acesso [12,13]. Este
estudo teve como objetivo avaliar os efeitos in vitro em
antifúngicos sobre vinagre de álcool sobre Candida
spp., E para verificar seu efeito sobre as propriedades físicas da resina acrílica como a rugosidade da superfície e mudam de cor. Métodos
marca vinagre de álcool Minhoto® L281D lote (Ind. Reunidas Raymundo da Fonte SA, Paulista, PE, Brasil) foi usada como o medicamento de teste, contendo 4% de ácido acético (0,04 g /ml) na sua composição. O produto foi testado para a concentração inibitória mínima (MIC), A concentração fungicida mínima (MFC), a cinética de crescimento microbiano, inibição de Candida spp
. aderência à superfície da resina acrílica, e os efeitos sobre a rugosidade da superfície e parâmetros de cor. Nistatina (Sigma - Aldrich Brasil, São Paulo, SP, Brasil) foi usada como um controlo positivo. Durante os testes, controles de viabilidade levedura também foram realizadas
Foram utilizados os seguintes estirpes:. Candida albicans
ATCC 76.485, Candida albicans
LM 21, Candida albicans
MI03, Candida albicans
LM 615, Candida albicans
LM 13, Cândida tropicalis
, ATCC 13803, Candida tropicalis
LM 33 e Candida tropicalis
LM 70. As colónias foram suspensos em 5 ml de soro fisiológico estéril, 0,145 mol /L ( 0,85% de NaCl). A suspensão resultante foi colocada em um misturador de vórtice (Phoenix ®) durante 15 segundos, e a densidade celular foi ajustada utilizando um espectrofotómetro a escala de McFarland de 0,5 a um comprimento de onda de 530 nm. A actividade antimicrobiana
(MIC e MFC)
MIC foi determinada pela técnica de microdiluição usando microplacas de 96 poços [14]. Um total de 100 ul de 2-vezes concentrado Sabourand caldo de dextrose (SDB) (Difco Laboratories, Detroit, Mich., EUA) foi distribuído em cada cavidade, seguida por 100 ul da substância de ensaio (vinagre de álcool ou nistatina em concentrações iniciais de 40.000 ug /ml e 100 ug /ml, respectivamente). Uma alíquota de 100 ul foi recolhida a partir do primeiro poço e então dispensado para o seguinte, de modo a prosseguir com uma diluição em série de 2 vezes. Cerca de 10 ul de inoculo foram dispensados em todos os poços. Os testes foram realizados em triplicado e as placas foram incubadas a 35 ° C durante 48 horas. A CIM foi considerada como a mais baixa concentração capaz de inibir o crescimento visível das estirpes. A fim de confirmar a presença de microorganismos viáveis ou não viáveis, 10 ul de corante de TTC (cloreto de trifenil tetrazólio 2,3,5) foi utilizado, o que reflecte a actividade das enzimas desidrogenase envolvidos na respiração celular, manchando amostras vivas em [vermelho ,,,0],15]. Após 24 horas de incubação, foi realizada leitura visual.
A MFC foi determinada após a leitura da MIC, recolhendo alíquotas de 10 ul a partir das subculturas correspondentes a MIC, MICx2 e MICx4 e misturando-os a 100 ul de DRS em 96 poços microplacas. Após incubação durante 24 h a 35 ° C, a leitura visual foi realizada, considerando a formação de cachos de células no fundo dos poços [14]. Para maior clareza dos resultados, foram adicionados 10 ul de TTC, e MFC foi caracterizada como a concentração mais baixa do produto de teste capaz de inibir o crescimento das estirpes [14].
Cinética de crescimento microbiano
C. albicans
LM 615 foi selecionado por apresentar o melhor crescimento microbiano, enquanto a obtenção MIC e MFC. Para o ensaio, 0,5 ml da suspensão de levedura foi inoculada em 4,5 ml de SDB com a substância de teste (de vinagre de álcool ou nistatina) em concentrações ajustadas para MIC, MICx2 e MICx4. Em intervalos de tempo correspondentes a 0 (T0), 30 (T1), 60 (T2), 120 (T3) e 180 minutos (T4), 10 mL alíquotas foram coletadas a partir da suspensão e cultivadas em Sabourand Dextrose Agar (SDA) (Difco Laboratories, Detroit, Mich., EUA) placas. Após incubação a 35 ° C durante 24 h, o número de unidades formadoras de colónias (UFC) foram contadas. Os resultados são apresentados como curvas de morte microbiana.
