da arte abstracta
Fundo
perfil microbiológico subgengival associada a periodontite tem sido relatada a diferir significativamente por localização geográfica. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre um painel de patógenos bacterianos periodontais e periodontite crônica entre iemenitas.
Amostras Métodos
Subgengival DNA foram obtidos a partir de sites de doentes e saudáveis de 20 para não-fumantes, moderada a grave indivíduos com periodontite crônica. contagens absolutas (cópias de DNA bacteriano por amostra) e as contagens relativas (% das bactérias totais) de sete espécies periopathogenic representante /gêneros dos complexos de vermelho e laranja foram determinadas usando ensaios q-PCR Taqman.
Resultados
O q-PCR Os ensaios mostraram excelente linearidade (R
2 & gt; 0,99) e uma sensibilidade de 100 cópias /sample. A taxa de detecção foi de 100% para todas as espécies testadas /géneros excepto para P. gingivalis
e A. actinomycetemcomitans
que foram detectados em 97,5% e 67,5%, respectivamente. As contagens absolutas de log médio estavam na faixa de 2.41-6.53 cópias por amostra, enquanto contagens mediana relativa estavam na gama de 0,001-0,77%, sendo mais elevada para ambos fusobactérias e menor para A. actinomycetemcomitans
. Foram observadas correlações significativas entre espécies. Ajuste para comparações múltiplas (P≤0.0063), única T. forsythia, T. denticola
e P. micra
manteve associação significativa com a destruição periodontal. As últimas espécies, no entanto, mostraram a associação mais forte e foi encontrado em maiores proporções nos locais de periodontite em todos os sujeitos (3,39 vezes maior mediana). Não foram observadas diferenças significativas para P. gingivalis.
Conclusões
P. micra
em vez de P. gingivalis
aparece como um patógeno Keystone nesta amostra iemenita. No entanto, esses achados precisam ser validados em um estudo em maior escala antes que eles possam ser reivindicadas para representar variações étnicas na associação de patógenos de periodontite.
Palavras-chave
Microbiologia Pathogens Real-time PCR Parvimonas micra material suplementar Periodontite eletrônico
a versão online deste artigo (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-13) contém material suplementar, que está disponível para usuários autorizados
Fundo
periodontite representa uma gama de entidades clínicas. que são caracterizadas por destruição imunológica do dente estruturas de suporte em resposta ao desafio crónica por bactérias específicas no biofilme subgengival [1]. As últimas três décadas ou mais testemunhou uma explosão na nossa compreensão da microbiologia da periodontite. Estudos anteriores que empregam técnicas baseadas em cultivo recuperados cerca de 250 espécies de bactérias (at & gt; 1% de abundância relativa) a partir de amostras de placas [2]. Com a vasta aplicação de técnicas moleculares durante a última década, duplicar esse número de novas espécies foi identificado [3-5] trazendo a riqueza da microbiota subgengival de mais de 700 espécies bacterianas, cerca de 50% dos quais são incultivável.
enquanto a maior parte da microbiota subgengival é considerado comensais, várias espécies têm sido implicadas como agentes patogénicos periodontais. Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsythia
, e Treponema denticola
(o chamado complexo vermelho) até agora têm mostrado a associação mais forte com periodontite crônica [6]. Outros agentes patogénicos putativos incluem Fusobacterium
spp., Prevotella
spp., Campylobacter rectus
, Eubacterium nodatom
e Parvimonas micra
(anteriormente Peptostreptococcos micros
) [6]. filotipos incultivável como synergistetes
, TM7 e Treponema
taxa também são acreditados para jogar um papel patogênico na periodontite crônica [3, 4, 7]. Na verdade, acredita-se que a destruição periodontal é desencadeada por um consórcio bacteriana, em vez de um único agente patogénico [1].
