Abstract
Fundo
dentina tipo displasia I (DD-I) é uma desordem hereditária autossômica dominante rara que afeta seriamente o desenvolvimento das raízes dos dentes, causando perda do dente espontânea (em adolescentes). Actualmente, o estudo da DD-I centra-se em familiar e análises fenotípicas e relatórios sobre o estudo ultra-estrutural do DD-I são poucos. O objetivo deste estudo foi o de esclarecer e discutir os aspectos clínicos, histopatológicos e ultra-estruturais dos defeitos de dentina em DD-I. Além disso, o estudo explora ainda mais o desenvolvimento das raízes e fornece pistas para descobrir genes virulentos associados com a doença.
Métodos
Nós recrutados 31 membros de uma família chinesa de quatro gerações, incluindo onze com defeitos de dentina. Quatro dentes permanentes e quatro dentes decíduos foram obtidas de indivíduos afetados por DD-I. Ao mesmo tempo, os dentes permanentes, como de número dois livres de cárie e dentes decíduos serviram como controle, respectivamente. A análise desses dentes foram realizados utilizando lupa estereoscópica, microscopia de luz e de varredura e microscopia eletrônica de transmissão, respectivamente.
Resultados
Semelhante a relatórios anteriores, dentes extraídos mostraram características típicas histopatológicos e ultra-estruturais de DD-I e dentes tiveram curta raízes com câmaras pulpares obliteradas. Além disso, várias novas descobertas foram encontrados em dentes afectados por DD-I, incluindo; (1) dentina mais fino; (2) junções maior scalloped amelodentinária; (3) em forma de lágrima lacunas no esmalte; (4) sem haste de esmalte e (5) fibras de colágeno irregulares.
Conclusões
Os resultados apresentaram características de DD-I definido na família e ainda confirmado que a estrutura da dentina anormal afetou tanto a dentições. Além disso, esses achados podem contribuir para um melhor entendimento da patogênese da DD-I, bem como ajuda na subclassificação desta doença.
Fundo
defeitos dentina hereditários são divididos em duas categorias principais, a saber dentinogênese imperfeita e displasia dentinária (DD) [1, 2]. DD é um distúrbio hereditário na formação da dentina, que compreende um grupo de genéticos [3, 4] condições autossômicas dominantes que são caracterizados pela estrutura dentina anormal afetando tanto o dentições [2-6]. A condição foi descrita pela primeira vez por Ballschmiede [7], mas foi Rushton [8], que denominada a condição "displasia da dentina". Dois tipos de DD foram identificados, e baseiam-se na aparência clínica e radiográfica do tecido afectado dentina. DD-I é referido como "displasia radicular dentina" e DD-II como "displasia dentina coronária", de modo a indicar as partes dos dentes que são afectados principalmente por cada desordem [9]. Um terceiro tipo de DD ou displasia odontoblástica focal, com os aspectos radiográficos dos outros dois tipos de displasia, também tem sido descrita [10].
DD-I é uma anomalia rara, de etiologia desconhecida, que afeta aproximadamente um paciente em cada 100.000 [11]. Apresenta-se com coroas aparecem quase normais de translucidez regular ou ligeiramente âmbar, espaços anormais entre os dentes, mau posicionamento e mobilidade dentária grave. Além disso, os dentes podem ser perdidos prematuramente através de esfoliação espontânea relacionada a uma falta de formação de raízes [12, 13]. O exame radiográfico é uma ferramenta de diagnóstico para a identificação de primordial nesta doença, como os dentes são caracterizados por raízes curtas, sem corte e mal formadas, semelhantes às observadas em dentes taurodontic. Outras características da doença incluem a obliteração de todas as câmaras pulpares com restos de celulose em forma de crescente paralelas à junção cemento e vários radiolucência periapicais em dentes hígidos [3, 4, 6, 14]. O exame microscópico dos dentes afectados revela esmalte normal com uma fina camada de dentina normal adjacente à junção dentinária e, mais centralmente, massas de dentina displásicas, sugestivos de múltiplas calcificações polpa [12, 13]. O tratamento de pacientes com DD-I é difícil e estratégias, tais como a prevenção de celulose e infecções periapicais, esfoliação e precoce dos dentes têm sido propostos. Outras estratégias incluem a análise da dieta e aconselhamento, higiene oral cuidadosa, suplementos de flúor [15, 16], convencional terapia endodôntica retrógrada obturação, e curetagem periapical [17, 18].
