Abstract
Fundo
alterações patológicas nos tecidos periodontais são mediados pela interação entre microrganismos e da acolher resposta imuno-inflamatória. A hiperglicemia pode interferir com este processo. O objetivo deste estudo foi comparar os níveis de 27 moléculas inflamatórias no fluido gengival (GCF) de pacientes com diabetes tipo 2, com e sem periodontite crônica e de indivíduos com periodontite crônica sem diabetes. Uma correlação putativa entre a hemoglobina glicosilada (HbA1c) e os níveis de moléculas inflamatórias também foi investigado
Métodos
A população foi composta por um total de 108 indivíduos, estratificados em:. 54 com diabetes tipo 2 e periodontite crônica (DM + CP), 30 com periodontite crônica (PB) e 24 com diabetes tipo 2 (DM). Os participantes foram entrevistados com o auxílio de questionário estruturado. parâmetros periodontais (placa bacteriana, sangramento à sondagem e profundidade da bolsa periodontal) foram registrados. Os níveis de GCF de moléculas inflamatórias 27 foram medidos utilizando multiplex de imunoensaio de micro-esferas. Um teste de hemoglobina glicosilada (HbA1c) foi realizada para pacientes com diabetes por cromatografia de afinidade de boronato.
Resultados
Após o ajuste para possíveis fatores de confusão, o grupo DM + CP tinham níveis mais altos de IL-8 e MIP-1β, e menor os níveis de TNF-α, IL-4, IFN-γ, RANTES e IL-7 em comparação com o grupo CP. Além disso, o grupo DM + CP tinham níveis mais baixos de IL-6, IL-7 e G-CSF em comparação com o grupo DM. O grupo DM tinham níveis mais elevados de IL-10, o VEGF, e G-CSF em comparação com o grupo CP. Os níveis de MIP-1α e FGF foram menores em pacientes com diabetes (independentemente de sua condição periodontal) do que em indivíduos com periodontite crônica sem diabetes. pacientes com diabetes (DM + CP e DM) tiveram maior proporção de Th-2 /Th-1 comparado ao grupo CP. HbA1c foi positivamente correlacionada com as citocinas pró-inflamatórias (coeficiente de correlação de Pearson = 0,27, valor P: 0,02)
Conclusão
diabetes tipo 2 e periodontite crônica pode influenciar os níveis do GCF de moléculas inflamatórias sinergicamente, bem como de forma independente.. diabetes tipo 2 foi associada com alta Th 2-ratio /Th-1, e modulou a expressão local de moléculas envolvidas nos processos anti-inflamatórias e de cura.
Palavras-chave
Diabetes mellitus periodontite crônica inflamação gengival citocinas de fluido crevicular fundo
Diabetes mellitus representa um grupo heterogêneo de distúrbios metabólicos em que os níveis de glicose no sangue elevados resultam em distúrbios do metabolismo de carboidratos, gorduras e proteínas [1]. A forma mais comum é o diabetes tipo 2 [2]. A diabetes é uma das principais preocupações de saúde pública com 380 milhões de pessoas que sofrem da doença em todo o mundo, e cerca de 80% dos pacientes são de países de renda baixa e média [3]. Espera-se que a África vai assumir a liderança em termos de maior aumento proporcional em adultos com diabetes em 2030 [4]. A prevalência de diabetes no Sudão, como em muitos outros países de baixa renda, está aumentando em proporções epidêmicas [5]. Em 2014, a prevalência da doença no Sudão foi cerca de 18% [3], que classifica o Sudão entre os países com alta prevalência de diabetes na África e no mundo. Também reflete a mudança no estilo de vida e o movimento de urbanização da população.
Hiperglicemia crônica está associada a complicações irreversíveis, como a nefropatia, a retinopatia, neuropatia, doenças cardiovasculares, doenças vasculares periféricas, cicatrização demorada e doenças periodontais [6]. As doenças periodontais, incluindo a forma reversível (gengivite), são altamente prevalentes e afectar até 90% dos adultos no mundo [7]. periodontite crónica é caracterizada pela migração apical da ligação epitelial acompanhada por perda de tecido conjuntivo e do osso alveolar [8]. Estas alterações são mediadas pela interacção entre agentes patogénicos e a resposta imuno-inflamatória do hospedeiro [9]. Apesar de patógenos periodontais são consideradas como o fator iniciativa da doença, [10] destruição tecidual na periodontite crônica é a consequência da resposta do hospedeiro a esses patógenos [11].
