caso-controle prospectivo da arte abstracta
Fundo
estudos transversais anteriores sugeriram que a via de parto pode influenciar a composição da microflora oral. O objetivo deste estudo prospectivo foi comparar a colonização salivar em crianças parto normal com as crianças entregues por cesariana (C-seção) durante os primeiros 6 meses de vida.
Métodos
O grupo de estudo consistiu em 149 consecutivamente inscritos crianças, entregues quer por via vaginal (n
= 96) ou por C-secção (n
= 53) que ofereceu após o consentimento de seus pais. Amostras de saliva foram coletadas dentro de 2 dias após o nascimento e, em seguida, após 1, 3 e 6 meses. A amostra de saliva das mães foram obtidos 6 meses após o parto. Os pais foram convidados a preencher um questionário sobre fatores socioeconômicos, estilo de vida e higiene no início e durante todo o período do estudo. Todas as amostras foram analisadas com 13 sondas bacterianas pré-determinada usando hibridização DNA-DNA xadrez.
Resultados Os grupos foram equilibrados no início do estudo sobre todos os fatores de fundo relevantes. Gram-positivos estreptococos (S. mitis, S. salivarius
) exibiu as maiores contagens em ambos os grupos, mas uma maior diversidade foi observada no grupo de parto normal. A. naeslundi, A. odontolytics, F. nucleatum Comprar e L. salivarius
só foram detectados entre os recém-nascidos de parto normal. A prevalência de S. sanguinis, S. gordoni, R. denticariosa e B. dentinum
aumentou a idade em ambos os grupos, mas a prevalência foi significativamente menor no grupo C-seção (p Art & lt; 0,05). Havia uma ligação entre as mães e seus descendentes do relativas ao perfil microbiana salivar.
Conclusão
A composição microbiana na saliva difere pelo tipo de parto durante os primeiros seis meses de vida.
Palavras-chave
C bactérias -section Infants Oral Oral colonização Saliva fundo
O biofilme bucal desempenha um papel significativo na saúde e na doença [1]. A composição é altamente individual e afetada por fatores como a genética, dieta, idade e nível de higiene [2]. De acordo com a hipótese da higiene, a sequência e tempo de exposição a uma variedade de estirpes bacterianas iniciais na vida parecem ser de importância para a colonização do intestino [3]. O tipo de parto e interrupção do aleitamento materno foram identificados como fatores importantes na maturação microbiota intestinal [4], e isso parece aplicável também para a cavidade oral. Pesquisas anteriores indicaram que as crianças entregues por cesariana (C-seção) exibem uma reduzida diversidade microbiana na saliva em comparação com as crianças parto normal [5, 6]. Além disso, o perfil microbiana oral, pode discriminar de crianças alimentadas com fórmula [7] amamentados. A importância clínica a longo prazo destes dados não é totalmente claro, mas uma diversidade reduzida nas vísceras se correlaciona com o aumento do risco de desenvolvimento de doença crónica tais como asma e alergia [8]. A informação de menor diversidade em lactentes C-seccionados é no entanto principalmente derivados de estudos transversais e estão disponíveis alguns dados longitudinais. O objetivo do presente estudo foi analisar amostras de saliva de bebês nascidos com C-section através de seus primeiros seis meses de vida com respeito às bactérias chave selecionadas. Os resultados foram comparados com um grupo de crianças parto normal e se a hipótese nula de que não há diferenças seria exibido entre os grupos.
Métodos
Desenho do estudo
A investigação empregou um desenho prospectivo caso-controle e eticamente . aprovado pela Comissão de Ética Regional em Lund, Suécia (DNR 2012/483), que tem a autoridade para aprovar estudos na Halland Hospital
grupo de estudo
o material consistiu de 149 recém-nascidos entregues tanto vaginal (V; n
= 96) ou por C-section (CS; n
= 53). Os participantes foram selecionados consecutivamente entre os voluntários saudáveis que nasceram em Halland Hospital, Halmstad, Suécia, entre abril e dezembro de 2013. Ambos os pais assinaram um termo de consentimento após informação verbal e escrita completa. Os critérios de exclusão foram i) crianças prematuras, ii) recém-nascidos que necessitam de cuidados neonatais, iii) das crianças com uma condição médica não está claro, e iv) as famílias que planejaram deslocalização no estrangeiro após o nascimento. A taxa de atrito de 6 meses foi de 20% e os casos de abandono em relação aos acompanhamentos designados são apresentados na Tabela 1 1.Table participantes e frequência de abandono nos dois grupos (CS = C-seção; V = vaginal entrega)
Idade
V CS
total
taxa de abandono
recém-nascido (1-2 dias )
53
95
148
-
um mês
45
79
124
16%
3 meses
44
74
118
20%
6 meses
44
73
117
20%
Valores no número denotam mesa das crianças
amostragem saliva
Amostras de saliva foram coletadas dentro de 2 dias após o nascimento e, em seguida, após 1, 3 e 6 meses, com a ajuda de cotonetes estéreis. Na primeira ocasião, os pais foram cuidadosamente instruídos e mostrado como coletar a amostra e transferir parte superior para um tubo de plástico marcada. Nos acompanhamentos designados, os pais receberam o kit de teste com um estéril contendo um cotonete e um tubo de plástico com uma folha de informação ilustrada através de correio de superfície. Os pais foram convidados a recolher a amostra de manhã embebendo o cotonete na saliva e imediatamente devolvê-lo para o laboratório. Quando uma amostra estava faltando, os pais foram lembrados através de uma chamada telefónica no prazo de 5 dias. De um modo semelhante, uma amostra de saliva a partir das mães foi obtida 6 meses após o parto. Todas as amostras foram armazenadas congeladas até análises posteriores.
