ligamento periodontal arte abstracta
Fundo
Os resultados de estudos em animais e humanos indicam que uma suspensão de hidróxido de cálcio oleosa (OCHS) precoce pode melhorar a cicatrização de feridas no tratamento da periodontite. O hidróxido de cálcio como o componente principal é bem conhecido pela sua actividade antimicrobiana, no entanto, actualmente o efeito de OCHS sobre a influência da cicatrização de feridas periodontal /regeneração é ainda muito limitada. O objectivo deste estudo in vitro foi investigar o efeito da OCHS em bactérias periodontopatogênicos, bem como na adesão e proliferação de osteoblastos e fibroblastos do ligamento periodontal.
Métodos
osteoblastos humanos alveolares (HAO) e ligamento periodontal (PDL fibroblastos) foram cultivadas em 3 concentrações de OCHS (2,5, 5 e 7,5 mg). Adesão e proliferação foram contadas até 48 h e a mineralização foi ensaiada após 1 e 2 semanas. Além disso actividade inibidora do crescimento potencial nos microorganismos associados com a doença periodontal (por exemplo, Porphyromonas gingivalis, Tannerella Forsythia
, Aggregatibacter actinomycetemcomitans
), bem como a influência de periodonto e OCHS sobre as contagens Hao e PDL fibroblastos foram determinados.
resultados
muito mais do que um aumento de 2 vezes em células aderentes HAO foi observada a quatro horas após a aplicação do OCHS quando comparado com o grupo de controlo (p = 0,007 para 2,5 mg). A proliferação de células HAO no 48 h foi estimulado pelas concentrações moderadas (2,5 mg, 5 mg) de OCHS (cada p & lt; 0,001), ao passo que uma concentração alta (7,5 mg) foi de OCHS inibidora (p = 0,009). Mineralização foi observada somente para células HAO tratados com OCHS. OCHS não exerceu qualquer efeito positivo sobre a fixação ou a proliferação de fibroblastos PDL. Embora OCHS não tem um efeito antibacteriano, ele influenciou positivamente fixação e proliferação de células Hao e fibroblastos PDL na presença de periodontopatógenos.
Conclusões
O presente dados sugerem que OCHS promove apego osteoblastos, proliferação e mineralização em um forma dependente da concentração e os resultados são mantidos na presença de patógenos periodontais
Palavras-chave
oleosa de cálcio em suspensão de hidróxido Humanos osteoblastos alveolares fibroblastos de ligamento periodontal material suplementar periodontopatógenos Electrónicas | a versão online deste artigo (doi:. 10. 1186 /1472-6831-14-9) contém material suplementar, que está disponível para usuários autorizados.
Fundo
a periodontite é uma doença inflamatória crónica induzida por bactérias, e um desequilíbrio do sistema imunológico defesa inata marcadamente contribui para a destruição do periodonto [1]. Um pequeno grupo de anaeróbio predominantemente Gram-negativos ou bactérias microaerofilia dentro da placa está associado com a iniciação e progressão da periodontite. Organismos fortemente implicados como agentes etiológicos da periodontite incluem Aggregatibacter actinomycetemcomitans
, Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsythia Comprar e Treponema denticola
[2]. Além disso, outras espécies, tais como Campylobacter rectus
, Eubacterium nodatum
, Fusobacterium nucleatum
, Prevotella intermedia
, Parvimonas micra, Streptococcus constellatus
apoio patogênese da doença [2, 3]. Bactérias interagir com as células hospedeiras resultando em expressão de mediadores inflamatórios, transição de neutrófilos polimorfonucleares para o sulco gengival [1, 4]. resposta do hospedeiro contribui para a destruição dos tecidos e a reabsorção óssea com o mecanismo principal da razão de RANKL (receptor activador do factor nuclear-ligando-kB) de osteoprotegerina [1].