Actualmente, a maioria dos estudos se concentrar no familial e fenotípica de análises clínicas de DD-I, e há poucos relatos sobre o estudo ultra-estrutural do DD-I. Isto é devido à baixa incidência de doença e, assim, a dificuldade na obtenção de dentes afectados por DD-I in vitro
. O objetivo deste estudo foi examinar a histologia e ultra-estrutura dos dentes afetados pela DD-I e avaliar modelos de desenvolvimento que podem explicar os resultados.
Métodos
O protocolo do estudo e consentimentos de pacientes foram revistos e aprovados pela Instituição Conselhos de revisão da Universidade de Zhengzhou. Foram recrutados 31 membros de uma família chinesa de quatro gerações, incluindo onze com defeitos de dentina. Todos os membros da família disponíveis foram examinados por exame clínico e radiografia panorâmica para confirmar o diagnóstico de DD-I. Quatro dentes permanentes e quatro dentes decíduos foram coletadas de pessoas da família afetado pela DD-I. Ao mesmo tempo, dois livres de cárie dentes permanentes como numeradas e dois dentes decíduos como com numeração saudáveis serviram como controles. Todos os sujeitos não tinham histórico de doença sistêmica grave. Os dentes foram inicialmente fixado em formalina a 10% e depois armazenados em etanol a 70%. Os espécimes foram fotografados e longitudinais, descalcificadas, seções vestibulolinguais foram cortados com uma serra de diamante de baixa velocidade (Leitz, Stuttgart, Alemanha) microtome a 1 mm
lupa estereoscópica:. Os cortes foram polidos com papel abrasivo (7000) e, em seguida observada com . estereomicroscópio
microscopia óptica (MO): As secções foram lavadas em água destilada, e foram polidos com papel abrasivo (800; 1000; 2000; 3000 e 7000), a uma profundidade de 15 m. As superfícies obtidas foram condicionados com ácido fosfórico 40% por 30 s e gradualmente desidratados antes da coloração com bálsamo neutra para análise LM padrão microscopia eletrônica
de varredura (MEV): Os cortes foram polidos com papel abrasivo (1000; 3000 e 7000).. As superfícies foram então tratada com ácido fosfórico de 40% para 40, e progressivamente desidratados antes do revestimento com uma liga de ouro-paládio para exame SEM utilizando Quonxe-2000 (PHILIPS, Amsterdam, Holanda) a 25 kV. SEM Stereoscan com ampliações de 200 ×, 500 ×, 1000 × de 2000 ×, e foram utilizados 5000 ×, respectivamente
Microscopia Eletrônica de Transmissão (TEM):. Porções fraturados de várias amostras foram descalcificadas usando M de sal dissódico 0,1 ácido etilenodiaminotetracético, pH 7,3-7,5, durante um mês e meio à temperatura ambiente e pressão. seções ultra-finas foram feitas usando uma faca de diamante e examinados com um JEM-1400 TEM (JEOL, Tóquio, Japão) operando a 80 kv.
Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Universidade Zhengzhou a. o consentimento para participação na pesquisa e publicação imagem foi obtida para cada participante.