Um número de técnicas de biologia molecular têm sido utilizados para a detecção e quantificação de agentes patogénicos em amostras de placa periodontais incluindo hibridação DNA-DNA , o tempo convencional e PCR real, e 16S rRNA clone sequenciamento [8]. Destes, PCR em tempo real, é a que permite a detecção mais sensível de tão baixo como 1,6 células por reacção [9, 10]. Também torna possível normalizar contagens de ADN alvo para contagens bacterianas totais da amostra de (a quantificação relativa), ajustando assim as variações de amostragem e fazer comparações entre amostras mais fiáveis [11, 12]. Surpreendentemente, PCR em tempo real não tem sido o mais amplamente utilizado no estudo de Microbiologia da periodontite como pode ser esperado. Perfil subgengival microbiana associada a periodontite tenha sido relatado que diferem significativamente pela localização geográfica independente de outros factores conhecidos para modificar subgengival composição microbiana [8, 13]. Torna-se prudente, portanto, que a obtenção de mais informações sobre a distribuição global de patógenos e padrões de sua associação com a doença periodontal pode melhorar a nossa compreensão das diferenças no papel que desempenham na periodontite em diferentes populações. Na ausência de dados sobre isso a partir do Oriente Médio, o objetivo do estudo foi avaliar a associação de sete periodontopatógenos com periodontite crônica em uma população iemenita usando ensaios de PCR quantitativo.
Métodos
estudar assuntos e exame clínico
Vinte indivíduos, 30-50 anos de idade, com moderada a periodontite crônica grave (com pelo menos um local por quadrante, com profundidade de bolsa ≥ 5 mm e perda de inserção & gt; 3 mm), foram recrutados entre os pacientes atendidos dental clínicas do hospital Al-Thawra, Sana'a, Yemen. Indivíduos que apresentaram menos de 20 dentes ou diagnosticados com periodontite agressiva (aqueles com primeiro molar típica /apresentação incisivo central) foram excluídos. Outros critérios de exclusão incluíram história de tabagismo, tratamento periodontal ou o uso anti-séptico antibiótico /oral no 6 meses, gravidez ou amamentação anterior, e qualquer ingestão sistêmica doença ou a medicação conhecida para modificar a inflamação periodontal.
O índice periodontal comunitário [14] foi utilizado para rastrear condição periodontal por um único, bem treinados e precaliberated examinador (Shuga-Aldin HM). Em indivíduos elegíveis, profundidade de bolsa (PD) para o bolso mais profundo em cada quadrante em milímetros foi estabelecida utilizando uma sonda Williams. O índice de placa [15], foi medido nas superfícies labiais /bucal e lingual /palatina dos dentes de índice. As características clínicas do grupo de estudo são apresentados na Tabela 1 1.Table características clínicas do grupo de estudo
Sexo (M /F%)
60/40
Idade , mediana (intervalo interquartil)
40 (30-45)
Plaque índice, mediana (intervalo interquartil)
1,5 (1,25-1,65)
profundidade de bolso em locais amostrados, mediana (intervalo interquartil)
5,5 (5,00-6,75)
o estudo foi realizado em conformidade com a declaração de Helsínquia. Foi aprovado pela médica e de Estudos de Saúde, Graduate College, Universidade de Cartum. O consentimento informado foi obtido de todos os assuntos.
Amostragem e extração de DNA
Para cada assunto, uma amostra subgingival pool do bolso mais profundo em cada quadrante (PD ≥ 5 mm) e outra de 4 sítios saudáveis (PD ≤ 3 mm , sem perda de inserção) foram obtidos, usando pontas de papel estéreis. placa supragengival foi removido antes da amostragem utilizando bolinhas de algodão estéreis. As amostras (40 no total) foram armazenados num tampão de baixa TE EDTA (Invitrogen, EUA), a -80 ° C até processamento.
No momento da extracção de DNA, as amostras foram centrifugadas a 15000 g durante 1 minuto e o sedimento foi ressuspensas em 180 ul de tampão de lisozima digestão (Tris-HCl a 25, pH 8,0, EDTA 2,5 mM, 1% de Triton X-100) contendo 20 mg /ml de lisozima, e incubadas a 37 ° C durante a noite. A digestão foi então sujeita a extracção de ADN utilizando o estojo de extracção de ADN genómico PureLink (Invitrogen, EUA); O ADN foi eluído em 100 l do tampão fornecido e armazenado a 4 ° C para análise subsequente.