Tem sido bem documentado que a resolução da inflamação e parar de progressão da doença pode ser previsivelmente obtido com a terapia periodontal cirúrgica não-cirúrgico e convencional [5]. O objetivo final da terapia periodontal é no entanto a regeneração de estruturas de suporte do dente perdido devido à doença periodontal e deve resultar na formação de novo cemento radicular, ligamento periodontal e osso [6]. O tratamento com as membranas de barreira, isoladamente ou em combinação com diferentes materiais de enxerto, a utilização de substâncias activas biológicas, tais como proteínas da matriz do esmalte ou factores de crescimento têm sido mostrados para promover periodontal regeneração e para melhorar significativamente os resultados clínicos evidenciados por sondagem redução profundidade, ganho de inserção clínica e defeito de preenchimento [7]. Alguns dos materiais têm sido descritos para actuar antimicrobiana, por exemplo
., Derivados da matriz do esmalte inibir o crescimento de P. gingivalis
[8]. Um estudo de análise da influência de diferentes biomateriais cinco utilizado para cirurgia periodontal regenerativa contra dois A. actinomycetemcomitans
mostraram actividade antimicrobiana dos dois materiais contra uma das duas estirpes testadas, mais inibitória foi uma suspensão de hidróxido de cálcio oleosa [9].
Esta pasta de hidróxido de cálcio contendo oleoso (OCHS) (Osteora®, anteriormente Osteoinductal®, o DFS-Diamon Riedenburg GmbH, Alemanha) foi sugerido que possuem propriedades que podem afectar positivamente periodontal cicatrização de feridas /regeneração [10-14]. Baseia-se hidróxido de cálcio (Ca (OH)
2) e utiliza uma substância de suporte que consiste em sinteticamente produzido pedum oleum porcino e vaselinum álbum. O hidróxido de cálcio, um pó branco inodoro, com uma baixa solubilidade em água, tem propriedades antibacterianas por a libertação de iões hidroxilo altamente reactivos em fluidos aquosos que danifica as membranas citoplasmáticas, proteínas e ADN [15]. Em endodontia é usado como um agente de protecção da polpa [16], como desinfectante para o tratamento do canal radicular [17] e para apicificação após a morte de celulose [18]. Na polpa, uma necrose superficial induzido pelo pH elevado ocorre com uma resposta inflamatória leve e formação de tecido duro no ambiente [19].
Diversos estudos em animais que foram avaliados os efeitos de OCHS sobre a regeneração óssea em vários tipos de defeitos diferentes resultados gerados [10, 11, 20, 21]. Em um modelo de regeneração óssea guiada usando calvária minipig, OCHS não conseguiu exercer propriedades osteoindutoras e cicatrização óssea dificultada quando usado em conjunto com a regeneração óssea guiada [22]. Além disso, a cura de implantes endosseous não foi melhorada quando aqueles foram inseridos em conjunto com OCHS [21]. Por outro lado, a aplicação de OCHS durante a fase de osteotomia de distracção osteogénese melhorou a formação de osso novo [10] enquanto que em defeitos periodontais intra-ósseos criados experimentalmente, a aplicação de OCHS em conjunto com cirurgia de acesso aba promoveu a regeneração periodontal [11].
resultados variando relacionados com cicatrização de feridas e a regeneração foram também encontradas nos poucos estudos clínicos. Num estudo, OCHS melhorada no início de cura de feridas, quando utilizado em conjunto com a terapia não cirúrgica [12]. Em outro ensaio clínico controlado avaliar a cicatrização de defeitos intra-ósseos tratados com cirurgia tampa de entrada com e sem OCHS, significativamente maior bolso profundidades reduções e ganhos de nível clínico de inserção foram encontrados nos defeitos tratados cheios de OCHS em comparação com os controles (ou seja, acesso a cirurgia de retalho sozinho ) [13]. Pelo contrário, um outro estudo clínico controlado recente usando um design semelhante não demonstrou quaisquer resultados superiores após a aplicação de OCHS quando comparado apenas com cirurgia de acesso retalho [23].