Resultados
O exame clínico do indivíduo afetado pela DD-I revelou que os incisivos superiores e inferiores foram perdidos, e não havia mobilidade severa dos dentes residuais , embora os dentes coroas em forma normais (Fig. 1c). exame identificou características radiográficas características associadas com DD-I incluindo, dentes residuais com raízes curtas, obliteração das câmaras pulpares com os restos de celulose em forma de meia-lua e cistos periapicais, sem lesões de cárie (Fig. 1D). dentes extraídos de indivíduos afetados por coroas em forma normais DD-I apresentaram generalizadas, mas com uma cor ligeiramente amarela com raízes curtas, câmaras pulpares obliteradas, bem como esmalte defeituoso (Fig. 2a, b). Exame de secções de terra de dentes normais e sob um microscópio estereoscópico DD-I e e LM revelou que o esmalte era de espessura normal em ambos os dentes normais e DD-I e um esmalte de aparência normal foi contínuo com uma banda dentina coronal de aparência normal dos túbulos (. Figuras 2c, d; 3a, b). Além disso, bem demarcada da dentina manto foi encontrada em várias áreas de todos os dentes DD-I examinados (Fig. 3c, d), e a maior parte da dentina directamente adjacente ao esmalte apresenta túbulos dentinários e um manto dentina nitidamente diferenciadas. No entanto, os túbulos dentinários de dentina circumpulpal eram menos em comparação com os controlos, que foram fragmentadas e descontínua em certas áreas (fig. 3c, d), e a espessura da dentina foi visivelmente mais fino em dentes DD-I em comparação com os controlos (Fig. 2d, 3b). Além disso, e mais importante, a câmara pulpar foi extra-grande e toda a região foi fundida com grandes massas de organizações irregulares (Figs. 2d, 3b). Análise com uma ampliação maior revelou que as massas de dentina displásicas consistiu em mineralizada glóbulos de dentina e túbulos dentinários whorled com as duas seções formando uma "corrente que flui em torno de pedras" característica estrutura da dentina radicular (Fig. 3e, f). A observação revelou que a junção amelodentinária era lisa ou recortada, mas a estrutura recortada de DD-I foi maior do que a dos controlos (Fig. 3G). Além disso, lacunas em forma de lágrima foram encontrados perto do esmalte cervical em DD-I dentes (Fig. 3 g). FIG. 1 imagens intra-orais e radiografias panorâmicas de indivíduos. uma imagem intra-oral de um sujeito normal. Radiografia panorâmica b de sujeito normal. c Intraoral foto de um sujeito de 47 anos afetados por DD. d Radiografia panorâmica de um sujeito afetado pela DD-I
Fig. 2 observações clínicas e estereoscópica de normal e DD-I afetados dentes. um Um dente de folha caduca afectada por DD-I e (b) um dente permanente do sujeito afectado por DD-I. Exemplos de A (c) dos dentes permanentes normal e (d) um dente permanente afectada por DD-I
fig. 3 LM exame das amostras de dentes. uma seção do-chão de um dente permanente de controlo (40 vezes). seção de terra b de um dente permanente afetada pela DD-I: esmalte de aparência normal, dentina fina e grande polpa preenchido com uma organização irregular estão presentes (40 vezes). c bem demarcada dentina manto continuou com túbulos dentinários fraturados e descontínua e esparsos foram encontrados em dentes decíduos afetados pela DD-I (100 ×). d dentina de um dente permanente afetada pela DD-I (400 ×). e "Córrego que flui ao redor pedras" padrões foram encontrados em dentes decíduos afetados pela DD-I (200 ×). f Um dente permanente afectada por DD-I (a seta indica um cordão dentina) (400 ×). lacunas g Teardrop em forma de perto o esmalte cervical foram encontrados em dentes permanentes afetadas pela DD-I (a seta indica uma lacuna) (100 ×)
SEM do esmalte revelou que túbulos dentinários dos controles foram densa e homogénea (Fig . 4a, C). No entanto, túbulos dentinários eram em menor número e em menor diâmetro nos dentes DD-I do que nos dentes normais, e alguns abertura dos túbulos dentinários de dentes DD-I foram ocluindo (Fig. 4b, d). Em ampliações maiores, dentes DD-I continha regiões do esmalte sem haste com listras horizontais em preto e branco (Fig. 4E). TEM revelou que, em dentes de controle, uma matriz de dentina rico em colágeno foi cercado por túbulos dentinários bem demarcadas que foram regularmente distribuídos, de igual tamanho e que teve uma secção transversal aproximadamente circular. Os túbulos de dentes de controlo também apareceu vazio ou com uma quantidade de electrões remanescentes densas de conteúdo intratubulares minutos (Fig. 5A, C) e, além disso, o colagénio de tipo laminar pode ser encontrado entre a dentina intertubular (Fig. 5e). Em contraste, as amostras DD-I teve diferentes quantidades de fibras de colágeno que foram localizados em torno dos túbulos com configuração variável, o diâmetro ea distância intertubular. Quando vimos, os túbulos dentinários normalmente tinha um diâmetro menor e um contorno mais irregular do que os túbulos encontrados nos controles e a margem de parede do túbulo foi mal demarcada. conteúdo intratubular variou de um material granular a uma massa amorfa densa que estava presente na maioria dos túbulos, e com o aumento da anormalidade, os túbulos se tornou escasso e pequena, e finalmente desapareceu (Fig. 5b, d). Além disso, as fibras de colagénio apareceu curto e introduz-se nos túbulos, e áreas com colagénio esparso se tornaram mais frequentes. Finalmente, as fibras de colágeno também foram esmo orientada na matriz de dentina (Fig. 5-F). (Um resumo dos principais resultados podem ser encontrados na Tabela. 