Ensaios de PCR quantitativa
contagem total de bactérias, Fusobacterium
spp., Prevotella spp
., Aggregatibacter actinomycetemcomitans
(anteriormente Actinobacillus actinomycetemcomitans
), Parvimonas micra
(anteriormente Micromonas micra
ou Peptostreptococcus micros)
, Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsythia
, e Treponema denticola
foram detectados e quantificados nos extractos de ADN, utilizando tecnologia de PCR em tempo real Taqman [16]. As sequências de sondas e de iniciadores utilizados no estudo são apresentados na Tabela 2. Eles foram fornecidos por Primerdesign, Reino Unido, como optimizado e pronto para utilizar kits que também incluídos controlo positivo à base de plasmídeo (sequência inserida amplicão). Este último foi diluído em série para construir curvas padrão para quantificação absoluta das espécies de ensaio, e para avaliar a eficiência, sensibilidade e linearidade das assays.Table 2 sequências de iniciadores e sondas utilizados nos ensaios de PCR quantitativa
espécies de teste
seqüências 5'-3 '
gene alvo
tamanho do produto
Ref
A. actinomycetemcomitans
F-primário: GGRAGAATGGATGGCGATAT
hgpA
81 bp
Este estudo
R-primário: ATCAGAATGAACATAACCTATACCA
Probe: lias ATGAACGCAATTCAGCCCAGA ACTG-BHQ
P. micra
F-primário: TGAGCAACCTACCTTACACAG
16S rRNA
112 bp
[17]
R-primário: GCCCTTCTTACACCGATAAATC
Probe: lias ACCGCATGAGACCACAGAA TCGCA-BHQ
P. gingivalis
F-primário: ACGAATCAAAGGTGGCTAAGTT
fimA
85 bp
[17]
R-primário: TTAGTCGCATTTTCGGCTGAT
Probe: lias CCTGCTGTTCTCCATTATAAAC CATTACGG -BHQ
T. forsythia
F-primário: GATAGGCTTAACACATGCAAGTC
16S rRNA
99 bp
[17]
R-primário: GTTGCGGGCAGGTTACATAC
Probe: lias TTACTCACCCGTGCGCCGGTCG-BHQ
T. denticola
F-primário: GGGCGGCTTGAAATAATRATG
16S rRNA
92 bp
[17]
R-primário: CTCCCTTACCGTTCGACTTG
Probe: lias CAGCGTTCGTTCTGAGCCA GGATCA-BHQ
total de bactérias
F-primário: AAACTCAAAGGAATTGACGGGG
16S rRNA
205 bp
[17]
R-primário: TTGCGCTCGTTGCGGGACT
Probe:. FAM-CTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA-BHQ
Fusobacterium spp
*
F-primário: CGCAGAAGGTGAAAGTCCTGTAT
23S r RNA
101 bp
[18]
R-primário: TGGTCCTCACTGATTCACACAGA
Probe: FAM . - CTTTGCTCCCAAGTAACATG GAACACGA-BHQ
Prevotella
spp *
F-primário: ACCAGCCAAGTAGCGTGCA
16S rRNA
153 bp
[19]
R-primário: TGGACCTTCCGTATTACCGC
Probe: lias AATAAGGACCGGCTAATTCC GTGCCAG -BHQ
* a cobertura de espécies é fornecida nos relatórios originais
para verificar se há especificidade, sequências de 'primers foram primeiro explodiu contra o banco de dados de sequências de eubacterianas no Centro Nacional de Informações sobre Biotecnologia (NCBI.; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/index.cgi?LINK_LOC=BlastHome). Em seguida, cada conjunto foi testado num SYBR Green-PCR em tempo real de ensaio contra uma amostra de DNA subgengival reunida a partir de 5 pacientes com periodontite, seguido de análise da curva de dissociação. Um conjunto de iniciadores foi considerado como sendo específicos, se tal resultou num único pico de dissociação que é idêntica à do pico do padrão positivo.
