Abstract
A fim de prever o prognóstico a longo prazo e definir as modalidades de tratamento individuais para pacientes com carcinoma de células escamosas oral (CCEO), biomarcadores tumorais mais confiáveis são necessários durante o período de pré-tratamento workup. O presente estudo teve por objetivo identificar tumores imunohistoquímica marcadores prognósticos mais fiáveis nas amostras pré-tratamento de biópsia de pacientes com CEB.
Métodos
Nós selecionados 57 pacientes que foram diagnosticados com CCEO primária através da análise histopatológica. espécimes pré-tratamento de biópsia foram analisadas imuno-histoquimicamente para o factor de transcrição NANOG, cancro marcador de células estaminais CD44, e a proteína de tumor mutante 53 (p53 mutante). Os padrões de positividade foram avaliados quanto à sua associação com as características clinicopatológicas de CEO e taxas de sobrevida global.
Resultado
estágio do tumor tarde, cervical metastático positivo, e diferenciação de alto grau foram associados com taxas de sobrevivência significativamente mais pobres. maior expressão da NANOG e positividade mutante p53 foram significativamente associados com clinicamente tumores em estágio final, metástase positiva nó pescoço, histologicamente tumores de alto grau, e taxas de sobrevida global pobres. Epidermóide estudados com co-detecção forte de NANOG e p53 mutante estavam ligados a taxas de sobrevivência significativamente mais baixos do que aqueles com tanto a expressão NANOG fraco e negatividade p53. aumento da expressão de CD44 teve uma correlação limitada com características clínico-patológicas desfavoráveis.
Conclusão
alta expressão de NANOG e expressão positiva da p53 mutante nas amostras pré-tratamento de biópsia de pacientes com CEB foram associados com taxas de sobrevivência pobres e características clínico-patológicas desfavoráveis. Estes resultados demonstram que NANOG, mutante p53, e CD44 podem ser usados como marcadores imunohistoquímicos em amostras pré-tratamento os de CEO. Em particular, a análise de co-expressão de NANOG e p53 mutante deve ser feita altamente disponível como uma ferramenta para o prognóstico e selecionando modalidades de tratamento individuais.
Palavras-chave
Oral de carcinoma de células escamosas Os marcadores tumorais Imunohistoquímica NANOG mutante p53 fundo
carcinoma de células escamosas oral (CCEO) é um tumor maligno comum da região de cabeça e pescoço; no entanto, os pacientes com CEB têm uma taxa de sobrevivência de 5 anos inferior a 50%. Os sistemas de estadiamento TNM e gradação histopatológica tradicionais não permitem que os médicos a prever com precisão agressividade ou selecione modalidades de tratamento de um tumor numa base individual [1]. Portanto, a investigação está em curso para investigar tumorais marcadores prognósticos mais eficazes e definitivas para os pacientes com CEB [2, 3]. Como as células-tronco do câncer (CSC) hipótese tornou-se uma das teorias predominantes que explicam a capacidade de iniciação do tumor e heterogeneidade das células tumorais, marcadores de células diferentes estaminais têm sido estudados para determinar a sua correlação com as características tumorais clínicas e prognóstico a longo prazo [4 -8].
a transcrição precoce fatores NANOG, OCT4, SOX2 e, que desempenham papéis fundamentais na manutenção da capacidade pluripotência e auto-renovação em células-tronco embrionárias e adultas, também foram relatados como fatores-chave na regulação CSCs de carcinoma de cabeça e pescoço de células escamosas (CECP) [7, 8]. Alta expressão de NANOG e OCT4 foi positivamente correlacionada com carcinomas de alto grau histologicamente e clinicamente mau prognóstico [7-10]. CD44 foi o primeiro marcador CSC descrito em um tumor maligno sólido [5], e uma alta freqüência de células positivas CD44 em HNSCC correlaciona fortemente com recorrência e agressividade do tumor [11]. proteína tumoral 53 (p53) é considerada um biomarcador tumor tradicional no carcinoma espinocelular (CEC); No entanto, a sua utilidade como um indicador de prognóstico permanece incerto [1]. proteína p53 do tipo selvagem é apenas detectável em tecidos normais por causa da sua curta meia-vida de aproximadamente 20 min. [12] No entanto, o gene supressor de tumores p53 é mutado em aproximadamente 40-60% dos casos de CEs, e este mutante p53 desempenha um papel importante no desenvolvimento e progressão do tumor [12, 13]. Curiosamente, a proteína p53 mutante é geralmente detectáveis através de imuno-histoquímica (IHQ) [14, 15].