1) Fig. 4 SEM exame dos espécimes dentes. uma disposição regular túbulos dentinários foram encontrados em dentes decíduos normais (2000 ×). túbulos dentinários b escassamente espalhados com diâmetro reduzido foram encontrados em dentes decíduos afetados pela DD-I (2000 ×). túbulos c dentina em um normal, permanente e (d) um dente permanente afetada pela DD-I (2000 ×). esmalte e sem haste com listras horizontais em preto e branco em um dente permanente afetada pela DD-I (500 ×)
Fig. 5 exame de MET das amostras de dentes. a dentina interna normal com túbulos dentinários ordenadas tendo nenhuma estrutura bainha-like foram encontradas em dentes decíduos de controle (3000 ×). b túbulos com forma irregular, tamanho e padrão de organização foram encontrados em dentes decíduos afetados pela DD-I (3000 ×). c túbulos dentinários externa com estruturas de bainha-like de dentes permanentes normais e túbulos (d) dentina de dentes permanentes afetadas pela DD-I (5000 ×). colágeno e Laminar-type em um dente normal e (f) margens mal definidas e fibras colágenas irregulares em um dente afetado pela DD-I (15.000 ×)
Tabela 1 Resumo dos principais resultados
normal dentes dentes permanentes
DDI-permanentes
dentes decíduos normais
dentes DDI-decíduas
coroas normais
+
+
+
+
dentes Rootless
+
+
periapical radiolucência
+
+
Pulp obliteração
+
+
parcialmente destruído em forma de crescente câmara pulpar
+
+
esmalte normal
+
+
+
+
manto bem demarcada dentina
+
+
+
+
túbulos dentinários displásicas
+
+
"Córrego que flui ao redor de pedras" estrutura de dentina radicular
+
+
fibras de colágeno caóticos
+
+
maior scalloped junções amelodentinária
+
lacunas Teardrop em forma no esmalte
+
sem haste esmalte
+
Discussão
DD-I é uma doença autossômica distúrbio hereditário dominante na formação da dentina, que pode apresentar-se com um ou outro movimento dentário móvel ou dor associada com abcessos ou cistos [11, 19-22] dentários espontâneos. No estudo atual, o exame dos dentes dos indivíduos com características DD-I revelou definidos da doença, incluindo coroas clinicamente normais, o aumento da mobilidade dentária, obliteração radiográfica da câmara pulpar, lesões periapicais radiolúcidas e raízes embotadas curtas. DD-I é dividido em quatro subtipos (A-D), com base na quantidade de obliteração das câmaras de celulose, o desenvolvimento das raízes, e áreas radiolúcidas periapicais. DD-Ia é caracterizada por obliteração completa da polpa, sem o desenvolvimento das raízes, e muitas áreas radiolúcidas periapicais. Em DD-Ib, um único pequeno crescente de celulose em forma orientados horizontalmente e está presente, raízes são apenas alguns milímetros de comprimento e há radiolucência periapicais frequentes. DD-IC é caracterizada pela presença de duas em forma de crescente remanescentes pulpares horizontais ou verticais que circundam uma ilha central da dentina. Além disso, os dentes têm reduzido comprimentos de raiz e radiolucência periapicais variáveis. Finalmente, em DD-Id, as câmaras pulpares são distintos, com pedras de celulose no terceiro coronal do canal radicular (com abaulamento correspondente do root). Além disso, as raízes têm um desenvolvimento significativo, e há poucos, se houver, radiolucência periapicais [21]. No presente estudo também descobriu que a maioria DD-1 dentes afetados estavam livres de cárie. A razão para esta descoberta pode ser explicada por um número de factores incluindo, a boa prática de higiene oral do paciente, uma dieta rica em fibras, a perda precoce de dentes sem raízes resultantes em um encurtamento do tempo de adesão de cárie-causando bactérias, ou uma combinação desses atores. . Mais pesquisas são necessárias para confirmar os fatores associados com a constatação acima
Em nosso estudo, variações nas estruturas de dentina foram observados com lupa estereoscópica, LM, SEM e TEM analisa e havia seis novas variações fenotípicas importantes encontrados; (1) A espessura da dentina foi mais fino em comparação com os controlos; (2) a junção amelodentinária (DEJ) era lisa ou ruiva, mas a estrutura scalloped encontrado em dentes DD-I era maior do que os controles; (3) lacunas em forma de lágrima foram encontrados perto do esmalte cervical; (4) as regiões do esmalte sem haste com listras horizontais em preto e branco pode ser encontrado em dentes DD-I e (5) as fibras de colágeno eram irregulares.
