ABSTRACTTitle:. Eficácia da clorexidina sem álcool na redução dos níveis de Streptococcus mutans
Objetivo:. Para comparar as propriedades antimicrobianas de clorexidina sem álcool com outros boca-lavagens antimicrobianas
métodos: Streptococcus mutans (estirpe GS5), foi cultivada em agares, e ressuspensas num meio estéril meio de tripticase de caldo de soja (TSB) suplementado com extracto de levedura. Quatro experiências únicas foram conduzidas cada adição os inóculos da suspensão bacteriana aos agentes antimicrobianos de teste
. Resultados: Experiência # 1: Crescimento de S. mutans foi totalmente inibida a concentrações de 5% e 1% de álcool-livre clorexidina (AFC) e clorexidina contendo álcool (CHX). O crescimento bacteriano ocorreu em todas as outras diluições com o mais notável em 1% Biotene & reg; (OD max = 1.383 nm), seguido de 0,01% Biotene & reg; (OD max = 1.328). O maior tempo de duplicação foi de 0,01% CHX em 2,1013 hr
Experiment # 2:. O tempo de geração e OD max foram semelhantes para todas as diluições das diferentes reagentes
Experiment # 3: 5. Minuto curta exposição -TERM de CHX não diluído inibiu o crescimento de S. mutans. AFC inibiu o crescimento bacteriano durante 6 horas. O OD máximo e tempo de duplicação foram 1.288 e 1,1213 h, respectivamente. O OD máximo e tempo de geração para Biotene & reg; foram 0,891 e 1,5516, respectivamente hr
Experiment # 4:. cinco minutos de exposição a curto prazo de CHX não diluído e AFC inibiram o crescimento de S. mutans. O crescimento bacteriano ocorreu em todas as outras diluições com o mais notável em plena força Biotene & reg; (OD max = 1.629), seguido por 1% de etanol (OD max = 1.598). O maior tempo de duplicação foi de 5% de etanol a 1.706 hr
Conclusões:.. Clorexidina sem álcool é eficaz na supressão do crescimento bacteriano de S. mutans e, portanto, é uma alternativa viável para clorexidina contendo álcool
INTRODUCTIONAntimicrobial soluções de enxaguamento de boca são usados em muitas situações clínicas, tanto para fins profiláticos e terapêuticos (1). Mais especificamente, boca-enxaguamentos tornaram-se um procedimento auxiliar importante para uma boa higiene oral mecânica ou na prevenção de infecções subsequentes a bactérias de procedimentos cirúrgicos intra-orais ou imunossupressão devido a radiação na cabeça /neck.1,4,5
< p> gluconato de clorexidina (CHX), um agente antibacteriano de amplo espectro, é um dos agentes anti-sépticas mais amplamente utilizados em care.5 dentário abrangente eficazes simultaneamente contra microorganismos Gram-positivos e Gram-negativas, fungos e alguns vírus, tem sido demonstrou inibir a formação de placa, reduzir a inflamação gengival e evitar caries.3,5 dentária Além disso, na utilização oral, CHX está livre de toxicidade sistémica, e a resistência microbiana ou alterações da microbiota orais não occur.8,11 no entanto, a prolongada uso de CHX é limitado devido ao desenvolvimento de dentes e língua descolorações extrínsecas, bem como alterações no paladar levando à diminuição compliance.2,3,5,7,9,11 paciente Portanto, a maioria dos dentistas não recomendo longa -termo uso diário de clorexidina como uma boca-rinse.11 gengival descamação e mucosa dolorosa também foram relatados em cases.1,5 grave
a literatura atual suporta o uso diário de 0,12% ou 0,2% CHX como anti-séptico agentes. No entanto, um fator limitante adicional é que rotineiramente utilizados clorexidina boca-lavagens contêm álcool, o que pode causar dor, irritação e ser prejudicial aos pacientes com mucosite, os pacientes submetidos a radioterapia de cabeça /pescoço, crianças, doentes imunocomprometidos ou recuperação de alcoólicos. efeitos potencialmente negativos da contendo álcool CHX boca-lavagem levou à formulação de um novo livre de álcool de 0,12% CHX (AFC) boca-rinse.1,2,11
Biotene & reg; é uma boca-de enxaguamento isento de álcool que pode melhorar muitos dos sintomas da xerostomia induzida por radiação. Ele actua através da produção de um sistema enzimático antimicrobiana na cavidade oral que penetra nas paredes celulares de bactérias formadoras de placas, destruindo-as apenas gengival ao gumline.12 Este sistema enzimático é constituído por proteínas salivares humanas de defesa inatos; lisozima, lactoferrina e peroxidase. A lactoferrina é uma glicoproteína de ligação de ferro que exibe actividade bactericida contra uma variedade de bactérias em forma livre-ferro, apo-LF, e bacteriostasis através sequestration.6,10 ferro
Ambos AFC e Biotene & reg; são agentes antimicrobianos comercialmente disponíveis utilizados para melhorar a higiene oral e prevenir a infecção bacteriana. No entanto, poucos estudos têm-se centrado sobre a eficácia da AFC como uma boca-lavagem antimicrobiana viável.