A fim de prever o prognóstico a longo prazo e definir as modalidades de tratamento individuais para pacientes com CEB, biomarcadores tumorais mais confiáveis (incluindo marcadores prognósticos de imuno-histoquímica) são necessários durante o período de pré-tratamento workup. O presente estudo teve como objetivo investigar a expressão de vários marcadores tumorais via IHC, incluindo células-tronco e biomarcadores relacionados ao tumor, para identificar marcadores prognósticos mais confiáveis em amostras de biópsia de CCEO recolhidos antes do tratamento do câncer. No presente estudo, observou-se uma correlação positiva entre as características clinicopatológicas de carcinoma epidermóide estudados e os padrões de expressão imuno-histoquímica de NANOG, p53 mutante humana e CD44. Além disso, as intensidades imunocoramento estas proteínas marcadoras (NANOG e p53 mutante) foram positivamente correlacionadas com as taxas de sobrevida global de pacientes com CEB.
Métodos
Pacientes
Entre 2004 e 2014, um total de 92 pacientes eram diagnosticado com CEB no Departamento de Cirurgia Bucomaxilofacial do Hospital da Universidade Nacional Gyeongsang (GNUH) com base na análise histopatológica das amostras de biópsia recolhidos antes do tratamento do câncer. Entre eles, 57 pacientes com CEB primária; foram selecionados para o presente estudo (excluindo pacientes com metastático e câncer recorrentes 36 homens e 21 mulheres). Os critérios de inclusão foram pacientes que concordaram em participar do estudo, concluído pelo menos 3 meses de follow-up depois de submetidos a biópsia pré-tratamento, e teve volume de tecido suficiente na amostra pré-tratamento de biópsia para executar coloração imuno-histoquímica. Os prontuários dos pacientes selecionados foram analisados retrospectivamente. O consentimento informado para o uso de suas amostras de tecido foi obtido de todos os pacientes, e este estudo foi aprovado pela Comissão de Ética para a Investigação Clínica na GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002). O IHC foi realizada nas amostras de pré-tratamento de biópsia dos 57 pacientes, que foram obtidos a partir da periferia da margem do tumor com um comprimento mínimo de 5 mm e uma largura mínima e 2 mm de profundidade, para analisar a relação entre os padrões de expressão de proteína e as características tumorais clinicopatológicas . A duração do follow-up para os 57 pacientes variou de 3 a 127 meses, com média de 35,9 meses. Os pacientes foram avaliados clinicamente de acordo com o sistema TNM de classificação desenvolvido pela American Joint Committee on Cancer (7
ª edição, 2010) para o estágio do tumor e cervical metastático, e as taxas de sobrevida global também foram determinados. biópsias foram histologicamente classificados, e os tumores foram classificados como bem, moderadamente ou pouco diferenciados de acordo com a classificação da OMS de tumores [16].