Embora muita investigação foi obtida em modelos animais e clínicos , o conhecimento sobre o seu modo de acção e os efeitos sobre células do ligamento periodontal (PDL), os osteoblastos de formação óssea, bem como micróbios orais ainda é limitada. O objetivo do presente estudo foi de duas vezes; 1) Para determinar um potencial atividade antimicrobiana de OCHS incluindo os seus componentes contra espécies bacterianas envolvidas na patogênese da periodontite e 2) para determinar o efeito na adesão e proliferação de células hospedeiras (fibroblastos de ligamento periodontal e osteoblastos).
Métodos
As substâncias de ensaio
OCHS (Osteora®, DFS-DIAMON GmbH, Riedenburg, Alemanha) foi usado. De acordo com as indicações do fabricante é composto por 20% w /w de Ca (OH) 2, 40% pedum oleum e 40% álbum vaselinum. Na concepção experimental, a utilização da própria OCHS, bem como Ca (OH) 2 e oleum pedum foram usadas como substâncias de ensaio.
Determinação da eficácia antimicrobiana da suspensão de hidróxido de cálcio oleosa
As espécies seguintes foram testados nos ensaios antimicrobianos: F. nucleatum
ATCC 25586, P. intermedia
ATCC 25611, P. gingivalis
(ATCC 33277 e três isolados clínicos), T. forsythia
ATCC 43037, A. actinomycetemcomitans
(Y4 e três isolados clínicos), C. reto
ATCC 33238, Eikenella corrodens
ATCC 23834, E. nodatum
ATCC 33099, P. micra
ATCC 33270, e Capnocytophaga gingivalis
ATCC 33624. Todas as estirpes foram precultivated a 37 ° C em condições adequadas (anaeróbio excepto para A. actinomycetemcomitans
- 5% de CO 2) 42 h antes de experiências. Modificação agar de soja tríptica [24] foi utilizado como meio de cultura.
Em primeiro lugar, a técnica de diluição de micro-caldo foi usado para determinar as MICs. Após subcultura de estirpes bacterianas, um inoculo definido (McFarland 0,5) foi adicionado numa proporção de 1: 9 para caldo contendo as substâncias de ensaio. Oleum-pedum (solubilizado com Tween 20 numa razão 1: 1) foi testado com uma concentração de 0,625% - 20%, Ca (OH) 2 numa concentração de 3,13 mg /ml - 100 mg /ml adaptado para a concentração disponível em OCHS. Em testes experiências oleum pedum, cada tubo de ensaio continha 20% de Tween 20. Após um tempo de incubação de 42 h (18 h de aeróbios), o crescimento de micróbios foi analisada por verificação visual da turbidez e a subcultura. Para Ochs agentes DMSO como solvente, o Tween 20 e diferentes óleos foram comprovadas, mas foi impossível para solubilizar OCHS. Portanto, os métodos de referência para determinação da atividade antimicrobiana contra anaeróbios e outros microorganismos de crescimento lento (microbroth-diluição, agardilution) não eram aplicáveis. Finalmente, um método de difusão em ágar modificado foi utilizado como se segue: Cem uL de suspensão bacteriana (MacFarland 0,5) foram espalhadas em placas de agar (agar de Wilkins Chalgren suplementado com 5% de sangue). Em seguida, cada duas aberturas foram preparadas usando um furador de cortiça (7 mm de diâmetro). Depois disso, a diferença foi cheia com 100 mL de agar, seguido pela substância teste (50 mg e 100 mg de OCHS). Após incubação a 37 ° C em atmosfera anaeróbica durante 42 h, as zonas de inibição foram medidos.
Para excluir um efeito de promoção do crescimento de OCHS, suspensões de estirpes bacterianas seleccionadas (P. gingivalis
ATCC 33277, P. gingivalis
M5-1-2, A. actinomycetemcomitans
Y4 e F. nucleatum
ATCC 255866) foram adicionados a 200 mL de caldo nutriente adicionado com 50 mg de OCHS (20% w /v). Tubos foram incubados durante 24 h por via anaeróbia. Imediatamente antes de remover 25 ul de mistura, as suspensões foram misturadas por agitação em vórtex e curta centrifugação a 400 g
. Os removidos 25 ul foram diluídas em série e cada 100 ul foram plaqueadas em placas de agar. Os números de bactérias viáveis foram determinadas por contagem de unidades formadoras de colónias (ufc).