O objetivo deste estudo foi comparar as propriedades antimicrobianas de gluconato de clorexidina sem álcool com outros boca-lavagens antimicrobianas.
MÉTODOS e MATERIAIS
espécies de bactérias medidas de densidade óptica:. Como microrganismos crescer, eles aumentam a turvação do seu meio de crescimento. por medição da turbidez desta forma ao longo do tempo, uma curva de densidade óptica pode ser gerado. A curva reflete o crescimento (aumento da concentração) do organismo de Interesse em BIOSCREEN PREPARAÇÃO:. Na primeira experiência quatro diluições, 5%, 1%, 0,1% e 0,01% em TSB, cada um dos AFC, CHX e Biotene & reg; foram feitos. As mesmas diluições foram feitas com água destilada como controlo. Os inóculos da suspensão bacteriana foram adicionados aos reagentes diluídos e brevemente vortex. O segundo experimento testou a exposição a curto prazo de duas diluições, 5% e 1% em TSB, cada um dos AFC, CHX e Biotene & reg ;. Uma diluição de 5% foi preparada com água destilada como controlo. Inóculos (1000 uL) de suspensão bacteriana foram centrifugadas durante 1 minuto a ~ 13 000 rpm. Os reagentes de teste (1000 uL) foram então adicionados ao sedimento bacteriano e agitadas. Todas as diluições foram deixados a repousar à temperatura ambiente durante 30 minutos. Cada um foi, em seguida, centrifugou-se, seguido da remoção do reagente, lavagem MTSB, vórtice e centrifugação. O pellet formado foi então suspenso em 1000 uL MTSB e agitadas Os reagentes no terceiro experimento foram diluído (100%) soluções de AFC, CHX, Biotene & reg.; e água destilada. No quarto experimento eram soluções não diluídas de AFC, CHX, Biotene & reg; e água e quatro diluições, 1%, 5% destilada, 11,6% e 15%, cada um álcool. Em ambos os ensaios inóculos (1000 uL) de suspensão bacteriana foram centrifugadas durante 1 minuto a ~ 13 000 rpm. Os reagentes de teste (1000 uL) foram então adicionados ao sedimento bacteriano, vórtex e todas as diluições foram deixados a repousar à temperatura ambiente durante 5 minutos. Cada um foi, em seguida, centrifugou-se, seguido da remoção do reagente, lavagem MTSB, vortex e finalmente centrifugadas. Este foi então repetido, completando uma segunda lavagem com MTSB, uma centrífuga final e, por último, a suspensão em 1000 uL de MTSB. A preparação Bioscreen final em experimentos 1, 2, 3 e 4 consistiu em alíquotas (200 uL) das bactérias em combinação com a boca-lavagens orais, AFC, CHX, Bioténe & reg ;, água destilada e TSB serem colocadas em poços de favo de mel (Fig. 2) obtendo-se 90, 40, 25 e 45 amostras respectivamente. Cada alíquota foi dispensado cinco vezes, em diferentes cavidades, para garantir a uniformidade e reprodutibilidade. O óleo mineral, (0,1 mL), em seguida, as gotas foram dispensados em todos os poços para evitar a evaporação. Os poços foram em favo de mel, em seguida, colocado no Bioscreen microbiológica Crescimento Analisador durante 24 horas a uma ampla gama de comprimentos de onda de banda de 420 nm a 580 nm para monitorizar as alterações na densidade óptica. As curvas de crescimento e tempo de duplicação foram então calculados RESULTSExperiment # 1: Crescimento de S. mutans foi totalmente inibida a concentrações de 5% e 1% do AFC e CHX (Figs.3 & amp; 4).. As bactérias foram mortas e não há mudanças significativas na densidade óptica (OD) foram anotadas. Sob as mesmas condições, o crescimento bacteriano em todas as outras diluições (Figuras 5 & amp;. 