Preparação de amostras de resina acrílica
A fim de verificar a inibição da adesão de fungos à resina acrílica, bem como alterações na rugosidade da superfície e cor, 78 espécimes circulares foram feitas de resina acrílica auto-polimerizado (Vip do flash ®, produtos Odontológicos VIPI, Pirassununga, São Paulo, Brasil), dimensionamento de 12 mm de diâmetro e 7 mm de espessura. Os espécimes foram submetidos a terminar com moedor de tungstênio (1508 Edenta AG, Haupistrasse, Suíça), e polimento com lixa carborundum de diferentes granulometrias (220, 330, 600 e 1200) e sentiu discos embutidos em pedra-pomes colar /água destilada, seguida por lavagem e esterilização.
a inibição da adesão de fungos à superfície da resina acrílica
Dezoito amostras foram colocadas em tubos de ensaio contendo 2,5 ml de SDB e 0,5 ml de suspensão de levedura (C. albicans
LM 615) a 35 ° C durante 48 h. Os espécimes foram divididos aleatoriamente em três grupos: GI (n = 6) - O controlo negativo (sem substância antifúngica, garantindo C. albicans
adesão à resina acrílica), GII (n = 6) - vinagre de álcool e GIII (n = 6) -. nistatina
quantidades suficientes de vinagre de álcool ou solução nistatina foram adicionados em tubos contendo suspensão SDB /de levedura em grupos GII e GIII, resultando em concentrações finais correspondentes a MIC, MICx2 e MICx4. Após o período de incubação, as amostras foram lavadas e colocadas em tubos contendo 5 ml de solução salina (NaCl 0,85%), e agitou-se durante 60 s. Em seguida, 10 ul da solução que foram cultivadas em placas de SDA, as quais foram incubadas a 35 ° C durante 48 h para leitura e contagem bacteriana, em triplicado.
Teste de mudanças na rugosidade da superfície e os parâmetros de cor da resina acrílica
nos grupos expostos ao efeito de vinagre de álcool, as concentrações correspondentes a MIC (n = 6), MIC × 2 (n = 6) e MIC × 4 (n = 6) foram usadas. Seis amostras foram expostas a nistatina e outros seis para nenhum agente antifúngico. Os espécimes foram marcados na região média, 1 mm para a direita e 1 mm para a esquerda, e submetido a um dispositivo medidor de rugosidade (SJ -201 Mitutayo - Japão, o parâmetro de rugosidade Ra: 0,8 cut-off
mm) para executar a medição inicial (t = 0) para os três pontos. rugosidade da superfície (Ra) foi estabelecida como os valores de f médios dos três pontos. As amostras foram imersas na solução durante 30, 60, 120 e 180 minutos, lavou-se com água destilada, secou-se em papel absorvente e submetidos a análise rugosimétrica.
Com a finalidade de medir as alterações de cor na resina acrílica, 30 espécimes foram aleatoriamente divididos em três grupos, como anteriormente mencionado. Nos grupos correspondentes ao vinagre de álcool e nistatina, as mesmas concentrações foram utilizadas como antes. As amostras foram expostas aos mesmos intervalos de tempo (0, 30, 60, 120 e 180 minutos). A análise de cor foi determinada por meio de um dispositivo analisador de cores (Modelo ACR-1023, Instrutherm Instrumentos de Medição Ltda, São Paulo, Brasil, monitores de cristal líquido de 59 mm x 34 mm; geometria de medição: 45 ° /0 °; faixa espectral 400-700 nm, sensor de cor de três fotos transmissores de cor vermelha, verde e azul), que utilizam o sistema RGB.
análise estatística
os dados foram registrados em um banco de dados em GraphPad Prism 2004. a atividade antifúngica foi avaliada por duas vias de análise de variância (ANOVA), seguida do pós-teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Para avaliar as alterações causadas pelo vinagre de álcool sobre a rugosidade da superfície e cor da resina acrílica, foram utilizados.