Efeito da suspensão de hidróxido de cálcio em osteoblastos oleosa e fibroblastos do ligamento periodontal
Na segunda parte do estudo, os osteoblastos alveolares humanos (HAO) quanto bem como foram utilizados fibroblastos humanos PDL. Ambos os tipos de células foram obtidas a partir de três pacientes saudáveis durante a cirurgia (extracção de dentes por razões de ortodontia). fragmentos de ossos humanos foram cultivados a partir de um modelo de explante como descrito anteriormente [25, 26]. A seguir à digestão com colagenase, as células foram plaqueadas HAO em frascos T-75 contendo o meio de cultura celular (DMEM, Invitrogen, Carlsbad, CA) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS, Invitrogen). PDL células foram colhidas a partir da terceira porção média do dente e colocadas em frascos T-25 de cultura de células até uma confluência de células [27]. O meio de cultura foi DMEM suplementado com FBS a 10%. Para as experiências, os dois tipos de células foram utilizadas em passagens 4-6. A identidade das células foi confirmada como descrito recentemente [26, 27]. Usando o tecido para fins de pesquisa foi aprovado pela comissão de ética do cantão de Berna. Todos os pacientes deram o seu consentimento.
Nas experiências, as lâminas foram colocadas em placas de 24 poços e cobertas com as substâncias de teste. As substâncias de teste foram OCHS em três concentrações diferentes (1 L, 2 L, 3 L). 1 L representada 2,5 mg de material total (o que significa 2 L é equivalente a 5 mg e 3 L a 7,5 mg). Além disso, foram utilizados o hidróxido de cálcio em solução aquosa (1,5 mg, correspondendo a 3 L de OCHS) e substância oleum pedum (3 mg, correspondendo a 3 L de OCHS). lâminas descobertas serviram como controlos negativos. Imediatamente a seguir, as células HAO foram adicionados a uma densidade de 10000 células /poço e os poços foram incubados a 37 ° C com 5% de CO 2. As células foram fixadas e coradas para a adesão e proliferação experiências em 2 h, 4 h, 24 h e 48 utilizando coloração com DAPI. a diferenciação celular foi analisada por determinação da actividade da fosfatase alcalina e mineralização usando 2% de vermelho de alizarina S coloração 1 e 2 semanas após a sementeira. Cada 10 campos de 1 mM 2 foram contadas. Os campos foram selecionados igualmente distribuídos a partir de toda a lâmina. Uma grade de contagem e foi usado cada subcampo (50 mm × 50 mm) com coloração positiva para noduli cálcio foi contado em relação aos números totais de subcampos; a média foi utilizada como um único valor para análise. A mineralização foi medida 1 e 2 semanas após o início das experiências. Para garantir que apenas a mineralização das células foi contado, OCHS sem células foi utilizado como um controlo negativo. Do mesmo modo a células
Hao, foram determinados os efeitos sobre os fibroblastos PDL. As lâminas que foram colocadas em placas de 24 poços foram cobertas com as substâncias de teste. PDL fibroblastos foram adicionados a uma densidade de 10.000 células /poço. As células foram fixadas e coradas para a adesão e para as experiências de proliferação em 2 h, 4 h, 24 h e 48 h, usando coloração com DAPI como descrito para as células Hao.
Determinação do efeito da suspensão de hidróxido de cálcio oleoso em PDL fibroblastos e osteoblastos interacção com microrganismos
a concentração de 2 L (5 mg) foi OCHS seleccionados e colocados em cada poço de uma placa de 24 poços para experiências incidindo sobre a interacção de células hospedeiras com estirpes bacterianas.