análise imuno-histoquímica de amostras de biópsia
amostras de biópsia foram fixados em formalina a 10% tamponada neutra durante 24 h, incorporado em um bloco de parafina, cortados em secções de 4 um e montadas em lâminas de microscópio SuperfrostPlus (Fisher Scientific, Rochester, NY, EUA). As secções foram mantidas à temperatura ambiente durante 12 h. Após a hidratação, IHC para NANOG, CD44 e p53 mutante foi realizada utilizando um imunohistoquímica automatizado (benchmark XT, Ventana Medical System Inc., Tucson, AZ, EUA), e visualização foi realizada utilizando o kit Ultraview DAB (Ventana Medical System Inc. ) de acordo com o protocolo do fabricante. Para a imunocoloração das três proteínas marcadoras, utilizou-se anticorpos monoclonais de coelho (Abcam ™, Cambridge, Reino Unido). Os números de taxa de diluição e do lote dos anticorpos primários encontram-se resumidos na Tabela 1. Resumidamente, os cortes foram desparafinados usando solução EZ Prep; em seguida, padrão CC1 (tampão de pH 8,4 continha Tris /borato /EDTA) foi aplicado para a recuperação de antigénio de 60 minutos a 100 ° C. As lâminas foram incubadas a 37 ° C durante 4 min, com um inibidor de DAB (3% 2 H 2O) para bloquear a actividade da peroxidase endógena. Em seguida, as lâminas foram incubadas com o anticorpo primário a 37 ° C durante 32 min, seguido de incubação com o anticorpo secundário (Universal multímero HRP) durante 8 min a 37 ° C. As lâminas foram tratadas com DAB + H 2O 2 substrato durante 8 minutos seguido pela hematoxilina e reagente II anilagem a 37 ° C durante contracoloração nuclear. Para controlos negativos, apenas a incubação com o anticorpo secundário foi realizada, omitindo qualquer incubação com um anticorpo primário, em secções de as mesmas amostras sob as mesmas condições. Além disso, os tecidos embrionários da bexiga e carcinoma da pele urinário humano foram utilizadas como controlos positivos para NANOG, CD44 e p53 mutante, respectivamente, de acordo com uma recommendations.Table Resumo do fabricante do anticorpo de características clinicopatológicas de carcinoma epidermóide estudados e IHC padrões de NANOG, CD44 expressão e p53 mutante
NANOG
CD44
mutante p53
total No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. do cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor Sites
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Cheek
4
0
3
1
2
2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Tongue
9
0
2
7
2
5
2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor estágio
I + II
24
6
4
14
10
9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck nó
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo grau
Bem
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
taxa de diluição
1: 250
1: 100
1: 200
Fonte (Lot No.)
Abcam ™ (ab109250)
Abcam ™ (ab51037)
Abcam ™ (ab32049)
Abreviaturas: FOM
andar boca, N0
nó pescoço negativo, N +
nó pescoço positivo, CCEO bem
bem diferenciado, Mod + Pobre
moderadamente e pouco diferenciados CEs
fatias de tecido foram semi-quantitativamente analisadas para detectar anticorpos deposição nos componentes celulares por dois patologistas que foram cegados para as informações do estudo. Com base em um método relatado anteriormente com a modificação [10], a imunocoloração positiva de NANOG e CD44 foi marcado pela combinação de intensidade (0, coloração negativa; 1, coloração fraca; 2, coloração moderada; e 3, coloração forte) e a percentagem células de tumor coradas positivamente em campos de alta potência (0, negativa; 1, & lt; 25%; 2, 25-50%, 3, 51-75%; e 4, & gt; 75%). A soma da intensidade de coloração e a percentagem de contagens de células tumorais positivas foi classificada como se segue: +++ (forte, 07/06); ++ (Moderada, 4-5); + (Fraco, 2-3); e - (negativo, 0-1). O padrão de p53 mutante expressão foi também registados com a combinação da intensidade da coloração e a percentagem de células de tumor positivas e simplesmente classificadas como + para positiva (soma da pontuação superior a 3) e - para negativo (2 ou menos; expressão negativa ou fraco expressão em menos de 25% das células), de acordo com relatórios anteriores [10, 17, 18]. Pelo menos três campos diferentes sob alta ampliação (× 400) por lâmina foram analisados para a imunocoloração intensidade. Um resumo dos resultados de coloração imuno-histoquímica pode ser encontrada na Tabela 1.