Método Microbial
As amostras foram processadas com a tecnologia de hibridização DNA-DNA do tabuleiro de damas de acordo com Wall-Manning et al. [9]. O DNA foi extraído com mutanolisina e lisozima como previamente descrito [10] e a qualidade de ADN foi avaliado a partir do espectro de UV entre 200 e 300 nm utilizando um espectrofotómetro Gene Quant (Pharmacia Biotech, Uppsala, Suécia). sondas de DNA genômico inteiras de interesse potencial para a saúde bucal e doença foram preparados a partir de um painel de 13 espécies bacterianas com designação da estirpe de acordo com a microbiologia oral colecção de culturas, Gotemburgo, Suécia: Actinomyces odontolyticus
G67; Actinomyces naeslundii
2466 (A. oris
); dentium Bifidobacterium
G174; Fusobacterium nucleatum
2865; Lactobacillus casei
3184; Lactobacillus salivarius
3830; Rothia denticariosa
1956; Streptococcus gordonii
2471; Streptococcus mitis
1770; Streptococcus mutans
2482; salivarius Streptococcus
2473; Streptococcus sanguinis
2478; Veillonella parvula
G186. As contagens bacterianas foram obtidas por o método por cento em que a intensidade do sinal (unidades de luz biomédica) foi expressa como uma fracção de um número elevado de amostras padrão (10
6 células) com auxílio de LumiImager estação de trabalho (Boehringer Mannheim, Mannheim , Alemanha). O nível de detecção foi & gt; 10. 4 células por mL de amostra
Questionário
No inclusão, foram convidados os pais a preencher um questionário de 20 itens sobre as características familiares, sócio-economia, fatores de estilo de vida e hábitos de higiene. Um outro questionário sobre a reprodução, alimentação, hábitos de escovação e antibióticos prescritos foi ligado às expedições de acompanhamento e devolvido juntamente com as amostras.
Métodos estatísticos
Todos os dados foram processados com o software IBM SPSS (versão 22.0 ; Chicago, IL, EUA). Diferenças em distribuições percentuais entre os grupos foram calculados com testes e correlações qui-quadrado entre as contagens bacterianas em mães e seus descendentes de foram expressos como coeficiente de correlação de Spearman. Consideramos p
-Valores inferior a 0,05 como estatisticamente significativos.