Cada reacção constituída por 10 uL mastermix com ROX (Primerdesign, Reino Unido), 1 iniciadores Pl /mistura de sonda, DNA 5 jul modelo (ou padrão positivo), e 4 mL de água PCR-grade; todas as corridas foram realizadas em um 7000 em tempo real plataforma de PCR ABI (Applied Biosystems, EUA) utilizando o seguinte programa: activação inicial da enzima a 95 ° C durante 10 min, seguido de 40 ciclos de desnaturação a 95 ° C durante 15 segundos e têmpera /extensão a 60 ° C durante 1 min. Os dados foram adquiridos através do canal FAM conta
absolutos, em cópias /reacção, foram calculados utilizando as curvas padrão.; estes foram, em seguida, convertido em cópias /amostra multiplicando por 20 (desde 5 ul do extracto foi incluída na reacção). contagem relativa das espécies de teste /gêneros foram então calculada como bactérias totais%.
análise estatística
Examinando dados clínicos e microbiológicos com a estatística de Kolmogorov-Smirnov revelou distribuição não-normal. Consequentemente, eles foram resumidas como medianas e intervalos interquartis (IQR). Significância das diferenças entre locais saudáveis e periodontite em termos de contagens absolutas (log-transformados) e relativos foram procurados utilizando o teste de classificações de Wilcoxon-assinado. correcção de Bonferroni para comparações múltiplas foi aplicado de modo que um valor de p de 0,0063 ajustado foi utilizado para descrever diferença significativa. Todos os testes foram realizados com o programa SPSS 17 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).
Resultados
Os ensaios de PCR quantitativo
Todos os oito ensaios de PCR em tempo real mostrou excelente linearidade (R 2 ≥ 0,99) ao longo de uma gama dinâmica de 5-10 6 cópias /reacção (Figura 1), obtendo uma sensibilidade de 100 cópias /amostra (dada a extracção do ADN foi de 100% de eficiência). Todos os conjuntos de iniciadores produziu picos de dissociação individuais nos ensaios de SYBR verde que correspondiam aos picos do padrão (Figura 2). tiros Figura 1 Tela de ABI 7000 de saída do software SDS mostrando curvas padrão para dois dos primers /conjuntos de sondas utilizadas neste estudo (T. denticola para a esquerda e uma .actinomycetemcomitans à direita). As diluições em série do controlo positivo à base de plasmídeo foram preparadas com concentrações finais de 5-106 cópias /reacção. Os ensaios foram executados como descrito no texto. As curvas foram obtidas através da representação gráfica log Quantidade de cópias de ADN contra os valores do ciclo limiar (Ct).
Figura 2 Dissociação análise da curva de amplicons produzidos pelo ensaio de cada um dos pares de iniciadores utilizados no estudo contra a amostra de ADN subgengival combinada de cinco indivíduos com periodontite usando um ensaio de PCR Syber verde. Cada par resultou em apenas um pico indicando amplificação específica.
Conclusões gerais microbiológicos
todas as espécies testadas /géneros foram detectados em 100% das amostras excepto P. gingivalis
e A. actinomycetemcomitans
, para os quais as taxas de detecção foram de 97,5% e 67,5%, respectivamente. Os dados gerais contagens absolutas e relativas são apresentados na Figura 3. O registo médio contagem absoluta foi 8,69 para as bactérias totais e na faixa de 2,41-6,53 para espécies individuais, sendo mais elevado para fusobactérias e menor para A. actinomycetemcomitans
. contagem mediana relativa (% bactérias totais) foram na gama de 0,001-0,77%, mais uma vez sendo mais elevado para fusobactérias e menor para A. actinomycetemcomitans
. Total de patógenos (soma de todas as 7 espécies /gêneros) constituíram 2,1% (IQR 1,36-3,87%). Nenhuma espécie foi detectada no maior do que 1% em 75% das amostras. A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis
e P. micra
Nunca foram detectados em mais de 1%, enquanto fusobactérias, prevotellae, T. denticola
e T. forsythia
chegaram tão longe quanto 5,3%, 2,1%, 2,3% e 4,1%, respectivamente, em valores extremos. Figura 3 parcelas caixa mostrando a mediana e intervalo interquartil (IQR) da geral absoluta (à esquerda) e relativo (à direita) contagens de espécies de ensaio /gêneros nas amostras de biofilme subgengival. As barras de erro representam os dados no prazo de 1,5 IQR acima Q3 (terceiro quartil) e abaixo Q1 (primeiro quartil). Círculos e estrelas são discrepantes. Aa; A. actinomycetemcomitans
; Fuso: fusobactérias; Pg: P. gingivalis
; Pr: prevotellae; Pm: Parvimonas micra
; TF: T. forsythia
; Td:. T. denticola
análise não paramétrica (Correlação de Spearman) revelou uma série de significativas correlações entre espécies. Com base nas contagens de log, e depois de realizar correção de Bonferroni para comparações múltiplas (P ≤ 0,002), fusobactérias mostrou correlação significativa com prevotellae e P. micra
(r = 0,71 e 0,53, respectivamente), enquanto T. denticola significativamente
correlacionada com T. forsythia
(r = 0,72). Quase os mesmos padrões de associações foram encontrados com base em proporções, mas a correlação entre fusobactérias e P. micra
desapareceu. Tomando um nível menos conservadora de significância (P ≤ 0,01), T. forsythia
também se correlacionou positivamente com fusobactérias e prevotellae.