análise estatística e análise de sobrevida global
A relação entre as intensidades de expressão de NANOG, p53 mutante, e CD44 em amostras de CCEO foi avaliada estatisticamente usando o qui quadrado teste. Da mesma forma, a correlação entre os padrões de expressão de proteínas e características clínico-patológicas de CEO, incluindo o estágio do tumor, cervical metastático e grau histológico, foi também analisada pelo teste do qui-quadrado. A análise de sobrevida global foi realizado pelo método de Kaplan-Meier, e os dados foram comparados usando um teste de log-rank para as 57 amostras de CCEO. Primeiro, a análise de sobrevivência global foi realizada em termos da modalidade de tratamento, bem como características clinicopatológicas tumorais, incluindo a fase do tumor, cervical metastático, e grau histológico (Fig. 5a-d). No presente estudo, os pacientes foram divididos de acordo com as modalidades de tratamento em três grupos: apenas a cirurgia (Surg), a cirurgia combinada com radioterapia adjuvante (Surg + RT, incluindo quimioradioterapia concomitante) e radioterapia somente (RT). A maioria dos pacientes no grupo de RT foi submetido à radioterapia paliativa, porque eles se recusaram a se submeter à cirurgia ou seus tumores foram inoperável. Em segundo lugar, a análise de sobrevivência foi conduzido em termos das intensidades de imunocoloração das NANOG, o mutante p53 e CD44 nas amostras de pré-tratamento de biópsia (Fig. 5e-H). sobrevida univariada e multivariada foram realizadas utilizando um modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox. Todas as análises foram realizadas com o software IBM SPSS Statistics (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA). Os casos foram censurados na data de qualquer morte do paciente ou o último follow-up. Os resultados foram considerados significativos para p Art & lt; 0,05, e estas diferenças foram assinalados com um asterisco ou letras diferentes.
Resultados da informação dos pacientes selecionados
Um total de 57 pacientes com CEB constituído por 36 homens e 21 mulheres foram incluídas no estudo. A idade variou 17-90 anos (média de 65,4 ± 13,9 anos). O local da CEB nos pacientes incluídos na gengiva (27 casos), palato (10 casos), língua (9 casos), assoalho da boca (7 casos), ea bochecha (4 casos) (Tabela 1). Os doentes foram divididos de acordo com a modalidade de tratamento como se segue: 15 pacientes no grupo Surg, 22 pacientes no grupo Surg + RT, e 20 pacientes no grupo de RT. A média de seguimento em todos os pacientes foi de 35,9 meses; Enquanto isso, 24 pacientes (19, 4 e 1 paciente na RT, Surg + RT, e os grupos de Surg, respectivamente) morreu após uma média de 18,4 meses, e 33 pacientes sobreviveram mais de um período de acompanhamento médio de 48,7 meses. Em todos os casos de cirurgia, as margens de ressecção do tumor foram definidas como pelo menos 2 cm, e o campo de ressecção foi confirmado para ser utilizando secções de biópsia congelados livre de tumor.