O mecanismo exato pelo qual o diabetes afeta os tecidos periodontais não está totalmente elucidado [12]. Uma resposta imuno-inflamatória alterada para agentes patogénicos bacterianos tem sido sugerido [11]. A hiperglicemia pode afectar os tecidos periodontais, aumentando o stress oxidativo, como resultado do desequilíbrio entre as espécies reactivas de oxigénio e antioxidantes, o que pode eventualmente levar a uma acumulação de produtos finais de glicação avançada (AGE) [13]. A ligação de idade para os seus receptores (RAGE) desencadeia eventos intra-celular que melhoram a produção de citocinas pró-inflamatórias, quimiocinas e moléculas de adesão celular [14]. A hiperglicemia pode ser avaliada pela medição da concentração de hemoglobina glicosilada (HbA1c), que reflecte os níveis médios de glicose sobre as 8-12 semanas anteriores [15].
Um meio de investigar o estado inflamatório local da cavidade oral é por análise de fluido crevicular gengival (GCF), uma abordagem não invasiva para avaliar a presença ou ausência de várias moléculas inflamatórias [16]. GCF é um transudato ou um exsudato inflamatório que pode ser recolhida a partir do sulco gengival em torno dos dentes. Contém componentes do sangue circulante, tecidos locais e, mais importante, as moléculas inflamatórias derivados do hospedeiro [16, 17].
A maioria dos estudos de GCF moléculas inflamatórias em indivíduos com diabetes têm sido geralmente baseados em amostras sujeitas pequenas e investigação de um número limitado de moléculas inflamatórias, com resultados inconclusivos [12]. análise multiplex de moléculas inflamatórias, em que um grande número de moléculas inflamatórias podem ser investigados ao mesmo tempo, iria facilitar a compreensão do processo inflamatório envolvido em ambas as diabetes e doenças periodontais.
O objectivo deste estudo foi investigar o efeito de diabetes tipo 2 na expressão local de moléculas inflamatórias envolvidas na inflamação periodontal e cura comparando os níveis do GCF de 27 moléculas inflamatórias em pacientes com diabetes tipo 2, com e sem periodontite crônica, e em indivíduos com periodontite crônica sem diabetes. Uma correlação putativa entre HbA1c e as moléculas em estudo, também foi explorada. Foi testada a hipótese de que a diabetes tipo 2 influencia negativamente a expressão local das moléculas inflamatórias sob investigação.
Métodos
Desenho do estudo e participantes
No total, 108 indivíduos foram incluídos no estudo, representando um subconjunto selecionado aleatoriamente de 461 participantes recrutados para um estudo prévio de Mohamed et al. [18]. Os indivíduos foram estratificados em três grupos: 54 com diabetes tipo 2 e periodontite crônica (DM + CP), 30 com periodontite crônica (CP) e 24 com diabetes tipo 2 (DM). Os participantes do estudo tinham idades entre 24-70 anos. pacientes com diabetes foram recrutados O Jaber Abol'ez Diabetes Center em Cartum-Sudão. Diabetes foi diagnosticada por médicos especialistas no centro de acordo com os critérios da American Diabetes Association [19]. amostras de sangue inteiro obtido a partir de pacientes com diabetes foram analisados para HbA1c por cromatografia de afinidade de boronato usando um kit disponível comercialmente (LabonaCheck
™ analisador A1c) [20]. O grupo CP foi recrutado a partir da clínica odontológica ambulatorial no Hospital de Ensino Cartum Dental. Recrutamento de participantes do estudo e critérios de elegibilidade para a inscrição foram descritos anteriormente [18]. Resumidamente, os critérios para a inscrição foram (i), ser diagnosticado com diabetes tipo 2 durante mais de um ano e assistir a uma clínica especializada diabetes -para pacientes com a diabetes (ii), tendo pelo menos 10 dentes remanescentes (iii), nenhum antibiótico, nenhum medicamento anti-inflamatório não esteróide e /ou não-esteróide usado durante as últimas 3 semanas (IV), não tratados com quimioterapia imunossupressora, nenhuma doença aguda atual, nenhum tratamento periodontal profissional recebido durante os últimos 6 meses e nenhuma gravidez ou lactação em curso. Os dados demográficos foram obtidos dos participantes do estudo, por meio de um questionário estruturado.