Resultados Os grupos foram equilibrados no início do estudo sobre todos os fatores de fundo relevantes, exceto para a quebra de água (para mais detalhes, consulte a Tabela 2). A proporção de meninas foi um pouco maior no grupo CS, mas a diferença não foi estatisticamente significativa. As rotinas de alimentação auto-relatados e o uso de chupetas são apresentados na Tabela 3. As fórmulas para lactentes foram mais comuns no grupo CS comparação com o grupo V durante os primeiros 6 meses, mas a diferença não atingiu significância estatística. A frequência de antibióticos prescritos para as mães durante os primeiros seis meses após o parto foi semelhante (& lt; 15%) em ambos os grupos. O número total de células detectadas a partir das amostras V era, em média, mais elevados do que as amostras de CS em tudo amostragem ocasiões: nascimento: 0,7 vs. 0,5x10 6; 1 mês: 1,3 vs. 0.9x10 6; 3 meses: 1,6 vs 0.9x10 6; 6 meses: 1,5 vs 0.9x10 6 células. A prevalência das bactérias seleccionadas estão resumidos na Tabela 4. Uma maior diversidade foi observada no grupo V. Por exemplo, A. naeslundi
, A. odontolytics
, F. nucleatum Comprar e L. salivarius
só foram detectados entre os recém-nascidos de parto normal. A prevalência de S. sanguinis
, S. gordoni
, R. denticariosa Comprar e B. dentinum
aumentou com a idade em ambos os grupos, mas a prevalência foi significativamente menor no grupo CS (p
& lt; 0,05). S. mitis Comprar e S. salivarius
exibidas as maiores contagens de ambos os grupos em todas as amostragens, mas as contagens não foram associados com o tipo de parto. Houve uma correlação estatisticamente significativa entre as mães e seus descendentes do relativas ao perfil salivar seis meses após a entrega com relação a cinco estirpes do grupo CS e oito cepas do grupo V (Tabela 5) .table 2 características da família de linha de base nos dois grupos (CS = C-seção; V = parto vaginal)
variável
CS
V
Sex (meninas /meninos)
57/43
44/56
quebra de água (sim)
29
100a
Mother nascido na Suécia (sim)
91
91
educação da mãe, universidade (sim)
64
60
mãe fumante (sim)
0
4
antibióticos prescritos (mãe)
4
4
Irmãos (& gt; 2)
6
6
valores na tabela denotam cento
diferença astatistically significativa entre os grupos (p Restaurant & lt.; 0,05, teste do qui-quadrado)
Tabela 3 dados auto-relatados a partir dos questionários distribuídos 1, 3 e 6 meses após o parto vaginal (V) ou C-section (CS)
Variável
1 mês
3 meses
seis meses
CS /V
CS /V
CS /V
Amamentação (sim)
89/95
71/84
55/69
fórmula infantil (sim)
47/32
51/35
50/44
Introduzido-degustação alimentos (sim)
0/0
0/4
72/83
chupeta (sim)
80/83
82/77
85/71
dentes presentes (sim)
0/0
2/0
30/32
limpeza oral (sim)
0/0
9/3
30/26
antibióticos (sim, infantil)
0/3
0/1
0/1
antibióticos ( sim, mães)
9/5
5/4
0/3
os valores na tabela denotam cento
tabela 4 Prevalência (≥104 células) das estirpes seleccionadas no nascimento e intervalos de tempo designados em crianças de parto vaginal (V) ou com C-section (CS)
Strain
nascimento
1 mês
3 meses
seis meses
CS /V
CS /V
CS /V
CS /V
A. naeslundi
0/5
0/0
0/2
0/2
A. odontolyticus
0 /12a
0 /32a
0 /30a
0 /32a
B. dentinum
5 /32a
13 /61a
8/49-A
16 /63a
F. nucleatum
0/2
0/11
0 /10
0 /14a
L. casei
0/2
0/0
0 /0
0/0
L. salivarius
0/0
0/0
0/0
0/3
R. denticariosa
0 /12a
3 /22a
10/21
8/39-
S. gordoni
3/15-
10/19
13 /32a
13 /38a
S. mitis
73/84
85/94
90/94
93/96
S. mutans
53 /76a
65 /88a
58 /88a
68 /92a
S. salivarius
28/36
45 /67a
53/71
48/70
S. sanguinis
0 /35a
5 /44a
10 /47a
13 /53a
V. parvula
0/0
3 /6
5/6
8/24
os valores na tabela denotam cento
diferença astatistically significativa entre os grupos (p Restaurant & lt; 0,05, teste do qui-quadrado)
Tabela 5 colonização oral de bactérias selecionadas em mães e os seus bebés, 6 meses após o parto vaginal (V) ou C-section (CS)
Strain
CS
V
A. naeslundi
NS
NS
A. odontolyticus
NS
0,43
B. dentinum
0,54
0,28
F. nucleatum
NS
NS
L. casei
NS
NS
L. denticariosa
NS
0,45
L. salivarius
NS
NS
S. gordonii
0,48
0,36
S. mitis
0,59
0,32
S. mutans
0,85
0,36
S. salivarius
0,71
0,48
S. sanguinis
NS
0,56
V. parvula
NS
NS
Os valores na tabela denotam Spearman dois coeficiente de correlação de cauda. NS
não estatisticamente significativa
Discussão