Padrões de expressão de NANOG, p53 mutante, e CD44 em CCEO biópsia pré-tratamento espécimes
NANOG foi detectada principalmente nos núcleos de células CEs, mas alguma expressão NANOG foi detectada no citoplasma das células cancerosas. mutante p53 foi localizada nos núcleos de células cancerosas, ao passo que CD44 foi detectada na membrana celular de células de CEs (Fig. 1). O número de células positivas e as intensidades de expressão foram geralmente maior no carcinoma epidermóide estudados de alto grau (moderadamente ou pouco diferenciados) do que em tumores de baixo grau (bem diferenciados) (Figs. 1 e 2). Dos 57 espécimes de CCEO, a expressão de NANOG era forte em 21 espécimes, moderada em 18 espécimes, e fraco ou negativo, em 18 espécimes. expressão moderada, fraca e negativa de CD44 foi observada em 28, 21 e 8 espécimes de CCEO, respectivamente. Além disso, 34 amostras foram positivas para o p53 mutante, enquanto que 23 amostras foram negativas (Tabela 1). FIG. Uma coloração imuno-histoquímica de NANOG, o mutante p53 e CD44 em epidermóide estudados. um secções em série de espécimes de CCEO moderadamente diferenciados mostram expressão moderada de NANOG e CD44 e expressão positiva da p53 mutante. b Em campos de maior ampliação de secções em série, NANOG é detectada principalmente nos núcleos, mas também é expressa no citoplasma de algumas células tumorais. p53 mutante for detectado nos núcleos das células do tumor, enquanto que CD44 está localizada nas membranas de células cancerosas. As setas indicam os locais de co-expressão de NANOG, o mutante p53 e CD44 em epidermóide estudados. Barra de escala = 50 mm
Fig. 2 A imunocoloração de poço (um & amp; b) e (c) pobremente diferenciadas epidermóide estudados. a No cortes seriados, a expressão negativa de NANOG, p53 mutante, e CD44 é detectado em uma amostra de CEO bem diferenciado (* indica tecido canceroso). b Em um outro caso de CEB bem diferenciado, NANOG e p53 mutante estão quase negativa, visto em menos do que 25% de células positivas, enquanto que CD44 está fracamente detectada na membrana de células de cancro (setas). c Em uma amostra de CCEO pouco diferenciados, maior expressão da NANOG, p53 mutante, e CD44 é detectado. As setas indicam co-localização das três proteínas marcadoras. Barra de escala = 50 mm
foram observadas relações directas entre as intensidades de NANOG, p53 mutante, e CD44 expressão (Fig. 3a). Tumores com forte expressão de NANOG também freqüentemente exibiu expressão positiva mutante p53 (p
= 0,002) e expressão de CD44 aumentada (p Art & lt; 0,001). Da mesma forma, os tumores com expressão de p53 mutante positivo apresentaram expressão aumentada de CD44 (p
& lt; 0,001) (Fig. 3a). Em alguns casos, a co-expressão de NANOG, o mutante p53 e CD44 foi detectada em secções em série das mesmas amostras de CEs, indicando que algumas células cancerosas apresentam a co-expressão destas três proteínas marcadoras. Curiosamente, a co-expressão de todas as três proteínas foi observada mais frequentemente em moderadamente ou pouco diferenciados epidermóide estudados (Figs. 1B e 2C). FIG. 3 Correlação dos padrões de expressão de NANOG, p53 mutante, e CD44 e com o grau histológico de carcinoma epidermóide estudados. a tumores com a expressão aumentada de NANOG mostrar uma maior frequência de positividade mutante p53 (p
= 0,002) e expressão de CD44 aumentada (p Art & lt; 0,001). Da mesma forma, carcinoma epidermóide estudados com expressão positiva da p53 mutante apresentam maior expressão de CD44 (p
& lt; 0,001). b expressão forte ou moderada da NANOG é significativamente relacionada com a histopatologicamente epidermóide estudados de alto grau (p Restaurant & lt; 0,001); No entanto, a expressão fraca ou negativa de NANOG correlaciona com carcinoma bem diferenciado (p = 0,018
). Além disso, a expressão da p53 mutante positivo é significativamente associado com carcinoma de alto grau (p Art & lt; 0,001). Da mesma forma, a expressão de CD44 aumentada está associada com tumores de alto grau, mas não foi observada significância estatística (p = 0,058