O protocolo do estudo foi aprovado pelo Ministério da Saúde no Sudão e A Comissão de Ética Norwegian Research da Universidade de Bergen (2012/1470 /REK Vest) . Os participantes do estudo foram recrutados entre Julho e Dezembro de 2012. consentimento informado foi obtido de cada participante, após os objetivos do projeto, as etapas do exame clínico bucal e os procedimentos de amostragem tinha sido explicado. Os participantes foram informados do seu diagnóstico dental e encaminhados para tratamento odontológico adequado, se indicado.
Exame periodontal clínica
Todas as avaliações clínicas, alocações de grupo e de seleção de amostragem local foram realizadas por um único, examinador calibrado (HGM). O exame periodontal incluiu todos os dentes, exceto os 3 molares rd utilizando uma sonda periodontal codificados por cores (N22, 2-4-6-8-10-12 marcações mm), uma Nabors sonda de bifurcação com código de cores (NAB2, 3 -6-9-12 marcações mm), cureta, espelho, sonda, pinças e rolos de algodão. O exame clínico composto avaliação placa dentária por meio do Índice Silness e Loe [21], sangramento à sondagem (BOP), marcado como presente ou ausente, e profundidade de sondagem (medido a partir da margem gengival até a base da bolsa periodontal em milímetros) a quatro casas de cada dente (mesial, distal, bucal e lingual). Os participantes foram diagnosticados como portadores de periodontite crônica se tivessem pelo menos dois sítios com sangramento bolsas de ≥ 4 mm (não no mesmo dente) [22, 23]. O exame oral foi repetido para 20 participantes escolhidos aleatoriamente dentro de 2 semanas. confiabilidade intra-examinador foi avaliada pelo coeficiente kappa de Cohen [24]. valor Kappa (κ) foi de 0,88 para periodontite crônica (sim /não).
amostragem GCF
amostras do GCF foram recolhidos usando tiras Perio-papel (tiras de recolha de fluidos PERIOPAPER® gengival, Oraflow Inc., New York, EUA ). Quatro amostras, cada uma representando um quadrante, foram coletadas de cada participante. A tira foi inserida no local do sulco mésio /de bolso do 1 r molar. Se ausente, o 2 nd molar, 2 nd pré-molar ou 1 st pré-molar foi amostrado, respectivamente. Quadrantes sem dentes posteriores foram excluídas da amostragem. Após o biofilme supra-gengival tinha sido removido com pelotas de algodão estéril, os locais foram secos e isolado com rolos de algodão. As tiras de papel foram inseridos 2 mm no sulco /bolso e deixado no local por 30 s. Tiras que foram visualmente avaliadas como contaminados com sangue ou saliva foram descartados. As tiras foram imediatamente 4 reunidas em um tubo, rotulados e armazenados em azoto líquido para posterior análise.
Extracção de proteína e quantificação
Para a extracção de proteínas, tampão Tween (230 ul) foi adicionado a cada um dos tubos contendo o 4 tiras. Os tubos foram agitados durante 30 min e, em seguida, centrifugada durante 10 min a 4 ° C e 1400 rpm. A proteína extraída foi quantificada utilizando um kit comercialmente disponível e seguindo as instruções do fabricante (Pierce ™ BCA Protein Assay Kit, Thermo Scientific, Rockford, EUA). A absorvância foi medida a 560 nm num leitor de placas (Fluostar OPTIMA- Labtech BMG, a Alemanha). proteína total por amostra (4 tiras) foi calculado em microgramas (mg).
Análise e agrupamento de moléculas inflamatórias
Após a extracção de proteínas, as amostras do GCF (20 l cada) foram processados por imunoensaio multiplex contendo fluorescentes tingidos microesferas conjugadas com anticorpo monoclonal específico para moléculas inflamatórias 27 (Bio-Plex Assay citocinas humano; Bio-Rad Inc., Hercules, CA, EUA) [25]. As seguintes moléculas foram investigados: IL-1β, IL-1ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, Eotaxina, factor de Crescimento de Fibroblastos básico
(FGF), factor de estimulação de granulócitos Colony
(G-CSF), de granulócitos-monócitos factor de estimulação de colónias de
(GM- CSF), o interferão-γ
(INF-γ), Interferão-10 induzível Proteína
(IP-10), quimio-atractiva de monócitos Proteína-1