células Hao e fibroblastos respectivamente PDL foram semeadas nos slides com e sem cobertura de 2 U de OCHS. A. actinomycetemcomitans
Y4, bem como a combinação de P. gingivalis
ATCC 33277, foram adicionados T. Forsythia
ATCC 43037 e T. denticola
ATCC 35405. A carga bacteriana foi sempre 10 6 por poço. As células Hao e fibroblastos PDL, respectivamente, foram fixados e corados em 4 h. A análise estatística
Excepto para os ensaios antimicrobianos (réplicas) independentes, pelo menos, seis experiências independentes foram feitas por grupo. Mais do que dois grupos independentes foram comparados por ANOVA de uma via seguido por análise post hoc LSD para comparação com os controlos (actividade de OCHS e seus componentes em células Hao e fibroblastos PDL). A análise estatística foi feita por meio do teste t de Student para duas amostras independentes (efeito de OCHS em células HAO interação "e PDL fibroblastos" interação com bactérias).
Resultados da suspensão de hidróxido de cálcio oleosa não age antibacteriano
os valores de MIC de pedum oleum e hidróxido de cálcio (os principais componentes de OCHS) são apresentados na Tabela 1. Considerando pedum oleum não exerceu qualquer efeito antibacteriano, Ca (OH) 2 foi inibidora; os valores de MIC foram no intervalo de 6,25-25 mg /ml.Table 1 concentrações mínimas inibidoras dos componentes de OCHS (pedum oleum porcino e hidróxido de cálcio), determinado pela técnica de diluição de micro-caldo
Porcina oleum-pedum
Ca (OH) 2
F. nucleatum
ATCC 25586
& gt; 20%
6,25 mg /ml
P. intermedia
ATCC 25611
& gt; 20%
6,25 mg /ml
P. gingivalis
ATCC 33277
& gt; 20%
12,5 mg /ml
P. gingivalis
M5-1-2
& gt; 20%
12,5 mg /ml
P. gingivalis
J430-1
& gt; 20%
25 mg /ml
P. gingivalis
Marl
& gt; 20%
25 mg /ml
T. forsythia
ATCC 43037
& gt; 20%
12,5 mg /ml
A. Actinobacillus
Y4
& gt; 20%
12,5 mg /ml
A. Actinobacillus
J1
& gt; 20%
12,5 mg /ml
A. Actinobacillus
J2
& gt; 20%
12,5 mg /ml
A. Actinobacillus
J7
& gt; 20%
25 mg /ml
C. reto
ATCC 33238
& gt; 20%
12,5 mg /ml
E. corrodens
ATCC 23834
& gt; 20%
50 mg /ml
E. nodatum
ATCC 33099
& gt; 20%
12,5 mg /ml
P. micra
ATCC 33270
& gt; 20%
25 mg /ml
C. gingivalis
ATCC 33624
& gt; 20%
12,5 mg /ml
Como mencionado nos materiais e métodos, devido à insolubilidade do OCHS, uma técnica de difusão em ágar modificado foi usada para determinar um possível efeito anti-microbiano de OCHS. Estas experiências, porém, não revelou qualquer zona de inibição por ochs nas duas concentrações testadas. Os experimentos finais cultivar suspensões bacterianas em caldo nutriente sublinhou que OCHS não influencia o crescimento de periodontopatógenos de qualquer forma. Nem o crescimento de supressão nem efeitos promotores do crescimento eram visíveis; diferenças para os controlos foram sempre inferiores a 0,2 log 10 CFU (dados não mostrados). Tem de ser notado que, devido à insolubilidade do OCHS, os tubos continha duas camadas; um dos OCHS e um de caldo. Assim, apenas com os compostos de interface libertados a partir OCHS pode interferir com a bactéria.