). Os dados representam o número de casos com expressão positiva de cada proteína, e um asterisco (*) indica diferenças significativas (p Art & lt; 0,05). [Abreviaturas: NANOG (++ /+++), expressão forte ou moderada de NANOG; NANOG (+/-), expressão fraca ou negativa de NANOG; p53 (+), expressão positiva da p53 mutante; p53 (-), expressão negativa da p53 mutante; CD44 (++), mais do que a expressão de CD44 moderada; CD44 (+), uma expressão fraca de CD44; CD44 (-), expressão negativa de CD44; Bem, carcinoma epidermóide estudados bem diferenciados; Mod + Pobre, moderadamente e pouco diferenciados epidermóide estudados]
associação entre características do tumor clínicas e os padrões de NANOG expressão, p53 mutante, e CD44
forte expressão de NANOG foi significativamente correlacionada com carcinoma epidermóide estudados histologicamente de alto grau (p
& lt; 0,001), enquanto que a expressão fraca ou negativa de NANOG ocorreu predominantemente carcinomas em bem diferenciados (p
= 0,018). Da mesma forma, a expressão da p53 mutante positivo foi significativamente associada com carcinomas de alto grau (p Restaurant & lt; 0,001) (Fig 3b.). tumores de alto grau apresentaram maior expressão de CD44, mas esse achado não foi estatisticamente significativa (Fig. 3b). Na avaliação da relação entre a expressão da proteína e estágio do tumor, forte e expressão moderada de NANOG exibido associações diretas com tumores em estágio avançado (estágio III e IV; p Restaurant & lt; 0,05), enquanto que a expressão fraca de NANOG estava diretamente associado com tumores em estágio inicial (fase I e II; p
= 0,018) (Fig 4a.). Positivo expressão da p53 mutante foi frequentemente observada em tumores em estágio final (p
= 0,049). Da mesma forma, maior expressão de CD44 foi frequentemente observada em tumores em estágio final, mas a diferença não foi estatisticamente significativa (Fig. 4a). Na análise do pescoço metástase, expressão fraca ou negativa de NANOG foi significativamente relacionado com metástase no pescoço negativo em carcinoma epidermóide estudados (p
= 0,005) (Fig. 4b). Da mesma forma, expressão negativa da p53 mutante (p
= 0,007) e fraca expressão de CD44 (p
= 0,049) foram significativamente relacionados com uma maior frequência de metástase no pescoço negativo (Fig. 4b). FIG. 4 Correlação de estágio do tumor ou cervical metastático e os padrões imunocoramento NANOG, p53 mutante, e CD44. uma expressão forte ou moderada da NANOG está diretamente associado com tumores em estágio final, enquanto a expressão fraca ou negativa de NANOG está diretamente relacionada ao carcinoma em estágio inicial (p Art & lt; 0,05). A expressão positiva da p53 mutante também é significativamente associada com tumores em estágio final (p
= 0,039). maior expressão de CD44 é frequentemente associado com tumores em estágio final, mas não foi observada significância estatística (p Art & gt; 0,05). b Tumores com expressão fraca ou negativa de NANOG (p
= 0,004), expressão negativa da p53 mutante (p
= 0,006), e fraca expressão de CD44 (p = 0,049
) mostram uma frequência significativamente maior de metástase no pescoço negativo. Os níveis de expressão mais elevados de três proteínas não estão associadas a metástase pescoço (p
& gt; 0,05). Os dados representam o número de casos com expressão positiva de cada proteína, e um asterisco (*) indica uma diferença significativa (p
& lt; 0,05). [Abreviaturas: I + II, estágio do tumor I & amp; II; III + IV, o estágio do tumor III & amp; IV; N0, negativo metástase no pescoço; N +, cervical metastático positivo]
análise de sobrevida
A análise das taxas de sobrevida global dos pacientes em termos de características tumorais clinicopatológicas revelou alguns resultados significativos (Fig. 5a-d). Pacientes com fase final de CCEO (estágio III e IV) tiveram uma taxa de sobrevivência significativamente menor do que aqueles com tumores em estágio inicial (fase I e II) (p