6). O crescimento mais notável ocorreu no 1% Biotene & reg; diluição com um OD max = 1,383 e um tempo de duplicação (td) = 1,4734 h. Isto foi seguido por 0,01% Bioténe & reg; diluição com um OD max = 1.328 e uma hr Td = 1,3053. O maior tempo de duplicação foi de 0,01% CHX a 2,1013 h. As diluições do AFC e CHX-boca lavagens que eram ineficazes na inibição do crescimento bacteriano tinha uma DO de aproximadamente 1,3 nm, o que foi semelhante para a DO de Bioténe & reg; e os controles Experiment # 2:. O tempo de geração e OD max foram semelhantes para todas as diluições das diferentes reagentes. Crescimento começou a cerca de duas horas para cada diluição. Não parece ter havido alguma inibição de crescimento em comparação com o experimento de incubação inicial, no entanto, os reagentes não foram eficazes, e as bactérias ainda cresceu (Fig. 7) Experiment # 3:. A controles, H2O e TSB, não matar as bactérias e nem Biotene & reg; com um tempo de OD máximo e geração de 0,891 e 1,5516 h, respectivamente. Exposição a curto prazo de não diluído CHX crescimento completamente inibida de S. mutans. AFC inibiu o crescimento bacteriano SM durante seis horas, altura em que apareceu para ser o crescimento bacteriano. O OD máximo e tempo de duplicação foram 1.288 e 1,1213 h, respectivamente. O OD máximo e tempo de geração para Biotene & reg; foram 0,891 e 1,5516 h, respectivamente (Fig.8) Experiment # 4:. Cinco minutos de exposição a curto prazo de não diluído AFC e CHX inibiram o crescimento de S. mutans. O crescimento bacteriano ocorreu em todos os outros reagentes e diluições de álcool com o crescimento mais notável ocorrendo em não diluído Biotene & reg; (OD max = 1.629), seguido por 1% de etanol (OD max = 1.598). O maior tempo de duplicação foi de 5% de etanol a 1.706 horas (Fig.9). DISCUSSIONThe observações e resultado nesta investigação sugerem que a clorexidina sem álcool é uma boca-lavagem eficaz na supressão do crescimento de S. mutans . O primeiro ensaio, testaram o crescimento de bactérias na presença de diluições diferentes (5%, 1%, 0,1%, 0,01%) dos reagentes testados. A partir da primeira experiência, observou-se que a tão baixo quanto 1% AFC e CHX foram eficazes em inibir o crescimento das bactérias. Biotene & reg; não inibiu o crescimento microbiano e os resultados dos controlos, água destilada e MTSB, foram como esperado, não matar ocorreu. Após o primeiro julgamento, a segunda consistiu em investigar o resultado de bactérias expondo a 1% e 5% de diluições de enxaguatórios antimicrobianos durante 30 minutos. tempo de geração e OD max foram semelhantes em ambos diluições dos diferentes reagentes. Além disso, não parece ter havido alguma inibição de crescimento em comparação com a experiência de incubação inicial, tal como o crescimento das bactérias foi adiada. No entanto, os reagentes não foram eficazes, e os S. mutans ainda cresceu. A intenção para o terceiro experimento foi simular uma situação mais clínica. Os S. mutans foram expostos à boca-lavagens antimicrobianas não diluídas, AFC, CHX, Biotene & reg ;, e água destilada por 5 minutos. A CHX não diluído contendo álcool inibiu completamente o crescimento de S. mutans. Por outro lado, o AFC inibiu o crescimento bacteriano durante 6 horas, altura em que apareceu