Periodontite vs. locais saudáveis
As contagens de log absolutos das espécies de ensaio /géneros nas amostras de placa subgengival dos locais saudáveis e periodontite são apresentados na Tabela 3. Mais ADN bacteriano total foi recuperada a partir dos sítios de periodontite do que a partir dos locais saudáveis embora isto não suportar o ajuste para múltiplas comparações. . Todas as espécies de teste /gêneros, com exceção de A. actinomycetemcomitans e Fusobacterium spp
,
também estavam presentes em níveis mais elevados em locais com destruição periodontal; no entanto, apenas P. micra Comprar e T. forsythia
mantido diferença significativa após correção para comparações múltiplas (P ≤ 0,0063) .table 3 mediana (intervalo interquartil) log contagens da espécie de ensaio /gêneros na placa subgengival do Sites saudáveis e periodontite
locais Espécies
saudáveis (n = 20)
periodontite locais (n = 20)
P
total de bactérias
8,65 (8,46-8,83)
8,78 (8,52-9,10)
0,04
A. actinomycetemcomitans
2,42 (0,00-3,50)
2,40 (0,00-307)
0,67
Fusobacterium spp.
6,62 (5,82-6,85)
6,37 (6,00-7,03)
0,08
Prevotella spp.
6,20 (5,65-6,65)
6,42 (6,07-6,80)
0,02
P. micra
4,33 (3,78-5,21 )
5,40 (4,92-5,65)
0,0001 *
P. gingivalis
3,90 (2,56-5,70)
5,52 (3,07-6,04)
0,04
T. forsythia
6,09 (5,24-6,47)
6,71 (5,97-6,91)
0,006 *
T. denticola
5,47 (4,10-6,26)
6,16 (5,71 -6,76)
0,02
* estatisticamente significativa após ajuste para comparações múltiplas (P
≤ 0,0063); Teste de Wilcoxon.
Através da contagem relativos (proporções), todas as espécies de ensaio, exceto A. actinomycetemcomitans
, estavam presentes em proporções mais elevadas nos sítios de periodontite em comparação com os locais saudáveis (Tabela 4). No entanto, as diferenças só foram significativas para P. micra Comprar e T. denticola
(P ≤ 0,0063), que mostrou 3,39 e 1,33 vezes maior mediana, respectivamente, em locais com destruição periodontal em comparação com sites com nenhuma destruição. P. micra
esteve presente na contagem relativos mais elevados em comparação com periodontite locais saudáveis em todos os 4 mediano (intervalo interquartil) subjects.Table contagens relativas (% das bactérias totais) da espécie de ensaio /gêneros na placa subgengival da saúde e periodontite Sites
locais Espécies
saudáveis (n = 20)
periodontite locais (n = 20)
Dobre diferença
P
A. actinomycetemcomitans
0,001 (0,000-0,020)
0,001 (,000-,005)
0,07
0,12
Fusobacterium spp.
0,789 (0,238-1,205)
0,701 (0,250-1,029)
0,81
0,79
Prevotella spp.
0.360 (,222-,903)
0,394 (0,228-0,751)
1,23
0,50
P. micra
0,009 (,003-,022)
0,031 (0,014-0,081)
3,39
0,0001 *
P. gingivalis
0,004 (0,0001-0,0611)
0,068 (,0001-,219)
1,97
0,156
T. forsythia
0,302 (0,055-0,541)
0,425 (0,170-1,50 )
0,86
0,08
T. denticola
0,092 (0,007-0,438)
0,338 ( 0,126-0,613)
1,33
0,006 *
* estatisticamente significativa após ajuste para comparações múltiplas (P
≤ 0,0063); Teste de Wilcoxon.