Suspensão de hidróxido de cálcio oleosas podem promover a adesão de osteoblastos e a mineralização, mas não afecta a adesão e proliferação de fibroblastos PDL
adição de OCHS promovida a fixação das células HAO . Após 2 h, 11,00 ± 4,90 células /mm 2 aderidos a uma superfície coberta com 2 L de OCHS. Usando 3 U o valor foi 11,67 células ± 2,89 /mm 2. Estas diferenças foram significativas em comparação com o controlo, onde 6,57 ± 3,55 HAO células foram encontrados por mm 2 na superfície. Após 4 h, 20,33 ± 14,13 HAO células /mm 2 foram contadas após cobertura com 1 L de OCHS e 18,11 ± 6,66 HAO células /mm 2 ao 3 U de OCHS foram utilizados sendo significativamente diferente dos controlos ( 8,67 ± 3,50 células HAO /mm 2). proliferação estimulada foi encontrado 48 horas após o início dos experimentos e cobertura com 1 U e 2 U de OCHS (1 U: 46,00 ± 13,11 HAO células /mm 2, 2 U: 46,67 ± 18,23 células HAO /mm 2 em comparação com o controle: 26,89 ± 7,25 células HAO /mm 2). Em contraste com o 1 U e 2 U de OCHS, a elevada concentração de 3 L inibiu significativamente a proliferação de células HAO (13,44 ± 5,20 HAO células /mm 2). Uma influência do Ca usado (OH) concentração 2 não foi registrado. Cobertura com pedum oleum foi seguido por uma diminuição do número de células 24 h após a adição das células. Os resultados, incluindo valores significativos são apresentados na Figura 1. Figura 1 adesão e proliferação de A) células Hao e B) fibroblastos PDL (média e desvio padrão) depois de cada cobertura com diferentes quantidades da suspensão de hidróxido de cálcio (Ochs oleoso), assim como 1,5 mg Ca (OH) 2 e 3,0 mg pedum oleum (valores de p em comparação com os controlos foi determinada por análise post hoc LSD após ANOVA).
A diferenciação e mineralização das células HAO também foi analisada. Em todas as experiências foram encontrados apenas as células coradas positivamente HAO para a fosfatase alcalina. Sem adição de OCHS, não mineralização estava presente na superfície. Quando a superfície foi coberta com OCHS, mineralização extracelular de HAO foi detectável após uma semana (5,57 ± 1,97% área manchada; Figura 2). A quantidade não se alterou significativamente após duas semanas (4,12 ± 1,59%). Figura mineralização 2 celular corado com vermelho de alizarina uma semana após a semeadura células Hao. A mineralização é visível pela cor-de-rosa (→), A) células HAO não tratados, B) células HAO semeadas em OCHS.
Adição de OCHS não têm qualquer influência significativa na fixação de fibroblastos PDL. proliferação reduzida foi encontrada 48 horas após o início dos experimentos e cobertura com 3 U de OCHS (13,22 ± 4,12 PDL fibroblastos /mm 2) em comparação com os controles (33,89 ± 17,48 PDL fibroblastos /mm 2). Em contraste, o Ca (OH) 2 estimulou a proliferação de fibroblastos PDL (53,44 ± 15,22 PDL fibroblastos /mm 2, em comparação com valores de controlo no tempo de ponto de 48 h (Figura 1). Os resultados
sugeriram um possível efeito citotóxico. Portanto, as células Hao e fibroblastos PDL foram semeadas em lâminas cobertas com as substâncias de ensaio como descrito acima. as células foram incubadas durante 4 h e 48 h. em seguida, a percentagem de células viáveis foi determinado pelo teste de exclusão de azul de tripano.
Uma maior percentagem notável de células mortas foi sempre encontrados após pré-tratamento com 1,5 mg de Ca (OH) 2 em comparação com controlos (cada p & lt; 0,001). A viabilidade das células determinada por teste de exclusão de tripano ligeiramente modificada após pré-tratamento com OCHS, a diferença com os controlos não tratados foi significativa para os fibroblastos PDL 4 h após o início experiências (Figura 3). Figura 3 percentagem de um viáveis) células Hao e B) fibroblastos PDL (média e desvio padrão) depois de cobertura com diferentes quantidades de suspensão oleosa de hidróxido de cálcio (OCHS), bem como 1,5 mg de Ca (OH) 2 e 3,0 mg pedum oleum determinada por exclusão de tripano de ensaio (valores de p em comparação com os controlos foi determinada por análise post hoc LSD após ANOVA).