Melnick et al. observado que túbulos dentinários em dentes de doentes DD-I parecia ser em menor número e, geralmente, um diâmetro menor do que o encontrado em dentes normais [23]. Os resultados de LM, SEM e TEM analisa no nosso estudo revelou que túbulos dentinários em espécimes DD-I foram quer grandemente reduzidos em número ou menor em diâmetro do que as amostras de controlo. De maior importância, em algumas áreas patológicas não conseguimos encontrar túbulos dentinários e isso poderia ser explicado pela degradação e disfunção de odontoblastos [24]. Nossa hipótese é que túbulos dentinários são importantes na dentinogenesis e eles podem atuar como vias de transporte para a proteína gel matriz e subsequente reabsorção do gel e transporte de fosfatos de cálcio durante a mineralização da dentina. Os efeitos negativos sobre a mineralização da dentina peritubular e dentina intertubular encontrada neste estudo poderia, portanto, ter resultado de túbulos diminuiu [25]. Os resultados de dentina mais finas e a estrutura de "corrente que flui em torno de pedras" pode ser explicada como se segue: Uma função normal inicial dos odontoblastos ou preodontoblasts pode ser visto por uma camada de manto dentina bem demarcada [26], mas se odontoblastos tornar-se disfuncional isso resulta em um depoimento rápido, caótico matriz e mineralização, finalmente levando a polpa obliteração [24]. Esta nova matriz é susceptível de ser secretada pelas células de odontoblastos-semelhantes, que são derivados a partir de células indiferenciadas mesenquimais polpa após a apoptose ou necrose dos odontoblastos originais. Estas células odontoblástica-like, com um programa genético alterado de produção da matriz, secretam continuamente proteína gel matriz e fosfato de cálcio, resultando em câmara pulpar ou canal obliteração root [4, 11, 24, 26]. O JDE pode ser considerado como uma interface entre a adesão biológica esmalte e dentina. A configuração do DEJ foi scalloping em vez de uma linha reta em dentes DD-I. Esta ligação, aumentando a área de contacto esmalte e dentina, foi vantajoso a combinação firme de ambas as proteínas [27]. De acordo com as nossas observações, a estrutura recortada de DD-I dentes era maior do que nos controles e, ao mesmo tempo, os resultados de análises revelaram que LM lacuna em forma de lágrima perto do esmalte cervical correspondia às regiões de esmalte sem haste. Isto sugere que as estruturas de esmalte em dentes DD-I podem ser alterados, embora esta mudança de esmalte não foi extensivamente encontrados no estudo corrente. A este respeito, são necessários mais estudos para determinar se essa alteração foi uma manifestação excepcional de dentes DD-I resultantes de uma mutação específica, ou um artefato de processamento das amostras. Em apoio a uma possível mudança de esmalte, há relatos anteriores de estudos TEM nos dentes afetados pela DD-I, em que as fibras de colágeno exibidos variação extrema no seu padrão organizacional. No que diz respeito à mineralização inadequada da matriz de dentina secretada sendo uma característica de distúrbios de dentina, dois mecanismos diferentes podem ser responsáveis: Em primeiro lugar, nas formas colagenosas de DD-I, uma nucleação defeituoso de cristais de apatite na superfície do colagénio pode ser o resultado de uma redução no colagénio, bem como má qualidade estrutural de moléculas de colagénio [28]. Em segundo lugar, nas formas não-colágenos da DD-I, o funcionamento anormal de duas proteínas da matriz dentinária únicas, sialoprote�a dentina e fosfoproteína dentina, pode interferir com a mineralização da matriz de dentina normal, [29]. Assim, anormalidades nos componentes da matriz não-colágenas não pode ser excluída na patogênese da DD-I.