Resultados Os resultados CIM e CFM de vinagre de álcool contendo 0,04 g /ml Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn de ácido acético, e nistatina (controlo positivo) estão apresentados na Tabela 1. Todas as estirpes testadas mostraram-se sensíveis à acção de vinagre de álcool, com CIM 75% igual a 2500 ug /ml. C. tropicalis
ATCC 13803 e C. tropicalis
LM 33 foram ainda mais sensíveis ao vinagre de álcool, mostrando MIC de 1250 ug ml. No entanto, estas estirpes (25%) necessitaram de concentrações mais elevadas de produto de teste para estabelecer a actividade fungicida, com valor MFC de 10 mg /ml. As outras amostras (62,5%) apresentaram valores de MFC igual a 2500 ug /ml, a mesma que a MIC. Como a nistatina, todas as estirpes foram inibidas a uma concentração de 3,12 ug /ml, que foi utilizado como um controlo nos outros tests.Table uma MIC e MFC resultados de vinagre de álcool e nistatina em espécies de Candida
álcool vinagre
Nistatina
Cepas
MIC (mcg /mL)
MFC (mcg /mL)
MIC (ug /mL)
MFC (mcg /mL)
C. albicans
LM 21
2500
2500
3,12
6,25
C. albicans
MI03
2500
2500
3,12
12,5
C. albicans
LM 615
2500
5000
3,12
12,5
C. albicans
LM 13
2500
2500
3,12
3,12
C. albicans
ATCC 76.485
2500
2500
3,12
6,25
C. tropicalis
ATCC 13803
1500
10000
3,12
12,5
C. tropicalis
LM 33
1500
10000
3,12
3,12
C. tropicalis
LM 708
2500
2500
3,12
3,12
a Figura 1 mostra as curvas de morte microbiana na presença de vinagre de álcool em concentrações correspondentes à MIC MIC MIC × 2 × e 4 como uma função do tempo. Observou-se que para as concentrações referidas primeira, houve actividade fungistática de 0 a 180 minutos. No entanto, para MIC 4 ×, actividade fungistática do produto de teste foi detectada a partir de 0 a 120 minutos, seguido por efeitos fungicidas. O controlo positivo (nistatina) a MIC, MIC × 2 e MIC × 4 mostraram efeitos fungistático em todos os intervalos de tempo. Observou-se Figura 1 Microbial curva de morte versus tempo para o vinagre de álcool no MIC, MIC × 2 e MIC × 4 concentrações
diferença estatisticamente significativa entre o efeito do vinagre de álcool e nistatina (p & lt; 0,05)., e também em relação a o controlo negativo, representado pela ausência de agente antifúngico. Esta inferência pode ser verificado na figura 2, particularmente nos tempos 120 e 180 minutos, marcadamente o início da actividade fungicida de vinagre de álcool. Figura 2 morte microbiana contra
curva de tempo, mostrando a relação entre o vinagre de álcool (ácido acético) e nistatina, utilizado no MIC × 4, e o controlo (ausência de substância antifúngica) (2 - maneira ANOVA, p & lt; 0,0001, Turquia , p. & lt; 0,05)
a Figura 3 mostra os dados sobre a eficácia de vinagre de álcool na inibição da adesão de C. albicans
LM 615 para amostras de resinas acrílicas, evidenciando a acção do ácido acético e nistatina (p & lt; 0,05). O anterior era capaz de reduzir a adesão de microrganismos no MIC MIC e 2 ×, e impedi-lo completamente do MIC × 4. A figura 3 teste de aderência e contando CFU após a acção de vinagre de álcool, nistatina e controlo (ausência de substância antifúngica).
a rugosidade da superfície análise (Ra) não mostrou nenhuma mudança significativa (maior do que 0,2 uM) para as amostras expostas ao vinagre de álcool (Tabela 2) .table 2 rugosidade de superfície (Ra) em uM das amostras submetidas à acção de vinagre de álcool ao longo do tempo
Tempo (min)
álcool vinagre
Nistatina
Controle
MIC
MIC × 2
MIC × 4
0
0.16
0.14
0.11
0.11
0.09
30
0.17
0.13
0.12
0.77
0.11
60
0.16
0.15
0.12
1.1
0.11
120
0.15
0.14
0.16
1.2
0.09
180
0.16
0.13
0.16
1.2
0.1
Não se observou qualquer diferença significativa entre os grupos (P & gt; 0,05 - Kruskal Wallis).