Bactérias não interferem com o efeito da suspensão de hidróxido de cálcio em oleoso adesão e proliferação de osteoblastos e fibroblastos PDL
A adição de bactérias não alterou significativamente o número de células aderidas HAO quando as lâminas foram cobertas com 2 L de OCHS. Se A. actinomycetemcomitans
Y4 estava presente, um aumento de células HAO com 2 U de OCHS (25,08 ± 10,04 HAO células /mm 2) ainda era significativa em comparação com aqueles sem OCHS (controles). Surpreendentemente, a adição de bactérias reforçado o número de células HAO anexados (A. actinomycetemcomitans
Y4: 16,00 ± 4,44 células HAO /mm 2, P. gingivalis
, T. forsythia
, T. denticola
em mistura: 14,56 ± 4,07 células HAO /mm 2) sendo significativamente maior do que os controles (10,87 ± 8,43 HAO células /mm 2). Contato com bactérias não influenciou significativamente o número de fibroblastos PDL anexados (Figura 4). Figura 4 A ligação de A) e células B HAO) fibroblastos PDL (média e desvio padrão) 4 h após cobertura com e sem suspensão oleosa de hidróxido de cálcio (OCHS) e adição de A. actinomycetemcomitans Y4, bem como a combinação de P. gingivalis ATCC 33277 , T. forsythia ATCC 43037, T. denticola ATCC 35405 (p-valores em comparação com os controles e sem OCHS respectivamente, cada um foram determinadas pelo teste t de Student).
Discussão e conclusões
OCHS é uma suspensão oleosa, que contém Ca (OH) 2 como o constituinte activo. Outros componentes são os Tauri oleum pedum produzidos sinteticamente, um material de suporte contendo triglicéridos incluindo o ácido óleo, ácido palmitin, ácido hexadecen e álbum vaselinum.
Um efeito antibacteriano por ochs não foi observada mesmo em concentrações extremamente elevadas, realizando uma modificado ágar teste. Apenas um estudo anterior relatou sobre os efeitos da OCHS sobre periodontopatógenos. Nesse estudo, OCHS agiu inibitório sobre A. actinomycetemcomitans
estirpe ATCC 33384 (sorotipo c), no entanto não se observou efeito antibacteriano seguinte cultura de A. actinomycetemcomitans
estirpe ATCC 43718 (serotipo b) com OCHS [9]. Nós também incluímos no nosso estudo um isolado clínico pertencente ao sorotipo c. Em contraste com os resultados descritos anteriormente [9], não observamos qualquer efeito antibacteriano após a aplicação com OCHS no presente estudo em ambos cepas testadas de A. actinomycetemcomitans
.
Devido à insolubilidade do material, nós apenas foram capazes de determinar as concentrações inibitórias mínimas dos componentes individuais de OCHS por uma técnica de diluição de micro-caldo. Observou-se que, embora oleum pedum não tem qualquer propriedade antibacteriana, a utilização de hidróxido de cálcio em concentrações elevadas, tais como aquelas presentes em OCHS actuou como inibidor do crescimento. O hidróxido de cálcio é amplamente utilizado no tratamento endodôntico e em evidência vitro demonstra que suprime o crescimento de Candida albicans
[28] e algumas outras bactérias anaerobically crescimento [29], apesar de eficácia antimicrobiana limitada traduziu in vivo na sequência da análise de canais radiculares pós -Tratamento [30, 31]. Nos nossos ensaios in vitro, em contraste com o hidróxido de cálcio, OCHS não tem qualquer efeito anti-bacteriano o que pode sugerir um efeito neutralizador dos outros componentes de OCHS ao hidróxido de cálcio. Devido à natureza da terapia periodontal, bactérias associadas com periodontite deve ser eliminado ou reduzido em qualquer modalidade de tratamento. A actividade antimicrobiana falta de OCHS sugere o uso adicional de um agente antimicrobiano, tal como cloro-hexidina. Por estas razões, a adição de 0,4% CHX a uma pasta de hidróxido de cálcio não afetou biologia celular osteoblástica in vivo [32].