O exato mecanismo responsável pela DD-I é um enigma, embora várias teorias têm sido propostas. Logan et ai. [12] proposto que a papila dentinária que é responsável pelas anormalidades no desenvolvimento radicular torna-se calcificada, resultando na redução do crescimento e obliteração final do espaço pulpar. Sauk et ai. [13] sugeriu um problema no componente epitelial do germe dente em desenvolvimento, em que a invaginação da bainha radicular ocorre muito mais rapidamente, e numa sequência de tentativas fúteis para corrigir-se, resulta na formação da dentina anormal. Witkop [9] propôs que os resultados displasia de células epiteliais da bainha de Hertwig romper e migrando para a papila dental, onde produzem formação de dentina ectópica. Wesley et ai. [30] apresenta como uma hipótese alternativa, que um erro na indução contínua de odontoblastos após a interacção com a camada ameloblástico provoca a diferenciação e /ou função anormal das odontoblastos. Com base nos nossos resultados, apoiamos a ideia de Wesley e seus colegas. Mais estudos histopatológicos e ultra-estruturais da dentina em dentes DD-I podem ajudar a obter um melhor entendimento da patogênese, bem como os fenótipos clínicos de DD-I.
Conclusões
Estudamos o clínico, histológico e ultra-estrutural estruturas de dentes em uma família com defeitos de dentina e todos os resultados indicam características de DD-I definido. achados novos deste estudo incluem (1) dentina mais fino; (2) junções maior scalloped amelodentinária; (3) em forma de lágrima lacunas no esmalte; (4) de esmalte e sem haste (5) fibras de colagénio irregulares, todos os quais contribuem para a patologia da doença. Além disso, estes resultados podem contribuir para uma melhor compreensão da patogênese, bem como ajuda na subclassificação de DD-I
abreviações
DGI:.
Dentinogênese imperfecta
DD:
dentina displasia
LM:
A microscopia de luz
SEM: microscopia eletrônica
Scanning
TEM:
microscopia Eletrônica de Transmissão
EDTA-2Na:
Ethylenediaminetetraacetic sal dissódico do ácido
DSP:
dentina sialoprote�a
DPP:
fosfoproteína dentina
Declarações
Agradecimentos
Somos em dívida com os pacientes e sua família para a participação neste estudo. Nós também somos extremamente gratos aos professores que contribuíram para este estudo. Um agradecimento especial ao Professor Jianmin Chen (Universidade de Zhengzhou) para o seu valioso apoio durante as experiências de SEM. Simultaneamente, Professor Xiubing Dong (Universidade de Zhengzhou) dado apoio meritório durante as experiências de TEM. Shichang Wang participou na interpretação dos resultados de LM.
Apoio financeiro
Este trabalho foi financiado pela National Science Foundation Natural da China (81470033 e 31371279).
Artigo Abrir AccessThis é distribuído sob os termos da Creative Commons Attribution 4.0 License Internacional (http:. //creativecommons org /licenses /by /4. 0 /), que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que você dê crédito apropriado para o autor original (s) e da fonte, fornecer um link para a licença Creative Commons, e indicar se as alterações foram feitas. A renúncia Creative Commons Public Domain Dedication (http:. //Creativecommons org /publicdomain /zero /1. 0 /) aplica-se aos dados disponibilizados neste artigo, salvo indicação em contrário
concorrentes. interesses
os autores declaram que não têm interesses conflitantes
contribuições dos autores
XY participaram do desenho do estudo, amostras coletadas, realizados experimentos, escreveu o rascunho do manuscrito, e revisões coordenadas. KYL descreveu as, investigações coordenadas, amostras coletadas afins, realizou experimentos, revisto o primeiro rascunho. LL, FFY, YF, FX recolhidos a parentes e a revisão do manuscrito. XMX, CRZ examinou pacientes e elaborou planos. DC gerenciou o projeto, projetou o estudo, recrutados a família, liderou o processo de estudos e revisão crítica do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
Informações dos autores
Estes autores Xin Ye e Kunyang Li são primeiro autor conjunta.