para ser o crescimento de bactérias. Neste ponto, a contaminação de outros microbiota era suspeito na boca-lavagem AFC. Por esta razão, a experiência foi repetida. Além disso, com ou sem álcool era uma variável de confusão foi a ser determinado. Este quarto ensaio demonstraram que após exposição de 5 minutos a boca não diluídas-enxaguamentos antimicrobianos e diferentes diluições de álcool não havia nenhum crescimento bacteriano tanto no reagente AFC ou o reagente CHX. Além disso, as diluições de álcool não inibiu o crescimento das S. mutans Embora o último ensaio demonstraram que não existe qualquer diferença na eficácia entre a AFC e CHX contendo álcool, são necessários mais estudos.; (1) para determinar a diferença na formulação e (2) os mecanismos que causam a inibição das bactérias entre o AFC e CHX contendo álcool; e clinicamente teste e confirmar a consistência dos resultados apresentados neste estudo. os dados actuais sugerem que existe apenas um estudo clínico demonstrando a eficácia de AFC com respeito à inibição da placa. Os resultados desse estudo foram consistentes com esta Na comparação Yokoyama & rsquo;. Estudo s (2009), Biotene & reg; verificou-se ser eficaz na inibição do crescimento de Aggregatibacter actinomycetemcomitans, a diferentes espécies de bactérias. No entanto, neste projeto de pesquisa foi ineficaz contra S. mutans. Talvez Biotene é eficaz contra espécies bacterianas que são principalmente anaeróbio e encontrou subgengivalmente. Se este era o caso, pode-se postular que Biotene seria melhor ser servido como um antibacteriano boca-enxaguar por doença periodontal, que, CHX boca-lavagens deve ser reservado principalmente para a prevenção de cáries. CONCLUSION1) Alcohol-Free a cloro-hexidina é eficaz na supressão do crescimento bacteriano de S. mutans e, portanto, é uma alternativa viável para a clorexidina contendo álcool. 2) álcool não contribuir para as propriedades antimicrobianas de Chlorhexidine.OH Rebecca Cohen, DDS, Paed Cert, FRCD (C), classe de 2011; Faculdade Advisor, Casey Chen, BDS, PhD, DDS Agradecimentos:. Dr. Casey Chen por seu encorajamento e Jason Jee e Christine Hwang por sua ajuda e apoio. Este trabalho de pesquisa é apresentado em cumprimento parte dos requisitos necessários para a conclusão do Programa de Odontologia Avançada Pediátrica do Ostrow Escola Herman de Odontologia da USC. REFERENCES1. Bolanowski SJ, Gescheider GA, Sutton SV. Relação entre a dor oral e concentração de etanol em bochechos. J periodontal Res 30: 192-197, 1995. 2. Eldridege et ai. A eficácia de um álcool livre bochecho clorohexidina como um agente antimicrobiano. O journ de Pros Dent 80 (6): 685-690, 1998. 3. Flotra L, P Gjermo, Rolla L, efeitos colaterais da Waerhaung J. colutórios clorexidina. Digitalização J Dent Res 79: 119-125, 1971. 4. Gunsolley JC. A eficácia clínica de bochechos antimicrobianos. Journal of Dentistry 38: S6-S10, 2010. 5. Kocak MM, Ozcan S, S Kocak, Topuz O, Erten H. Comparação da eficácia de três diferentes soluções bochecho na diminuição do nível de Streptococcus mutans na saliva. Eur J Dent 3: 57-61, 2009. 6. Lassiter MO, Newsome AL, Sams LD, Arnold RR. Caracterização da interação entre a lactoferrina com Streptococcus mutans. J Dent Res 66: 480-485, 1987. 7. Loe H, Schiøtt CR. O efeito de bochechos e aplicação tópica de clorexidina sobre o desenvolvimento da placa e gengivite no homem. J Perio Res 5: 79-83, 1970. 