Discussão
Estudos do Oriente Médio são limitados aqueles que avaliaram o efeito da higiene oral tradicional, como miswak, ou certos hábitos, como qat mastigação, sobre os níveis de patógenos periodontais [17, 20 , 21]; nenhum estudo até o momento avaliou que patógenos periodontais são particularmente associados com periodontite em uma população árabe. O estudo comparou a contagem de 7 agentes patogénicos putativos entre locais saudáveis e doentes em pacientes com periodontite crônica moderada a grave, utilizando PCR em tempo real. Apesar da vantagem deste técnicas (sensibilidade e possibilidade de quantificação relativa), um número limitado de estudos usou-o no estudo da microbiologia da periodontite e menos ainda utilizada a quantificação relativa para fazer comparações entre a saúde e doença. locais saudáveis dentro dos mesmos assuntos, em vez de indivíduos saudáveis foram utilizados como controle para evitar os efeitos das variações inter-individuais em que não sejam composição microbiana fatores. No entanto, incluindo indivíduos saudáveis como controles adicionais teria permitido para mais comparações e uma visão mais ampla das diferenças na composição microbiana entre a saúde periodontal e doença. Portanto, este pode ser considerado como uma limitação do estudo atual. Outra limitação é que o sangramento à sondagem não foi gravado, embora tenha sido anteriormente demonstrado ser um importante variável clínica. Além disso, enquanto os patógenos mais importantes foram testados, o painel poderia ter incluído mais espécies particularmente os patógenos mais recentes, como Filifactor alocis
, synergistetes orais e TM7. Contagens
absolutos foram relatados em cópias de DNA em vez de números celulares porque o número de cópias do gene alvo por genoma, particularmente 16S rRNA gene, varia de uma espécie para outra, e não é conhecido para alguns deles. Isto implica que as contagens bacterianas reais para algumas das espécies testadas /gêneros são menos do que as contagens relatados no estudo. Ele, no entanto, não influencia na validade das comparações entre os locais ou pacientes. Teoricamente, tão pouco como uma única cópia do gene por reacção pode ser detectado por PCR em tempo real; No entanto, na prática, isto não é geralmente possível. Alguns dos estudos anteriores sobre organismos patogénicos periodontais foram, de facto, não é clara quanto ao facto de o limite de detecção inferior referida foi por reacção ou por amostra, mas pode-se concluir que, pelo menos, 100 cópias de DNA por reacção poderia ser detectada [11, 22] . No entanto, um limite de detecção tão baixo como 1,6 células por reacção tem sido relatada [9, 10], que é comparável à sensibilidade dos ensaios de PCR-Q neste estudo (5 cópias /reacção). A elevada sensibilidade de Q-PCR provavelmente explica as taxas de detecção mais elevadas de agentes patogénicos observados em estudos que utilizaram esta técnica em comparação com aqueles encontrados com as técnicas de cultura ou de hibridação ADN-ADN.
As contagens medianas de log de bactérias totais, bem como de alguns as espécies de ensaio /gêneros neste estudo são 1-3 log superiores aos relatados pela maioria dos estudos prévios que utilizaram PCR em tempo real [9, 10, 12, 22]. Em contraste, Lyons et al. [11] relataram contagens tão elevadas quanto 10 14 e 10 12 para o total de bactérias e P. gingivalis
, respectivamente, o que soa implausível. Embora essas diferenças podem ser atribuídas a variações na amostragem e extracção de ADN eficiência, imprecisões na preparação de curvas padrão, provavelmente, são responsáveis por grande parte delas. Curvas preparados utilizando diluições em série de células bacterianas ou de extracto de ADN genómico, como é feito na maior parte dos estudos anteriores, pode não ser tão preciso quanto aqueles gerados utilizando plasmídeos. Por outro lado, a polarização quantificação devido a conformação do ADN de plasmídeo tenha sido relatado recentemente, especialmente com plasmídeos circulares [23]. No entanto, uma vez que os valores deste estudo também estão próximos aos obtidos anteriormente por hibridação DNA-DNA quadriculado [24], que pode ser assumido ser precisa o suficiente. Tours A abundância relativa de T. denticola Comprar e T. forsythia
no presente estudo são muito semelhantes aos relatados para uma população japonesa usando uma técnica de quantificação semelhante [12]. Neste último estudo, no entanto, P. gingivalis
e Prevotella intermedia
foram apresentadas em proporções muito maiores e mostrou associação significativa com a doença que, em contraste com os resultados atuais. Usando placa de verificador hibridação DNA-DNA, proporções muito mais elevadas dos membros do complexo vermelho foram relatados em pacientes com periodontite crônica de EUA, Brasil, Chile e Suécia [13] em comparação com as contagens relativas descritos aqui. No entanto, isso pode ser simplesmente justificada pelo fato de que proporções na técnica de placa de verificador são calculados através da normalização contagens absolutas de cada espécie para a contagem total das 40 espécies de sonda utilizados em vez de bactérias totais como foi feito no estudo atual.