No que diz respeito a possíveis alterações na cor, os resultados indicaram que o álcool vinagre não afectou a cor das amostras expostas a intervalos de tempo de 0 a 180 minutos, a diferentes concentrações, como pode ser visto na Tabela 3 Cor 3.Table (valores expressos na escala RGB) das amostras após a exposição à acção de vinagre de álcool
tempo de exposição (min)
Nistatina
0
60
120
180
álcool vinagre MIC
2 2 4 1 6 9 (a) 1 4 4
(a)
(a)
(a)
vinagre de álcool MIC x Página 2
(a)
(a)
(a)
(a)
álcool MIC vinagre x4
(a)
(a)
(a)
(a)
Nystatin
(a)
(a)
(a)
(a)
Control
(a)
(a)
(a)
(a)
(A) Representa valores idênticos.
Discussão
Os resultados de nosso estudo indicam que o álcool vinagre tem efeitos fungistáticos e fungicidas sobre as cepas testadas de Candida
. Estudos anteriores já tiver verificado a actividade antifúngica dos vinagres [16], embora os valores de MIC e MFC não são expressos de acordo com a técnica de microdiluição, que é de baixo custo e método rápido que fornece resultados reprodutíveis e requer pequenas quantidades de suspensão e cultura microbiana meios [14,17,18].
o mecanismo de acção do ácido acético, o componente principal de vinagre de álcool, está provavelmente relacionada com um potencial reduzido de hidrogénio, facilitando, assim, a difusão do ácido através da membrana plasmática das células fúngicas [ ,,,0],18]. A literatura tem relatado também efeito inibidor do ácido acético na 14α-lanosterol-desmetilase, uma enzima importante envolvida na formação de ergosterol, que é essencial para a manutenção da integridade da membrana plasmática fúngica [19,20].
À nistatina , os valores de MIC e MFC obtidos para todas as estirpes testadas foram de acordo com a literatura [21]. A nistatina foi escolhida como controlo porque é um antifúngico padrão amplamente utilizado para o tratamento tópico de infecções fúngicas na cavidade oral [22]. O seu mecanismo de acção está relacionada com a inibição das enzimas envolvidas na formação do ergosterol e, consequentemente, a permeabilidade da membrana celular [23].
Cinética de crescimento microbiano é uma variável importante para avaliar a actividade fungicida ou fungistático de uma substância específica , bem como para determinar a influência do tempo de exposição no processo de morte de células [24]. A cinética microbiana de vinagre de álcool apresentaram atividade fungistática no MIC e MICx2 para o intervalo de tempo entre 0 e 120 minutos, ea partir desse momento, não havia atividade fungicida em MICx4 (10 mg ml). actividade fungicida é considerado como tal, quando o produto é capaz de reduzir três unidades logarítmicas de base 10, e quando estas alterações são consistentes com o comportamento fungistática.
reconhecida como um processo dinâmico utilizados para avaliar novos agentes antimicrobianos, a morte microbiana contra curva de tempo
não foi mencionado em estudos anteriores envolvendo vinagre de álcool [25], o que dificulta a padronização dos resultados ea comparação entre eles. Estes estudos mostraram tempos de acção que parecem ter sido adoptada aleatoriamente, variando de 10 minutos a oito horas, sem qualquer referência metodológica base na cinética de microbianas [17,26].
Usado como um antifúngico padrão, nistatina, também foi testado quanto a morte microbiana versus a curva do tempo
. Estudos anteriores têm demonstrado actividade fungistática da nistatina [23,27], corroborando os resultados do presente estudo, apesar de actividade fungicida podem ser vistos em concentrações mais elevadas.