Os resultados deste estudo relativamente extenso corroboram descobertas anteriores de que a composição do biofilme oral é afetadas pelo tipo de parto [5, 6, 11] com um menor diversidade entre as crianças entregues com o C-seção. Assim, a hipótese nula pode ser rejeitada. Os nossos resultados devem no entanto ser consideradas com cautela para um número de razões. Primeiro de tudo, a composição do início microbiota salivar pode ser influenciada por um número de outras do que o modo de entrega de factores, tais como o tratamento peri-parto com antibióticos, dieta [12], as práticas de alimentação [7, 13], a utilização de chupetas [14], a renda familiar [11, 13], e os hábitos de escovação [15]. Em nosso estudo, o CS e os grupos de parto normal foram semelhantes com relação a sócio-economia, tamanho da família, escolaridade materna e comportamento alimentar de modo que consideramos o risco de fatores de confusão como pequena. Até mesmo a prescrição de antibióticos para as mães e seus off-molas foi igual de acordo com os questionários, embora uma certa subnotificação pode ser suspeita. Em segundo lugar, a técnica de hibridização DNA-DNA quadriculado tem seus pontos fortes e limitações; A principal vantagem é que o método permite a enumeração de um grande número de espécies de grande número de amostras e, portanto, considerada como uma ferramenta útil para a enumeração das espécies bacterianas em sistemas microbianos complexos [16]. Entre as limitações, possíveis reacções cruzadas e variando reprodutibilidade para diferentes estirpes foi discutido [17]. Em terceiro lugar, é possível que o procedimento de amostragem pode ter causado uma maior variabilidade nos resultados que o procedimento de laboratório como tal. Estas deficiências, em conjunto com o nível de detecção relativamente alto fez-nos quantificar os dados de bactérias de acordo com o método por cento como sendo uma alternativa mais segura [17]. No entanto, é importante sublinhar que os valores de prevalência reportados aqui foi baseado em um limiar de aproximadamente 10 4 células; as estirpes seleccionadas poderia muito bem estar presentes nas amostras, mas não em quantidades suficientes para ser detectada. Assim, o próximo passo natural seria, portanto, para estender o mapeamento para incluir todo o microbioma oral. Uma quarta viés possível era a taxa relativamente alta de desistência durante o curso do estudo, e só podemos especular sobre a sua possível influência sobre os resultados.
A correlação intra-familiar da microflora oral com referência especial à mãe-filho e mutans aquisição estreptococos tem sido descrita várias vezes antes de [18-21]. Curiosamente, Ruiz-Rodriguez e colaboradores [22] não conseguiu demonstrar uma relação mãe-filho para S. mutans jogue com a cultura convencional, mas sua amostra foi pequena e S. mutans
foi muito raramente detectadas (2%) entre as crianças com a idade de 150 dias. No presente estudo, a maioria de todas as crianças do grupo CS e quase todos no grupo V abrigava S. mutans
aos 6 meses de idade e além do diferente de amostragem e técnicas de análise, não temos explicação para estes contrastando descobertas. No entanto, a correlação clara entre mãe e filho para 8 das 13 manchas no grupo V foi interessante, mas precisa ser mais investigada por amplificação rDNA exemplo 16 s e sequenciamento.
A pergunta por quanto tempo uma diferença dependente de entrega em colonização oral, prevalece, e se isso pode afetar a saúde bucal mais tarde na vida, permanece em aberto. Há no entanto, provas justo que uma aquisição inicial de estreptococos mutans por via oral, em geral, está associado a um risco aumentado para o desenvolvimento de cárie [23, 24]. Além disso, há relatos que sugerem que as crianças entregues com o C-seção têm um elevado risco para a asma na infância [25] e mais cárie dentária com a idade de 3-5 anos [26, 27]. Esta relação possível precisa no entanto de ser verificada em ambientes maiores e em estudos prospectivos que cobre a dentição permanente jovem.
Conclusões
Dentro das limitações do presente estudo, concluiu-se que tipo de parto desempenha um papel na composição do biofilme bucal durante os primeiros 6 meses de vida. crianças parto normal parecem ter uma maior diversidade de C-seção infantil e uma maior similaridade com suas mães. Mais estudos para investigar uma possível influência a longo prazo sobre a saúde bucal parecem ser necessários
Abreviatura
CS:.
Cesariana
declarações
Agradecimentos
o projecto foi apoiado por uma bolsa da Região Halland, na Suécia. Os autores gostariam de agradecer ao pessoal da clínica materna no Hospital Halland e todos os pais pela confiança e paciência. O falecido Sra Kerstin Magnusson (RDH) é reconhecido por sua assistência técnica qualificada
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concorrentes. interesses
os autores não têm qualquer conflito de interesses a declarar contribuições
dos autores
KB:. recolhidos todos os dados, realizadas análises estatísticas e escreveu o primeiro rascunho. JR: desenhou o estudo, e finalizou o manuscrito. GD: realizou as análises microbianas e escreveu o manuscrito. JD: projetou e supervisionou o estudo e finalizou o manuscrito. ST: desenhou o estudo, realizado análises estatísticas e escreveu o primeiro rascunho. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