8. Screenivasan P, biocidas Gaffar A. antiplaca e resistência bacteriana: uma revisão. J Clin Periodontol 29: 965-974, 2002 9. Smith RJ, Moran J, Addy M, Dohery F, Newcombe RG. coloração comparativo in vitro e propriedades inibidoras de placa in vivo de 0,12% e 0,2% de clorexidina colutórios. Journal of Clin Perio. 22 (8): 613-617, 1995. 10. Tenovuo, J. Aplicações clínicas de proteínas do hospedeiro antimicrobianos lactoperoxidase, lisozima e lactoferrina em xerostomia: eficácia e segurança. Doenças Orais 8: 23-29, 2002. 11. Van Strydonck DAC, Timmerman MF, van der Velden U, van der Weijden GA. inibição da placa de dois bochechos de clorexidina commervcally disponíveis. J Clin Periodontol32: 305-309, 2005. 12. Warde et ai. Um estudo de Fase II de Biotene no tratamento da xerostomia postradiation em pacientes com câncer de cabeça e pescoço. Suppor Cancer Care 8: 203-208, 2000. Referências Bioscreen 1. D & rsquo; Arrigo M, Garcia de Fernando GD, Velasco de Diego R, Ordonez JA, George SM, Pin C. Medição indirecta da distribuição de tempo de atraso de células individuais de Listeria innocua em alimentos. Appl Environ Microbiol 72: 2533-8, 2006. 2. Francois K, Devlieghere F, Standaert AR, Geeraerd AH, Cool I, Van Impe JF, Debevere J. Os fatores ambientais que influenciam a relação entre a densidade óptica e contagem de células de Listeria monocytogenes. J Appl Microbiol 99: 1503-1515, 2005. 3. Metris A, George SM, Baranyi J. A utilização de tempos de detecção de densidade óptica para avaliar o efeito de ácido acético sobre a cinética de uma única célula. Appl Environ Microbiol 72: 6674-6679, 2006. 4. Murakami C, Kaeberlein M. Quantificação levedura tempo de vida cronológica pelo crescimento de células envelhecidas. Jove. 27. http://www.jove.com/index/Details.stp? ID = 1156, doi: 10.3791 /1156
: as bactérias selecionadas para este estudo é encontrada por via oral na saliva, superfícies dos tecidos moles e dentro do biofilme dental; Streptococcus mutans (estirpe GS5)
crescimento de microorganismos pode ser medido pelo Sistema de Análise de curva de crescimento Automated Bioscreen C (Fig. 1). Bioscreen C é um controlado por computador incubador /leitor /agitador. Tem 8 filtros que variam de 405 nm a 600 nm, incluindo um filtro de banda larga e que utiliza uma microplaca de favo de mel para medir alterações na densidade em função do tempo para produzir curvas de crescimento microbiológicos óptico.
Quatro experimentos originais foram realizados testes de clorexidina 0,12% sem álcool (AFC), 0,12% gluconato de clorexidina (CHX) e Biotene & reg ;, boca-enxaguatórios bucais. Todos os reagentes foram filtrados microbianos com 0,22 milímetros filtro microporoso. A água destilada foi utilizado como controlo negativo, enquanto um meio de cultura esterilizado, tripticase de caldo de soja (TSB) suplementado com extracto de levedura, foi usado como o controlo positivo. S. mutans (SM) GS5 estirpe foi cultivada em 1,5% de caldo de soja tripticase, suplementado com 0,3% de extracto de levedura, 0,75% de Bacto-agar e 2,5% de soro de cavalo inactivado pelo calor e incubadas durante 24 horas a 37 ° C e; C. MTSB fresco (900 uL) foi inoculado com as bactérias (100 uL) e as suspensões foram adicionadas aos agentes microbianos teste e água destilada.
.