Durante a selecção de um agente desinfectante, deve-se avaliar a sua compatibilidade com a via oral tecidos, bem como com os materiais que compõem a base de próteses dentárias [28]. A adesão de Cândida
spp. à superfície da resina acrílica é normalmente o primeiro passo na colonização de tecidos que entram em contacto com a dentadura removível, e tende a formar um biofilme frequentemente resistentes à terapia antifúngica convencional [29]. C. albicans
espécies são descritos como aqueles com a maior capacidade para aderir a células de mucosa oral e para a superfície da resina acrílica [30], que é por C. albicans
foi a espécie para determinar MIC e MFC seleccionados . Estudos anteriores mostraram que uma solução de álcool de vinagre não diluído foi capaz de inibir a adesão de microrganismos, incluindo C. albicans,
a resina acrílica [31], que também foi observado no presente estudo. No entanto, outras investigações têm demonstrado que o vinagre de álcool não foi capaz de inibir a adesão de C. albicans a células
resina acrílica [32].
Não ocorreram alterações significativas foram observadas na rugosidade média da superfície do material, a confirmação anterior resultados [31,33]. Alterações na rugosidade superficial identificados após a exposição a diferentes concentrações de vinagre de álcool não exceda o valor limiar de 0,2 m, acima da qual se espera a influência da rugosidade da superfície sobre a adesão de microorganismos, uma vez que as irregularidades da superfície servir como um nicho microbiológica, protegendo agentes infecciosos a ação mecânica da escovação [34].
Este estudo não apresentaram alterações de cor na resina acrílica após um período de 180 minutos de exposição ao vinagre de álcool e nistatina, confirmando resultados anteriores [35]. A cor original de uma resina pode ser alterada pela ingestão de grandes quantidades de corantes, a absorção de líquido e imersão em soluções desinfectantes que influenciam a rugosidade da superfície, danificando a estética do material [36]. Um estudo utilizando vinagres apresentaram alteração de cor em resina acrílica, após um intervalo de 12 a 30 dias de imersão [31]. Mesmo considerando a importância de conhecer o efeito da exposição prolongada de resina acrílica para a acção de desinfectantes, tempos mais curtos, tais como os utilizados no presente estudo tem de ser utilizado, uma vez que eles simulam o tempo pelo qual os dispositivos protéticos estão fora da cavidade oral. Estudos anteriores avaliaram o efeito de soluções desinfectantes sobre as propriedades físicas da resina acrílica. Etanol, em concentrações variadas, pode produzir efeitos sobre a rugosidade e cor [33]. A rugosidade da superfície da resina acrílica foi superior com a utilização de 3,8% de perborato de sódio e inferior com 2% de gluconato de clorexidina [31].
Os resultados deste teste mostraram evidências científicas sobre o efeito antifúngico significativo de vinagre de álcool, contra Cândida
espécies, bem como ausência de influência negativa sobre a resina acrílica. Estes resultados suportam a possível utilização do produto, que deve passar por mais estudos laboratorias investigando seus efeitos sobre a formação de biofilme multi-espécies, microdureza de resina acrílica; ensaios clínicos também devem ser considerados para determinar a segurança, tolerabilidade e eficácia clínica desta substância.
Conclusão
álcool vinagre mostrou em
actividade in vitro contra Candida
cepas envolvidas com estomatite protética, com ação fungicida após 120 minutos de exposição a uma concentração de 10 mg /ml. Foi também capaz de impedir a adesão de C. albicans
a resina acrílica e não causou alterações na rugosidade da superfície e a cor da resina acrílica após duas horas de exposição.
Declarações
Agradecimentos
Agradecemos ao Programa de Pós-Graduação em Odontologia da Universidade Federal da Paraíba, pelo apoio financeiro para esta pesquisa.
Conflito de interesses
os autores declaram que não têm interesses conflitantes. contribuições
dos autores
RDC concebida do estudo, e participou de sua elaboração e coordenação e ajudou a redigir o manuscrito. ACLGM realizado o ensaio microbiológico e o ensaio de mudança na superfície da resina acrílica. EOL participou no desenho do estudo e coordenação e ajudou a realizou o ensaio microbiológico. AUDB participou no desenho do estudo e realizada a análise estatística. JAO participaram na preparação de espécimes em resina acrílica e ajudou a redigir o manuscrito. ALC realizado o teste de alteração de cor na amostra de resina acrílica. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