Relativa dados de quantificação mostram que, embora patógenos periodontais estavam presentes em proporções significativamente maiores em sites de periodontite em comparação com sites saudáveis, eles ainda constituem uma minoria de microbiota subgengival. Esta é, no entanto, não é surpreendente uma vez que a avaliação de estudos baseados em cultivo anteriores e estudos mais recentes, empregando técnicas moleculares claramente revela que patógenos periodontais, em particular os membros do complexo vermelho, foram quase sempre detectado em baixa abundância [3, 24, 25] . O que não foi tratada de forma adequada, por outro lado, é a forma como estes agentes patogénicos podem causar periodontite em tais baixa abundância. Um, vista interessante atualmente em evolução é que a baixa abundância patógenos periodontais orquestrar periodontite induzindo uma dysbiotic comunidade microbiana "patogênico", que por sua vez medeia destruição óssea [26]. Isto é pensado resultar da capacidade destes patogénios subverter alguns componentes da resposta do hospedeiro, em vez de actuar directamente como bactérias pró-inflamatórias como foi muito recentemente demonstrado para P. gingivalis
in vitro [27]. Assim, baixas abundantes patógenos periodontais são requeridas para funcionar como patógenos Keystone, uma hipótese que desafia o papel dos membros do complexo vermelho como patógenos convencionais [28].
O presente estudo não mostrou uma associação entre P. gingivalis
e destruição periodontal, que é muito difícil para se defender contra a esmagadora evidência existente. No entanto, isso pode ser simplesmente uma falha para detectar associação devido à falta de energia adequada existente, especialmente que não havia uma diferença significativa na contagem absoluta ao nível 0,05. Por outro lado, dada a natureza polimicrobiana da periodontite, e tendo em conta a nova hipótese Keystone patógeno, também é plausível propor que outros membros da equipe de patogenicidade pode, em certas circunstâncias, assumir o papel de P. gingivalis
como patógeno de distorção. Na verdade, P. gingivalis
nem sempre mostrou a associação mais forte com periodontite [3, 29, 30]. No estudo atual, T. denticola Comprar e T. forsythia
, ambos membros do complexo vermelho, mostrou associação significativa com periodontite, o que é consistente com a literatura. No entanto, P. micra
(anteriormente conhecido como Peptostreptococcos micros
) mostrou a associação mais forte com estar presente a um maior absolutos e relativos contagens em sítios com periodontite em todos os sujeitos do estudo da doença. Esta espécie é um membro do complexo de laranja microbiana [6], e não há uma evidência em expansão sobre o seu papel, juntamente com outro peptostreptococci, como um agente patogénico periodontal [3, 29, 31, 32].
Conclusão
apesar de sua presença em muito baixas contagens relativos, P. micra
mostrou a associação mais forte com a destruição periodontal, que é sugestivo de um papel potencial como agente patogénico da distorção no lugar do P. gingivalis
. No entanto, este deve ser validado em um estudo em maior escala para que possa ser reivindicada para representar variações étnicas na associação de patógenos de periodontite.
Declarações
Agradecimentos
Este estudo foi parcialmente financiado pela Al-Saeed Foundation de Ciência e Tecnologia. Todo o trabalho de laboratório foi realizado no Laboratório Molecular Research, UST, Sana'a, Yemen. Nós gostaríamos de agradecer ao Dr. Mohammed Sultan por sua ajuda com a coleta de amostras. 'Arquivos enviados originais para imagens
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