& lt; 0,05, Fig 5a.). Os pacientes com CEB e metástase no pescoço positivo apresentado uma taxa de sobrevivência significativamente mais pobres do que aqueles com metástase no pescoço negativo (p Art & lt; 0,01, Fig 5b.). Além disso, os pacientes com diagnóstico histopatológico de alto grau de CCEO teve um pior prognóstico do que aqueles com tumores bem diferenciados (p Restaurant & lt; 0,01, Fig 5c.). Em termos da modalidade de tratamento, o grupo de RT apresentaram uma taxa de sobrevivência significativamente mais pobre do que os grupos Surg e Surg + RT (p
& lt; 0,01, Figura 5D.). FIG. 5 A taxa de sobrevida global de pacientes com tumores de acordo com características clinicopatológicas tumorais, modalidade de tratamento e padrões imunocoramento NANOG, p53 mutante, e CD44. a Pacientes com tumores em estágio avançado (estágio III & amp; IV) apresentam taxas significativamente mais pobres sobrevivência (p
& lt; 0,05). b-D A associação positiva entre a taxa de sobrevida global de pacientes com tumores e grau tumoral histopatológico, metástase no pescoço e modalidade de tratamento é observado. O grupo bem diferenciado CCEO, grupo de nós pescoço negativo e show do grupo tratamento cirúrgico significativamente melhor as taxas de sobrevivência a longo prazo do que os grupos opostos correspondentes (p Restaurant & lt; 0,01). e expressão aumentada de NANOG está associada a uma taxa de sobrevivência pobres; Em particular, pacientes com expressão forte ou moderada da NANOG mostram as taxas de sobrevivência significativamente mais baixos do que aqueles com expressão NANOG fraco ou negativo (p
& lt; 0,01). f Os pacientes com p53 mutante (+) - tumores que expressam mostrar uma menor taxa de sobrevivência do que aqueles com tumores negativos para o mutante p53 (-) (p
& lt; 0,01). g avançado expressão de CD44 tende a se correlacionar com as taxas de sobrevivência pobres, mas não houve significância estatística (p Art & gt; 0,05). h epidermóide estudados com co-expressão de NANOG reforçada e p53 mutante [NANOG (++) /p53 (+)] correlacionam-se com uma taxa de sobrevivência global significativamente mais baixo do que aqueles com NANOG fraco e negatividade p53 [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p
= 0,014). Notavelmente, não houve mortes nos 12 casos de NANOG (+/-) /p53 (-) durante o período de acompanhamento. Letras diferentes indicam diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p
& lt; 0,05)
Além disso, a análise de sobrevivência em termos dos padrões imunocoramento NANOG, p53 mutante, e CD44 revelaram diferenças estatisticamente significativas (figuras 5e-h.). A intensidade da NANOG expressão foi diretamente associado com a taxa de sobrevida global; pacientes com fortes tumores que expressam NANOG [NANOG (+++)] tiveram taxas de sobrevivência mais pobres do que aqueles com tumores que expressam NANOG fracas ou negativas [NANOG (+/-)] (p
. & lt; 0,01, Fig 5e) . Da mesma forma, foi observada uma associação positiva entre a expressão da p53 mutante e a taxa de sobrevida global; especificamente, os pacientes com CEB p53-positivas tiveram menores taxas de sobrevivência do que aqueles com CCEO p53-negativos (p
. & lt; 0,01, Fig 5-F). expressão de CD44 reforçada foi associado com menor sobrevida, mas esse achado não foi estatisticamente significativa (p Art & gt; 0,05; 5g.). Curiosamente, os doentes com co-expressão de NANOG reforçada (expressão moderada ou forte) e p53 positivo [NANOG (++) /p53 (+)] apresentaram taxas de sobrevivência significativamente mais curtos do que os pacientes com NANOG fraco e expressão de p53 negativa [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, Figura 5H).. De significância, entre os 28 pacientes com NANOG (++) /p53 (+) tumores, 17 pacientes morreram, enquanto que não houve mortes nos 12 pacientes com NANOG (+/-) /p53 (-) lesões durante o acompanhamento -se período (Fig. 5h). Univariada Cox análise de regressão de riscos proporcionais revelou que metástase pescoço, histologicamente tumor de alto grau e estágio do tumor tarde foram associados com