No presente estudo, investigamos os efeitos da OCHS em HAO no apego e proliferação celular. Os nossos resultados demonstram o comportamento das células aumentou após cultura com OCHS e sensibilidade concentração demonstrada. Baixa a moderada concentrações de OCHS agiu claramente estimulante, enquanto que a aplicação com uma concentração de 3U (7,5 mg) demonstrou em parte os resultados negativos. Para retardar a libertação de Ca (OH) 2, OCHS contém uma elevada percentagem de pedum oleum. Nós investigamos HAO conta cultivadas na presença de pedum oleum e encontrou uma redução no comportamento das células follwing sua aplicação. Oleum pedum parece neutralizar a actividade estimuladora de Ca (OH) 2. Num modelo animal utilizando cápsulas de Teflon abertas, OCHS inibiu a formação óssea e reabsorção activa de OCHS não foi observada [20]. Pode-se sugerir que as propriedades em falta são degradáveis certamente do pedum oleum e um efeito mais pronunciado parece ser observada com concentrações crescentes. Uma segunda explicação lógica pode ser devido à citotoxicidade de OCHS. Embora oleum pedum impede a citotoxicidade de Ca (OH) 2, foram observados efeitos tóxicos para um determinado grau, quando OCHS foi utilizado em altas concentrações. Esta sensibilidade óbvia da concentração utilizada pode explicar em parte os diferentes resultados reportados em estudos animais e clínicos. Assim, seguindo os nossos primeiros conjuntos de resultados de experimentos, uma concentração moderada foi escolhido para experiências em curso com base em seus resultados positivos. Usando esta concentração, um aumento da mineralização dos osteoblastos foi encontrado 1 - 2 semanas após a sementeira com meio de cultura contendo OCHS. Recentemente, foi demonstrado que o Ca (OH) 2 é capaz de estimular a expressão de ARNm de sialoproteína óssea e Runx2 [33]. Runx2 é um fator de transcrição essencial na diferenciação dos osteoblastos [34] e sialoprote�a óssea é um marcador final para a diferenciação dos osteoblastos encontrados durante o processo de mineralização de osteoblastos [35].
Apesar dos efeitos estimulantes de OCHS em osteoblastos, OCHS não exerceu efeito positivo sobre a fixação ou a proliferação de fibroblastos PDL. Similarmente às nossas experiências Hao, a mais alta concentração utilizada de OCHS também reduziu a proliferação de fibroblastos após 48 h de PDL. Proliferação de fibroblastos PDL foi induzida por Ca (OH) 2 tal como descrito recentemente; mas, em contraste com os nossos resultados, OCHS também teve um efeito estimulador na proliferação em que estudo [36]. Em um estudo semelhante [14] estes autores encontraram alta fixação de fibroblastos PDL sobre superfícies radiculares OCHS tratados. As pesquisas futuras para determinar os mecanismos que influenciam a ligação das células através de integrina seus mecanismos moleculares a jusante em células hospedeiras de ligação e (por exemplo
. vias celulares) deve investigada.
Seguindo ensaio experimental de OCHS com células do periodonto, um co -cultura sistema foi concebido para determinar a influência de OCHS em células expostas a agentes patogénicos periodontais simultaneamente para simular um ambiente clínico. A exposição de células Hao e fibroblastos PDL para periodontopatogênicos bactérias não influenciou negativamente o efeito promotor de OCHS na adesão e proliferação destas células. Portanto, os resultados desta experiência demonstram a utilização potencial de OCHS, mesmo na presença de agentes patogénicos periodontais sem afectar o potencial benefício da OCHS. Surpreendentemente, a adição de bactérias reforçada o número de células HAO anexas. Este resultado deve ser tomado com cautela e pode ser associado com as condições de cultura in vitro. O efeito foi especialmente pronunciado quando A. actinomycetemcomitans
foi usado. O potencial citotóxico de periodonto é bem conhecida. Gingipains são responsáveis pela maior parte da actividade proteolítica de P. gingivalis
[37] e são capazes de inibir a proliferação de osteoblastos, fazendo com que a paragem em G1 precoce do ciclo celular, em [38].