prognóstico significativamente pior. Além disso, a expressão aumentada de NANOG e p53 mutante, especialmente co-detecção destas duas proteínas, nas amostras pré-tratamento de biópsia CEs estava diretamente associado com menores taxas de sobrevivência (Tabela 2). Da mesma forma, o modelo de riscos proporcionais de Cox multivariada ilustrado que metástase pescoço, grau histológico e padrão de expressão imuno-histoquímica de NANOG estavam directamente relacionados com a taxa de sobrevida global de pacientes com CEB (Tabela 3) .table 2 univariada de Cox análise de regressão em relação à sobrevida global dos 57 pacientes com tumores
sobrevida global
variável
P
valor
relação Hazard
95% nó CI
Neck
& lt; 0,001 *
6,795
2,745-16,817
grau histológico
0,003 *
12.271
2,336-64,465
Tumor stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0,028 *
0,741
0,217-2,531
Abreviatura: IC
intervalo de confiança
* Estatisticamente significativo ( p Art & lt; 0,05)
riscos proporcionais de análise de regressão multivariada Tabela 3 Cox em relação à sobrevida global dos 57 pacientes com tumores
sobrevida global
variável
P
valor
relação Hazard
95% Cl
Neck nó
0,004 *
6.549
1,800-23,822
histológica grau
0,012 *
3.598
1,330-9,937
Tumor stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0,180
1.195
1. 713-5,754
Abreviatura: IC
intervalo de confiança
* estatisticamente significativa (p Art & lt; 0,05)
Discussão
Desde o surgimento da hipótese CSC como uma chave teoria para explicar a progressão do cancro, os padrões de vários marcadores de células estaminais pluripotentes e factores de transcrição de expressão têm sido estudadas em vários tecidos de cancro ou linhas celulares para determinar a sua correlação com o prognóstico de longo prazo. No presente estudo, o NANOG início fator de transcrição, o marcador CD44 CSC, e p53 mutante humana foram imunohistoquímica investigado nas amostras pré-tratamento de biópsia de 57 pacientes com CEB para identificar qualquer relação de seus padrões de expressão com as características tumorais clínicas e prognóstico do paciente. Os resultados deste estudo demonstraram que os padrões de expressão imuno-histoquímica de NANOG e p53 mutante foram diretamente associados com taxas de sobrevida global, bem como características clínico-patológicas, incluindo estágio do tumor, cervical metastático e grau histológico. Os pacientes com CEB cujos tumores tiveram maior expressão de NANOG e p53 mutante tinha características clinicopatológicas menos favoráveis e as taxas de sobrevivência mais baixas. maior expressão da CD44 também foi associada com mau prognóstico e menor sobrevida, mas não foi observada significância estatística. Recentemente, uma modalidade comum para predizer o prognóstico do câncer tem sido a medição da pressão intra-tumoral heterogeneidade genética [19, 20]. Heterogeneidade indica que os tumores são compostos de múltiplas subpopulações de células clonais característica diferente, e assim, o exame histológico frequentemente revela diferenças na morfologia celular e propriedades, entre células na mesma amostra de cancro [20]. Reforçada a heterogeneidade intra-tumoral foi diretamente correlacionada com o aumento da mortalidade; em particular, grande heterogeneidade e positividade mutação p53 foram associados com maiores taxas de mortalidade em um grande estudo de coorte de câncer de cabeça e pescoço [19]. No presente estudo, secções em série de espécimes tumorais frequentemente revela a co-expressão de NANOG, mutante p53, e CD44, o que foi associado com prognóstico pobre. O co-detecção destes diferentes proteínas marcadoras na mesma célula cancerosa ou região mesmo tumor pode representar grande heterogeneidade do tumor.
NANOG é um fator de transcrição precoce e marcador pluripotentes que mantém a auto-renovação das células-tronco embrionárias e mesenquimais [8 ]. Estudos recentes revelaram que NANOG é altamente detectada em carcinomas pouco diferenciados e tumores em estágio final [8-10]. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
